简介:摘要目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX)在骨肉瘤组织中的表达与患者临床病理特征的相关性,研究WWOX在小鼠中对人骨肉瘤生长和转移的影响及其分子机制。方法收集2011年1月至2018年12月来自郑州大学第一附属医院的骨肉瘤患者112例,采用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨肉瘤组织中WWOX的表达,并分析WWOX表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系,然后建立人骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤模型,分别注射空白载体、慢病毒载体的WWOX和慢病毒载体的WWOX短发卡RNA(shRNA),比较3组免疫缺陷鼠肿瘤体积变化,荷瘤标本用qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)评估WWOX在小鼠原位瘤和肺转移瘤中的表达情况,CT分析肺转移情况。Western blot检测WWOX敲低组与对照组比较相关蛋白的表达量变化。对计量资料符合正态分布的使用独立样本t检验进行差异分析,不符合正态分布的使用非参数检验进行差异分析,等级资料使用非参数检验进行差异分析,计数资料使用检验进行差异分析。不同组之间的差异采用one-way ANOVA方法分析。结果WWOX的表达与患者年龄、性别和发病部位等临床病理特征无关,而WWOX高表达与较低的微血管密度(MVD)(P<0.05)和较小的肿瘤体积明显相关(P<0.05)。此外,WWOX高表达患者的总生存期(OS)和无病生存期(DFS)均好于WWOX低表达患者(P值均<0.05),差异有统计学意义。瘤内注射WWOX的小鼠原位肿瘤WWOX表达与对照组和GDPAH的比值分别为1.43±0.17和2.31±0.26,表达明显高于对照组,MVD分别为19.34±3.71与11.71±1.72,表达明显低于对照组,肿瘤生长缓慢,肺转移瘤肿瘤个数、WWOX表达和MVD与对照组差异无统计学意义,瘤内注射WWOX shRNA的小鼠原位肿瘤WWOX表达和GDPAH的比值为0.76±0.19,表达明显低于对照组,MVD为28.50±3.44,表达明显高于对照组,肿瘤生长加快,肺转移瘤数量为13.00±4.19,表达明显高于对照组,WWOX表达降低,MVD增加。进一步发现WWOX可通过细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化调节细胞核增殖抗原(Ki-67)及基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达,并进一步调控骨肉瘤的增殖与侵袭。结论WWOX在骨肉瘤中高表达与较好的预后相关,WWOX可以通过ERK信号通路抑制骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤的生长,抑制骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤的血管生成和肺转移。
简介:摘要目的通过粪菌移植探究肠道菌群是否参与手术创伤及麻醉引起的围手术期神经认知紊乱(perioperative neuro-cognitive disorders, PND)。方法将36只C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组(C组)、手术组(S组)和粪菌移植组(F组),每组12只。S组小鼠在全身麻醉下行肝部分切除术制备PND模型,采集小鼠术后粪便制成粪菌滤液移植至F组小鼠体内。采用Western blot法检测小鼠术后/粪菌移植后第3、7天大脑海马区IL-1β、IL-6、脑源性神经营养因子(brain-derived neuro-trophic factor, BDNF)的表达水平,免疫组织化学法检测小胶质细胞激活标志物——离子钙接头蛋白抗原(ionized calcium-binding adapter molecule-1, Iba-1)的表达情况,通过Morris水迷宫(Morris water maze, MWM)评估术后/粪菌移植后第3、7天的认知功能。结果与C组比较:S组术后第3天、F组移植后第3天在目标象限内停留时间缩短(P均<0.01),穿越平台次数减少(P均<0.01);S组在术后第7天、F组在移植后第7天在目标象限内停留时间延长(P均>0.05 ),穿越平台次数增多(P均>0.05)。S组IL-1β、IL-6水平在术后第3天(P均<0.01)和术后第7天(分别为P<0.01、P<0.05)均较C组明显升高;F组IL-1β和IL-6水平在移植后第3天也较C组明显升高(P均<0.01),移植后第7天仍保持上调(P均<0.05 )。与C组比较:S组小鼠大脑海马区小胶质细胞Iba-1水平在术后第3天明显升高(P<0.01 ),术后第7天仍保持上调(P<0.05);F组在移植后第3天Iba-1水平也明显提高(P<0.01),移植后第7天相差不大(P>0.05 )。与C组比较:S组在术后第3天、F组在移植后第3天BDNF的表达明显降低(分别为P<0.05、P<0.01);在术后第7天S组的BDNF水平较术后第3天升高(P>0.05 ),移植后第7天F组仍保持在较低水平(P<0.05)。结论肠道菌群参与了手术创伤及麻醉引起的PND,其机制可能与海马区神经炎症的发生、小胶质细胞的激活增加有关。
