简介：摘要目的探讨粪便多配体聚糖2(SDC2)基因甲基化在结直肠恶性肿瘤(CRC)进展中的相关性。方法收集2018年4月至2019年7月上海交通大学医学院附属松江医院经结肠镜检查(和/或)病理诊断的133例受试者，其中44例CRC、61例进展期腺瘤(AA)和28例对照者(CRC和AA均为阴性者)为研究对象。每例收集两份粪便标本，采用前瞻性双盲配对法对标本分别进行一次实时定量SDC2基因甲基化特异性聚合酶链反应(qMSP)和粪便隐血免疫化学法(FIT)检测，并比较两种方法的敏感度和特异度。结合临床术后病理标本及分期，计数资料采用Fisher确切概率检验分析，计量资料使用秩和检验Kruskal-Wallis(3组之间)和Mann-Whitney法(两组之间)分析；采用Spearman相关分析CRC的SDC2甲基化Ct值与肿瘤直径、分期、浸润深度和淋巴结转移的相关性。结果在CRC组和AA组中SDC2甲基化敏感度均显著高于FIT(0.909比0.614，P<0.05和0.525比0.164，P<0.01)，差异均有统计学意义；CRC组、AA组和对照组的SDC2甲基化Ct值M(P25～P75)，35.02(31.32～37.87)，38.90(37.26～51.00)和51.00(40.22～51.00)，CRC组SDC2甲基化Ct值显著低于AA组，AA组SDC2甲基化Ct值显著低于对照组(Z＝-5.213、-4.048，P<0.01)，差异均有统计学意义；单变量相关分析提示，CRC组SDC2的Ct值与肿瘤直径、分期、浸润深度和淋巴结转移呈负相关(r＝-0.422、-0.437、-0.371、-0.417，P<0.05)，与年龄呈正相关(r＝0.308，P<0.05)，差异均有统计学意义。结论粪便SDC2甲基化在结直肠肿瘤检查的敏感度显著高于FIT，SDC2甲基化程度与CRC肿瘤进展程度呈正相关。

简介：摘要目的分析结肠癌全基因组DNA差异甲基化位点（DMS）及差异甲基化基因（DMG）水平，寻找结肠癌相关甲基化基因。方法在山东大学齐鲁医院结肠癌组织标本库中，随机数表法抽取5份结肠癌组织和配对癌旁组织，采用甲基化修饰依赖性内切酶测序法（Methyl-Rad）进行全基因组DNA甲基化测序，Edge R方法筛选DMS，并比较基因组不同功能元件上DMS的分布，对DMS绘制组间甲基化水平差异热图；进一步筛选DMG，对DMG进行Gene Ontology （GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG）功能富集分析。同时，下载肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库RNA测序数据分析差异表达RNA，将DMG和差异表达RNA共分析获得潜在的结肠癌相关甲基化基因，并采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和焦磷酸测序方法在30对结肠癌和癌旁组织中进行结肠癌相关甲基化基因的双向验证。基因的表达量和甲基化水平在结肠癌肿瘤组织和癌旁组织的差异采用配对样本的秩和检验进行统计学分析。结果共筛选出132 999个 CCGG和8 487个CCWGG DMS，其中CCGG和CCWGG的DMS主要分布在内含子区，比例分别为50.47%（67 127/132 999）和48.79%（4 141/8 487）。共发现1 359个CCGG和1 052个CCWGG DMG，对DMG进行GO和KEGG功能富集分析。DMG和差异表达RNA共分析发现113个结肠癌相关基因，其中14个基因在结肠癌组织中呈高甲基化且低表达，99个基因呈低甲基化且高表达。RT-qPCR和焦磷酸测序实验证实MAFA-AS1和MS4A18在结肠癌组织中呈高甲基化且低表达，而SMAD1-AS2、ARHGEF3-AS1和LOC440084则呈低甲基化且高表达，与测序结果一致（P<0.05）。结论DNA甲基化为结肠癌提供了潜在的生物标志物，并为结肠癌发生发展的分子机制提供了新的思路。

