简介:目的探讨应用实时荧光定量PCR技术检测丙型肝炎患者血清抗-HCV及患者血清HCV-DNA。方法选取我院2009年1月至2010年10月检查丙型肝炎患者92例,ELISA法测定血清抗-HCV水平,实时荧光定量监测患者血清HCV-DNA水平。结果收治92例丙型肝炎检查患者,ELISA法检测,抗-HCV阳性64例,抗-HCV阴性28例。RT-PCR测定64例抗-HCV阳性患者中HCV-RNA阳性57例,检出率为89.02%,28例抗-HCV阴性患者中HCV-RNA阳性2例,检出率为7.14%。结论实时荧光定量PCR检测血清HCV-DNA较ELISA法测定血清抗-HCV更为直接、更为准确,样本检测重复性好。
简介:目的应用PCR检验技术在口岸进行鼠疫检测,以提高鼠疫诊断的准确性和灵敏度,建立适合于口岸鼠疫检测的快速诊断方法,提高鼠疫检测水平.方法首先,根据口岸地区样品的特点确定相应PCR检测方法,然后对样品进行PCR检测、鼠疫细菌学检验和反向间接血球凝集试验.结果形成了一套适合于口岸地区鼠疫PCR检测的方法,灵敏度为7cfu的鼠疫菌.PCR反应体系中以dUTP代替DTTp,加入UDG酶防止产物污染,对特异性和敏感性无影响.对在口岸地区采集的鼠类标本111份、进口旱獭皮张500份进行了PCR检测,并分别进行鼠疫细菌学、反向间接血球凝集试验.PCR检测出3份阳性鼠类标本,与鼠疫细菌学检验结果一致:对进口旱獭皮张的PCR检测和反向间接血球凝集试验均为阴性.结论经实验研究建立了一套完整的鼠疫PCR检测方法,本方法特异性和敏感性强、操作简便、快捷、成本较低,适合在口岸地区推广应用.
简介:目的建立临床常见念珠菌的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测技术。方法用真菌通用引物ITS1-ITS4分别扩增白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和近平滑念珠菌5种菌株的ITS1-5.8SrDNA-ITS2区域,然后对扩增产物进行MspⅠ酶切分析。结果5种念珠菌标准菌株经PCR-RFLP分析后产生了5种不同的特异性条带,成功地将临床上常见的5种念珠菌区分开来。应用此方法鉴定了60株临床分离的念珠菌,其PCR-RFLP结果与标准菌株一致,测序结果进一步证实了此方法的可靠性。结论PCR-RFLP检测技术具有快速、稳定、特异、准确性高的特点,在常见致病念珠菌鉴定方面具有良好的临床应用前景。
简介:摘要目的检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA拷贝数,分析乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)与血清免疫标志物的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清样本中HBV-DNA含量;同时酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBV血清标志物(HBVM),并对检测结果进行分析。结果在HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)和HBsAg(+)HBeAg(+)组HBV-DNA阳性率分别为96.1%(298/310)和96.6%(28/29),病毒含量为1.85×108copies/ml;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)和HBsAg(+)HBcAb(+)组患者血清HBV-DNA阳性率分别为44.2%(80/181)和82.9%(31/41),病毒含量为4.8×106copies/ml。血清中HBeAg与HBVDNA含量密切相关。结论荧光定量PCR在乙肝的诊断、判断传染性强弱及评价抗病毒治疗效果方面具有较大的临床应用价值。