简介:摘要目的探讨脓毒症患者外周血B淋巴细胞(CD19+B)、记忆B细胞亚群(CD19+CD27+B)上组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(enhance of zeste homolog 2, EZH2)动态表达变化规律及其对脓毒症患者预后判断的价值。方法采用前瞻性队列研究,纳入2018年6月至2020年1月在同济大学附属东方医院重症监护病房就诊的脓毒症患者48例,同期来院的40例健康体检者作为对照组。根据患者28 d存活与否将脓毒症组分为死亡组及存活组。采集确诊脓毒症1 d、3 d、7 d共3个时间点血标本(健康对照组于清晨空腹仅抽取1次),收集不同时间点脓毒症组的血常规、IL-6、血气分析等,统计SOFA和APACHE Ⅱ评分。运用流式细胞技术检测研究对象不同时间点CD19+B细胞上EZH2阳性率及平均荧光强度、CD19+CD27+B细胞上EZH2的阳性率并绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积,评估对判断脓毒症患者28 d死亡的预测价值。结果①脓毒症组确诊后第1、3、7天外周血CD19+B淋巴细胞上EZH2的阳性率和平均荧光强度、CD19+CD27+B淋巴细胞上EZH2表达的阳性率较健康对照组均显著增加,且差异具有统计学意义(P<0.05)。随着时间推移,EZH2在CD19+B淋巴细胞、CD19+CD27+B淋巴细胞上表达水平呈升高趋势。②死亡组第1天CD19+B淋巴细胞上EZH2阳性率明显高于存活组,然而死亡组第3和7天CD19+CD27+B细胞上EZH2的阳性率却明显低于存活组(P<0.05)。③脓毒症患者第1天CD19+B淋巴细胞上EZH2阳性率、APACHEⅡ评分、SOFA评分和IL-6水平均为预测患者28 d死亡的独立危险因素。④APACHE Ⅱ评分的AUC为0.907(95%CI:0.825~0.990),灵敏度为88.89%,特异度为76.67%;SOFA评分的AUC为0.831(95%CI:0.706~0.955),灵敏度为66.67%,特异度为86.67%;CD19+B淋巴细胞上EZH2阳性率的AUC为0.799(95%CI:0.657~0.941),灵敏度为88.89%,特异度为80.77%,灵敏度优于SOFA评分,特异度高于APACHE Ⅱ评分。结论脓毒症患者B淋巴细胞上EZH2高表达,与患者不良预后相关;动态监测脓毒症患者B淋巴细胞上EZH2的表达有一定的临床意义。
简介:摘要目的探讨针对创伤失血性休克病人的急救治疗措施及临床抢救效果。方法回顾性分析我院于2007年4月至2013年1月期间抢救的190例创伤失血性休克病人的临床资料,针对病人的受伤情况实施科学、精确的判断之后制定出对应的应急治疗措施,研究分析病人的急救措施以及临床抢救的效果。结果通过急救治疗之后,178例病人抢救治疗成功,5例病人通过急救病情稳定之后转院,7例危重病人通过尽力抢救无效死亡,抢救治疗的成功率达到了96.32%(183/190);其体征都得到了有效的控制(P<0.05)差异具有统计学意义。结论针对创伤失血性休克病人,应当依照病人实际病情来制定一套科学的抢救措施,采用有效、及时的措施实施急救治疗,可以显著改善并维持病人的体征,从而有效提升病人的抢救成功率。
简介:摘要目的探讨肠炎沙门菌spvD基因对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞侵袭力及胞内增殖力的影响。方法利用自杀质粒介导的同源重组技术构建spvD基因缺失株,PCR扩增并克隆spvD基因于pBAD33表达载体获得回补质粒,导入相应缺失株得到回补株,并将pBAD33导入野生株及缺失株作为空载对照。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测spvD mRNA表达水平。以Caco-2细胞作为体外模拟人肠上皮细胞模型,分别将野生株、缺失株及回补株与其共培养,探究spvD基因对Caco-2细胞的毒力。使用LSD-t检验进行3组间spvD mRNA表达水平比较及胞内活菌数比较,使用χ²检验进行3组间侵袭率的比较。结果以野生株spvD mRNA表达量作为单位“1”,缺失株为“0.00”、回补株为“2.60”(LSD-t野生株,缺失株=1.11,P=0.31;LSD-t野生株,回补株=-1.77,P=0.13;LSD-t缺失株,回补株=-2.88,P=0.03),该结果证实了缺失株及回补株的成功构建。上述3组肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭实验结果显示,野生株侵袭率为0.23%,缺失株侵袭率为0.16%,回补株侵袭率为0.16%,差异无统计学意义(χ2=1.13,P=0.570)。通过比较细菌干预Caco-2细胞后不同时间点胞内活菌数,发现在干预16 h时,野生株(6.50×106 CFU/ml)、回补株(7.25×106 CFU/ml)胞内活菌数明显增多,均高于缺失株(1.90×106 CFU/ml)(LSD-t野生株,缺失株=7.95,P=0.00;LSD-t野生株,回补株=-1.27,P=0.25;LSD-t缺失株,回补株=-9.22,P=0.00)。结论尚不能认为spvD基因影响肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭力,但该基因可促进肠炎沙门菌在Caco-2细胞内增殖。