简介：结直肠癌（CRC）的早期诊断具有重要临床意义。外周血SEPT9基因甲基化在大量研究中被证实是CRC的特异性生物学标记物,敏感性和特异性均较高,较之目前常用的粪便隐血试验、血清肿瘤标记物和结肠镜筛查具有一定优势,但在筛查腺瘤、息肉等癌前病变中的应用价值有限,用于评估CRC术后复发和放化疗效果的潜力则尚需进一步临床验证。本文就外周血SEPT9基因甲基化检测在CRC筛查中的应用进展作一综述。

简介：本研究通过对急性白血病病人及体外肿瘤细胞株的DNA甲基化及基因表达的实验,探讨死亡相关蛋白激酶（death-associatedproteinkinase,DAPK）基因在急性白血病中的表达情况及其启动子区域甲基化的状态,并分析两者之间的相关程度.应用RT-PCR检测DAPK基因在白血病细胞及正常骨髓细胞中的表达;用巢式甲基化特异性PCR（n-MSP）法检测急性白血病患者及细胞株DAPK基因启动子甲基化状况;从第二轮巢式MSP扩增出的随机产物中挑选2个随机引物,交予专业机构克隆后进行序列分析.结果表明：DAPK基因在10例正常对照者骨髓标本中均有表达,DAPKmRNA在急性白血病病人骨髓标本中表达平均值为0.61±0.40,低于正常对照者,差异有显著性（P＜0.05）,其中52.94％（9/17例）的急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本DAPKmRNA表达降低或缺失,急性髓系白血病病人数据为41.18％（42/102）;细胞株U-937显示基因表达正常,HL-60表达缺失;102例急性髓系白血病病人骨髓标本中33例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为32.4％（33/102）;17例急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本中8例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为47％（8/17）;7例正常人骨髓标本DAPK启动子区均为非甲基化;细胞株U-937DAPK启动子区非甲基化,HL-60DAPK启动子区甲基化.ALL组与AML组患者骨髓细胞DAPKmRNA表达与其启动子甲基化均呈显著负相关（ALL组r=-0.855,P＜0.05;AML组r=-0.343,P＜0.05）,提示两者有密切的关联.结论：急性白血病患者中DAPK基因启动区甲基化与其mRNA的异常表达或失表达有关.

简介：目的探讨粪便中T淋巴细胞成熟相关蛋白（MAL）、细胞周期依赖性激酶抑制因子2A（CDKN2A）和6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其在结直肠癌和癌前病变筛查中的价值.方法收集69例结直肠癌、24例腺瘤、19例增生性息肉患者及26名健康人群的清晨粪便标本,提取其DNA并进行亚硫酸氢盐修饰处理,采用甲基化特异性PCR技术分析MAL、CDKN2A及MGMT甲基化状态,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,并比较3个基因甲基化联合检测与粪隐血试验（FOBT）的诊断敏感性.结果结直肠癌患者粪便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化率分别为78.3%、52.5%、55.1%,腺瘤患者分别为58.3%、41.7%、37.5%,增生性息肉患者分别为26.3%、15.8%、10.5%,正常对照人群分别为3.8%、0、3.8%结直肠癌和腺瘤患者3个基因甲基化水平均显著高于增生性息肉患者和正常对照人群（均P＜0.05）.3个基因甲基化联合检测诊断结直肠癌和腺瘤敏感度分别为92.8%和70.8%,明显高于FOBT的29.0%和25.0%（均P＜0.05）.3个基因甲基化状态与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关（均P＞0.05）.结论粪便中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化水平在结直肠癌和腺瘤患者中明显升高,其联合检测可望成为结直肠癌及其癌前病变筛查的非侵入性检测方法.

简介：目的检测配对盒家族基因1（PAX1）在不同宫颈病变宫颈脱落细胞中的甲基化水平，评估其作为宫颈上皮细胞癌变分子标志物的价值。方法采用焦磷酸测序法检测PAX1基因的甲基化情况。比较正常组织与低级别宫颈鳞状上皮内病变（LSIL）、高级别宫颈鳞状上皮内病变（HSIL）和宫颈癌组织（各组20例）甲基化水平的差异。并采用受试者工作特性曲线（ROC）确定癌变组与非癌变组之间的判别临界值。结果①正常宫颈组PAX1基因甲基化水平为（4．57±2．43）％，LSIL组为（3．383±2．364）％，HSIL组为（13．64±13．35）％，宫颈癌组为（26．39±18．53）％，其中正常宫颈组与LSIL组PAX1基因甲基化水平比较，差异无统计学意义（P〉0．05），其他各组间比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。②ROC曲线下面积（AUC）为0．893，提示有较高的诊断价值。取PAX1甲基化水平27％作为临界值，检测灵敏度为97．1％，特异度为85．2％。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测对于宫颈癌早期临床诊断具有潜在的诊断价值。

简介：摘要目的本研究旨在通过检测乳腺癌组织中AXIN2基因启动子区甲基化状态，分析其与乳腺癌相关危险因素、临床病理特征及mRNA表达间的关系，探讨其在临床应用中的价值。方法选取2018年1月至2019年12月在山东第一医科大学附属肥城市人民医院普外科经手术切除治疗的84例女性乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁组织，检测组织的AXIN2基因启动子的甲基化状态和mRNA表达量，使用不同浓度的甲基转移酶抑制剂（5-Azacytidine，5-Aza）处理人乳腺癌ZR-75-1细胞，且进行乳腺癌相关危险因素和临床病理特征的收集与分析。结果乳腺癌组织的AXIN2基因启动子甲基化阳性率（40.5%）显著高于癌旁组织的甲基化阳性率（19.0%）（χ2=10.401，P=0.001）。AXIN2甲基化阳性率与乳腺癌患者的初产年龄（χ2=5.467，P=0.019）、是否有人工流产史（χ2=8.372，P=0.006）有关；AXIN2甲基化阳性率与是否发生淋巴结转移（χ2=5.338，P=0.021）、ER表达状态（χ2=9.141，P=0.002）及PR表达状态（χ2=6.918，P=0.009）有关。此外，乳腺癌组织的AXIN2基因mRNA相对表达量（00.22±0.03）显著低于癌旁组织的mRNA相对表达量（0.46±0.06）（t=3.527，P<0.001）；甲基化阳性乳腺癌组织的mRNA相对表达量（0.13±0.02）显著低于甲基化阴性乳腺癌组织的mRNA相对表达量（0.29±0.04）（t=3.616，P<0.001）。ZR-75-1细胞使用5-Aza处理后，AXIN2基因mRNA相对表达量显著升高（t=3.824，P<0.001）。结论AXIN2基因启动子区DNA甲基化与乳腺癌发生机制有关，在临床中有一定应用价值。

简介：目的检测HOXA7mRNA在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者的相关性.方法采用RT-PCR法检测人胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1和SW1990细胞的HOXA7mRNA的表达水平.采用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfitesequencingPCR,BSP）和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法（combinedbisulfiterestrictionanalysis,COBRA）检测启动子区域甲基化状态.应用去甲基化药物5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC）处理各细胞株,检测处理前后细胞HOXA7mRNA表达和甲基化状态的变化.结果胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1和SW1990细胞均表达HOXA7mRNA,而PANC1细胞不表达HOXA7mRNA.CFPAC1、BxPC3、PANC1和SW1990中HOXA7启动子甲基化率分别为93.16%、90.65%、90.09%、52.30%,SW1990细胞的HOXA7甲基化率较其他三株细胞均明显降低（P值均＜0.01）.经5-aza-dC处理后,PANC1细胞的HOXA7mRNA重新表达,BxPC3的HOXA7mRNA表达增强;而CFPAC1和SW1990细胞的HOXA7mRNA在5-aza-dC处理前后无明显变化.结论胰腺癌细胞株BxPC3和PANC1细胞的HOXA7mRNA表达与启动子区甲基化状态密切相关,而CFPAC1和SW1990细胞两者无明显相关性.