简介:摘要目的探讨组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)调控脓毒症T淋巴细胞功能失调的作用及机制。方法按随机数字表法将24只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术(CLP)+二甲基亚砜(DMSO)组〕及EZH2选择性抑制剂干预组(CLP+GSK126组),每组8只。采用CLP法制备脓毒症小鼠模型;假手术组小鼠不结扎穿刺盲肠,其余操作同CLP+DMSO组。CLP+DMSO组及CLP+GSK126组小鼠术后立即分别腹腔注射DMSO或GSK126(10 mg/kg)。术后24 h处死小鼠取肠系膜淋巴结,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞EZH2表达、T淋巴细胞凋亡率、细胞增殖标志物ki-67抗原阳性T淋巴细胞(ki-67+)比例、γ-干扰素阳性T淋巴细胞(IFN-γ+)比例、程序性死亡受体-1阳性T淋巴细胞(PD-1+)比例及程序性死亡配体-1阳性T淋巴细胞(PD-L1+)比例。结果与假手术组相比,CLP+DMSO组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞EZH2表达升高。与CLP+DMSO组相比,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结CD3+比例升高(0.70±0.02比0.50±0.07,P<0.01),表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞数量;同时,CLP+GSK126组淋巴结CD4+及CD8+细胞中ki-67+比例显著上升(CD4+:0.74±0.05比0.63±0.04,CD8+:0.82±0.06比0.70±0.04,均P<0.05),表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结增殖活性较高的T淋巴细胞比例;另外,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞凋亡率与CLP+DMSO组比较差异无统计学意义〔CD4+:(21.53±2.87)%比(20.48±3.21)%,CD8+:(8.34±1.02)%比(7.71±1.38)%,均P>0.05〕,表明抑制EZH2对脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞凋亡无明显影响。与CLP+DMSO组相比,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结IFN-γ+CD4+、IFN-γ+CD8+比例也显著增加(IFN-γ+CD4+:0.31±0.11比0.14±0.06,IFN-γ+CD8+:0.30±0.10比0.13±0.06,均P<0.05),表明抑制EZH2可增强脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞IFN-γ分泌能力;同时,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结PD-1+CD8+比例较CLP+DMSO组显著下降(0.092±0.006比0.135±0.004,P<0.01),表明抑制EZH2可降低脓毒症小鼠淋巴结CD8+细胞PD-1的表达量,但对PD-L1+比例无明显影响。结论EZH2参与了脓毒症诱导的T淋巴细胞功能障碍的调控,该作用可能部分通过调节PD-1表达介导。
简介:摘要目的探讨健康教育对乳腺癌患者围手术期的影响。方法将56例行乳腺癌根治术的患者,随机分成实验组和对照组,实验组前实施访视讲解麻醉和手术的相关知识以及术后的配合给予心理和卫生宣教等措施,对照组按常规护理。结果实验组比对照组的患者对手术焦虑,紧张情绪,术后的耐受性好,积极配合治疗,术后并发症少。结论乳腺癌患者术前存在明显的心理障碍,围手术期的健康教育对乳腺癌的恢复有着极其重要的意义。
简介:摘要目的探讨磁敏感加权成像(susceptibility weighted imaging, SWI)显示的不对称的显著皮质静脉(asymmetrically prominent cortical vein, APCV)与急性缺血性卒中患者早期神经功能恶化(early neurological deterioration, END)的相关性。方法回顾性纳入2016年10月至2018年9月期间在中山大学附属东华医院神经内科住院并在发病3 d内完成MRI检查的急性缺血性卒中患者。应用SWI评价APCV。END定义为发病后7 d内任何时间点美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale, NHISS)评分较基线时增加≥2分或运动项评分较基线时增加≥1分。应用多变量logistic回归分析确定APCV与END的独立相关性。结果共纳入133例急性缺血性卒中患者,其中男性93例,女性40例,中位年龄57.3岁(四分位数间距:47.5~67.5岁)。基线NIHSS评分(5.9±5.0)分。51例(38.3%)患者存在APCV,38例(28.6%)患者发生END。END组与非END组APCV、同侧大血管狭窄以及入院后接受抗凝治疗的患者构成比均差异有统计学意义(P均<0.05)。多变量logistic回归分析显示,在校正年龄和性别后,APCV是急性缺血性卒中患者发生END的独立危险因素(优势比6.907,95%可信区间2.798~17.052;P<0.001)。结论SWI显示的APCV是急性缺血性卒中患者发生END的独立危险因素。