简介：摘要目的探讨凝血因子Ⅻ基因启动子区DNA甲基化水平与原因不明复发性流产的关系。方法选取2018年在新疆医科大学第二附属医院就诊的原因不明复发性流产患者15例，并选取同期产前检查正常的孕妇15例作为对照组；抽取血液标本进行DNA提取，应用亚硫酸氢盐PCR测序法分析凝血因子Ⅻ基因启动子区的DNA甲基化率。结果凝血因子Ⅻ基因启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）1和CpG2两个位点的甲基化率在原因不明复发性流产组显著升高，分别为（36.7±9.8）%、（38.7±11.3）%，而对照组分别为（19.3±8.8）%、（16.7±2.2）%，分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.01）。结论原因不明复发性流产可能与凝血因子Ⅻ基因启动子区DNA甲基化水平升高相关。

简介：摘要目的旨在采用二代测序（NGS）的技术平台检测肝细胞癌（HCC）组织样本中肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因（PTEN）基因启动子区的甲基化率，并对其与接受索拉非尼治疗患者预后相关性进行分析。方法2019年6月至2020年12月期间，对在解放军总医院第五医学中心收集和保存的52例单纯接受索拉非尼治疗患者的HCC成对肿瘤组织与癌旁组织样本，提取样本中的总DNA样品；使用亚硫酸氢盐处理DNA样品并设计特异性引物对PTEN启动子区进行扩增，进一步对扩增产物进行二代测序分析。在对PTEN甲基化的临床意义分析中通过log-rank统计学分析方法计算患者组间生存期是否具有统计学差异。结果肿瘤组织中PTEN启动子区甲基化率（29.17%±9.58%）显著高于癌旁组织（4.17%±2.86%）（t=19.970，P<0.05）。同时，在HCC组织中，PTEN启动子区甲基化率与其表达负相关（F=47.270，P<0.000 1；Y=-1 800×X+38.03），PTEN甲基化率与患者接受分子靶向药物索拉非尼治疗的预后负相关（χ²=4.313，P<0.05）。结论本研究成功建立了新型PTEN启动子区甲基化的检测方法，PTEN甲基化率可能是HCC诊断及靶向治疗的靶标之一。

简介：

简介：摘要目的分析亚砷酸钠（NaAsO2）致人肝星状细胞（LX-2细胞）纤维化及自噬相关的DNA甲基化位点，筛选与纤维化及自噬相关的特异性甲基化基因。方法采用DNA甲基化芯片Illumina Infinium Methylation EPIC BeadChips（850K甲基化芯片）对LX-2细胞（对照组）及NaAsO2干预（低、中、高剂量组：终浓度分别为5、10、15 μmol/L NaAsO2，干预48 h）致LX-2细胞纤维化及自噬模型进行全基因组DNA检测，寻找差异甲基化位点。对筛选出的差异甲基化基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析，了解基因功能。结果高剂量组细胞纤维化及自噬模型构建成功。850K甲基化芯片检测结果显示，高剂量组与对照组间存在25 817个显著差异甲基化位点，其中高甲基化位点12 083个、低甲基化位点13 734个。GO功能富集分析显示，差异甲基化基因参与的分子功能主要包括蛋白结合、离子结合、催化活性、酶结合。KEGG信号通路富集分析显示，差异甲基化基因参与的通路主要包括代谢通路、癌症通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路、内吞作用、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路。进一步在启动子区，筛选出11个与纤维化相关的差异甲基化基因和29个与自噬相关的差异甲基化基因。结论NaAsO2诱导LX-2细胞纤维化及自噬过程中存在大量差异甲基化位点，筛选出与纤维化及自噬相关的特异性甲基化基因。

简介：摘要目的2016年冬季出现了一种重组型GII.2[P16]诺如病毒（norovirus，NoV），并造成了我国急性胃肠炎大规模暴发，本研究旨在探究2016—2017年该病毒在我国的进化动力学和时空传播模式。方法利用MEGA 7.0和BEAST等软件对先前获得的暴发标本中GII.2[P16] NoV全基因组、主要结构蛋白（viral protein 1，VP1）和RNA依赖RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）基因全编码区序列进行分析。结果序列分析显示此次重组型病毒VP1相比于RdRp基因的进化速度更快，在暴发中期，VP1蛋白的第256位出现了特异性氨基酸突变，即Val256Ile突变，且该突变位点形成的新型变异株在暴发后期成为优势流行株。基于该毒株P二聚体晶体结构的分析，发现该病毒VP1蛋白中第256位残基位点可能参与了B细胞抗原表位的组成，提示Val256Ile突变可能导致了新型变异株的抗原性发生改变，这可能是该病毒在暴发后期优势流行的原因之一，但需要进一步血清学实验的验证。基于贝叶斯地理推演结果显示，广东省可能为我国此次病毒流行的起源地，对该病毒在我国的暴发流行起了重要的作用。结论鉴于出现功能性改变的GII.2[P16]新型变异株和广东省为我国该型病毒的暴发中心，提示有必要在珠江三角洲地区对GII.2[P16] NoV开展持续的监测和研究。

简介：目的：探讨FOXA1、p16在子宫内膜癌组织中的表达情况及其临床意义。方法：采用免疫组化方法检测FOXA1、p16在68例子宫内膜癌组织、11例不典型增生组织及27例正常子宫内膜组织中的表达情况,分析2者与子宫内膜癌各临床病理指标的相关性以及2者表达的相关性。结果：子宫内膜癌组织中FOXA1、p16阳性表达率均低于正常子宫内膜组织及不典型增生内膜组织,差异具有统计学意义（P〈0.05）;FOXA1、p16的表达与子宫内膜癌病理分期、组织分级、肌层浸润、病理类型及淋巴结转移情况有关（P〈0.05）;2者在子宫内膜癌中的表达呈正相关。结论：FOXA1和p16与子宫内膜癌的发生发展相关,2者在子宫内膜癌的发展中具有协同作用。

简介：目的探讨老年患者幽门螺杆菌（HP）感染与胃癌及癌前病变中C-myc、p16、p53、K-ras和C．erbB-2基因表达及其临床意义。方法分析老年患者的胃镜检查活检标本116例，HE染色观察胃黏膜的炎症和异型增生变化，特染法检测胃黏膜的肠上皮化生，应用Warthin-stary银染色法检测HP，应用ELISA法检测血清学HPIgG，14C尿素呼气试验（14C-UBT）检测HP，应用免疫组化sP法检测C-myc、p16、p53、K-ras和C-erbB-2基因的表达。结果老年患者在不同胃组织中C-myc、p16、p53基因的表达均有显著差异，而K-ras和C-erbB-2基因表达未见显著性差异。HP感染率以胃癌为最高，其次为胃溃疡。结论本实验通过老年患者的HP检测和观察胃黏膜的炎症和异型增生变化，再结合癌基因和抑癌基因的表达异常，提示萎缩性胃炎异型增生、肠上皮化生和胃癌的HP感染率均高于非萎缩性胃炎。再次表明胃癌与HP感染有一定相关性。

简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-137-3p对赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(KDM4A)的调控在坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性痛中的作用。方法将大鼠随机分为假手术组(Sham)、CCI模型组、2 mg/kg miR-137-3p模拟物(mimic)鞘内注射组、4 mg/kg miR-137-3p mimic鞘内注射组。术后的第14天，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测大鼠背根神经节(DRG)和脊髓(SC)中miR-137-3p及KDM4A的表达变化。于注射前及注射后的第1、3、7、14天，采用von Frey检测大鼠机械撤足阈值(PWT)和热撤足潜伏期(PWL)。蛋白质印迹法(Western blot)检测DRG和SC中KDM4A的表达变化；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脊髓L4~L5组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的含量；双荧光素酶报告基因法检测miR-137-3p与KDM4A的靶向关系。应用GraphPad Prism 8.2.1软件，对数据进行配对t检验、ANOVA单因素方差分析及双因素方差分析等方法分析。结果(1)与Sham组比较，miR-137-3p在CCI大鼠DRG和SC中的表达水平(0.363±0.130、0.490±0.099)显著低于Sham组(1.013±0.164、0.950±0.120)，且差异有统计学意义(t＝8.772、8.425，P<0.05)，但KDM4A在CCI大鼠DRG和SC中的表达水平(3.113±0.083、3.613±0.136)高于Sham组(1.025±0.158、0.975±0.198)，差异有统计学意义(t＝33.020、31.060，P<0.01)。(2)与Sham组大鼠机械撤足阈值(1 d，23.220±5.262；3 d，22.790±5.764；7 d，23.220±5.262)和热撤足潜伏期(1 d，11.617±0.518；3 d，11.345±0.867；7 d，11.645±0.588)比较，CCI组机械撤足阈值(1 d，10.269±2.422；3 d，6.484±2.314；7 d，4.434±2.273)热撤足潜伏期(1 d，8.061±0.123；3 d，6.661±0.298；7 d，5.067±0.335)显著下降(F＝7.841，P<0.05；F＝162.900，P<0.01)；而与CCI组比较，鞘内注射miR-137-3p mimic可显著促进大鼠机械撤足阈值(1 d，15.302±8.044；3 d，13.891±5.894；7 d，11.006±2.284)和热撤足潜伏期(1 d，10.995±0.139；3 d，9.972±0.336；7 d，8.522±0.322)的上升(F＝12.420，P<0.01；F＝80.300，P<0.01)，抑制KDM4A的表达(DRG中，1.554±0.071比2.698±0.160，t＝15.672，P<0.05；SC中，1.684±0.059比3.006±0.088，t＝5.223，P<0.05)。(3)与Sham组(153.600±15.600；150.900±6.302)比较，CCI组大鼠DRG和SC中BDNF表达水平(354.400±13.020；350.700±26.850)显著上升(t＝4.673，P<0.05；t＝1.981，P<0.05)；而与CCI组比较，鞘内注射miR-137-3p mimic可显著抑制BDNF的产生(188.000±5.685，t＝5.767，P<0.05；182.200±4.983，t＝20.034，P<0.05)。(4)与miR-scramble组相比，miR-137-3p mimic转染可显著降低KDM4A野生型载体的荧光素酶报告基因的荧光强度(1.002±0.080比0.486±0.063，t＝11.290，P<0.05)。结论miR-137-3p通过调控大鼠背根神经节和脊髓背角中KDM4A的表达参与神经病理性痛。

简介：摘要N6-甲基腺嘌呤(m6A)是发生在腺苷N6位置的甲基化，是真核mRNA上最普遍的内部修饰。越来越多的证据表明，m6A可调节基因表达，从而调节细胞的自我更新、分化、侵袭和凋亡等过程。m6A被m6A甲基转移酶复合物安装，被m6A去甲基化酶除去，被甲基结合蛋白识别，继而调节RNA代谢，包括翻译、剪接、输出、降解等。m6A水平的改变通过调控CDCP1、MYC、MZF1等肿瘤相关基因的表达参与肿瘤的发生发展。本文就m6A在肾癌中的研究进展进行综述，以期为阐明肾癌发生发展的机制、探索新的治疗策略提供依据。

简介：摘要目的探讨粪便中SDC2、PPP2R5C及ADHFE1基因甲基化状态及其在结直肠癌和癌前病变筛查中的价值。方法招募青岛大学附属青岛市中心医院2020年8月至2021年3月结直肠癌患者64例、腺瘤患者72例、增生性息肉患者33例和健康体检者59名，收集研究对象清晨粪便标本，提取基因组DNA并进行亚硫酸盐修饰处理，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测SDC2、PPP2R5C及ADHFE1基因的甲基化状态；同时进行粪便隐血试验（FOBT）。以病理结果为金标准，通过受试者工作特征（ROC）曲线及曲线下面积（AUC）比较3个基因甲基化联合检测与FOBT预测结直肠癌和癌前病变的效果。采用R-Studio软件构建粪便基因甲基化联合检测与其他临床特征预测结直肠癌列线图，并行校准验证。结果粪便SDC2、PPP2R5C和ADHFE1基因甲基化联合检测在结直肠癌+腺瘤[74.3%（101/136）比47.1%（64/136），χ2＝23.20，P＝0.001]、结直肠癌[90.6%（58/64）比70.3%（45/64），χ2＝8.91，P＝0.003]、腺瘤[59.7%（43/72）比26.4%（19/72），χ2＝14.43，P＝0.002]中的阳性率均高于FOBT，在增生性息肉[21.2%（7/33）比6.1%（2/33），χ2＝0.12，P＝0.125]、健康对照[10.2%（6/59）比8.5%（5/59），χ2＝4.01，P＝1.000]中阳性率差异均无统计学意义。基因甲基化联合检测预测结直肠癌+腺瘤的效能优于FOBT[AUC：0.85（95% CI 0.80~0.91）比0.71（95% CI 0.64~0.78），P<0.05]，尤其对腺瘤的预测更优于FOBT[AUC：0.82（95% CI 0.74~0.89）比0.64（95% CI 0.57~0.69），P<0.001]。ADHFE1基因甲基化状态预测结直肠癌的灵敏度和特异度均较高（90.6%、96.6%）。在>50岁结直肠癌患者中，基因甲基化联合检测阳性率高于FOBT[90.2%（55/61）比68.9%（42/61），P<0.05]。依据基因甲基化联合检测和各临床特征构建的预测结直肠癌列线图校准曲线显示，预测和观察到的结直肠癌诊断效能之间具有高度一致性。结论粪便中SDC2、PPP2R5C及ADHFE1基因甲基化水平在结直肠癌和腺瘤患者中升高，基因甲基化联合检测有望成为结直肠癌及癌前病变筛查的非侵入性检测方法。

简介：摘要目的探讨唐氏综合征(Down syndrome, DS)DNA甲基化模式以及基因不同元件甲基化水平与DS基因表达的相关性。方法应用全基因组亚硫酸氢盐测序技术筛选来源于DS患儿和正常对照的诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)中差异甲基化区域(differentially methylated region，DMR)，对其在染色体和基因位置上的分布进行统计分析。通过聚类分析，研究差异基因涉及的功能。并结合全基因组表达谱数据和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)研究不同基因元件甲基化的调控作用。结果DS iPSCs中共检测出1569个DMR，启动子区高甲基化所占比例明显高于基因体(genebody)，且DMR不富集在21号染色体上。启动子和genebody高甲基化均对基因表达起到抑制作用。聚类结果显示，具有DMR的基因显著富集在神经发育、干细胞多能性以及组织器官大小调控的相关通路上。结论DS iPSCs中DNA甲基化异常在全基因组广泛分布，DS中DNA甲基化的分布模式和调控模式均不同于正常样本，DNA甲基化可能在早期胚胎发育过程中参与了唐氏综合征DS患者神经发育异常及其他异常的发生。

简介：摘要目的检测甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer，PTC）组织中SFRP1基因启动子DNA甲基化状态，分析其与临床特征和生化指标的相关性及对mRNA表达的影响，探究其在临床应用中的价值。方法选择2017年10月至2019年10月在烟台市烟台山医院行手术治疗的97例初发PTC患者作为研究对象，取患者的PTC组织（观察组）和癌旁组织（对照组），采用甲基化特异性PCR（methylation special PCR，MSR）检测组织中SFRP1基因启动子区甲基化状态，采用荧光定量PCR法检测SFRP1基因mRNA表达量，使用甲基转移酶抑制剂5-Azacytidine处理PTC细胞株，且进行生化指标的检测和临床特征的收集。结果PTC组织的SFRP1基因启动子区甲基化阳性率（70.1%）显著高于癌旁组织的甲基化阳性率（33.0%）（χ2=26.747，P<0.001）；PTC组织的SFRP1基因mRNA表达量显著低于癌旁组织的mRNA表达量（t=2.886，P=0.007），甲基化阳性PTC组织的mRNA表达量也显著低于甲基化阴性PTC组织mRNA的表达量（t=2.065，P=0.038）。随着5-Azacytidine浓度的增加，CGTHW-3细胞SFRP1基因mRNA表达量也逐渐上升。此外，PTC组织中甲基化阳性率与TNM分期（χ2=5.487，P=0.019）和是否有淋巴结转移（χ2=4.659，P=0.031）有关，且甲基化组的血清TSH和TGAb水平均高于非甲基化组（TSH：t=2.234，P=0.023；TGAb：t=2.312，P=0.021）。结论SFRP1基因启动子区高DNA甲基化可通过下调该基因mRNA表达，参与到PTC的发生、发展中。