简介：摘要目的筛选与老年肺腺癌患者肿瘤浸润免疫细胞相关的关键基因。方法回顾性分析，训练集的基因表达数据来源于癌症基因组图谱数据库，验证集来源于基因表达综合数据库的GSE72094数据集，筛选年龄≥75岁的肺腺癌患者91例，14例匹配的正常样本。肿瘤浸润免疫细胞水平由反卷积算法计算，训练集采用加权基因共表达网络分析筛选与肿瘤浸润免疫细胞水平相关的关键基因，并应用外部数据集验证。结果在老年肺腺癌患者中，IKZF1和PRKCB的高表达与自身免疫疾病和T细胞受体信号通路等相关，其编码的蛋白可与IL2RB、LCK和CD5等多种免疫调节因子相互作用。在IKZF1和PRKCB基因高表达患者中，PD-L1、PD-1和CTLA-4等免疫检查点基因的表达高于低表达患者(均P<0.01)。验证集结果表明，CD8+T细胞水平与IKZF1(r＝0.75)和PRKCB(r＝0.65)的表达相关(均P<0.01)。结论老年肺腺癌患者肿瘤组织中的IKZF1和PRKCB表达与肿瘤浸润CD8+T细胞和免疫检查点基因的表达相关。

简介：摘要目的分析中国汉族常染色体显性遗传视网膜色素变性(ADRP)一家系的致病基因及临床表型。方法采用家系调查研究，收集2019年11月于河南省人民医院进行遗传咨询的中国汉族RP一家系，纳入该家系4代20名成员，包括9例患者和11名表型正常者，对部分家系成员进行视力、视野和眼底检查。收集该家系成员外周血样本，提取DNA，采用Ion Torrent PGM测序平台，对先证者进行包含43个与RP相关基因的外显子靶向测序，采用PCR和Sanger测序对变异位点进行验证。采用在线软件对变异位点进行蛋白功能预测。采用ClustalW2多重比对程序对变异位点的氨基酸序列进行比较。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)遗传变异分类标准与指南分析变异的致病性。结果该家系符合常染色体显性遗传。先证者，男，26岁，自幼双眼夜盲，视力右眼0.25，左眼0.5。双眼视网膜有骨细胞样色素沉着，视网膜血管变细，视盘颜色变淡。全视野视网膜电图检查显示，暗适应a波和b波峰值降低，明适应a波和b波峰值重度降低。其余家系成员患者均于7～10岁开始出现夜盲，约50岁时周边视力完全丧失，眼科检查均呈典型RP改变。基因检测结果显示，该家系视紫红质(RHO)基因(NM_000539.3)5号外显子中存在1个杂合错义变异c.982delC(p.L328fs)。该变异可导致编码的RHO蛋白第328位氨基酸以后的21个氨基酸改变，使编码区由348个氨基酸增加到358个氨基酸，RHO蛋白结构发生改变；多个不同物种之间蛋白同源序列比对分析结果显示该位点高度保守。根据ACMG遗传变异分类标准与指南，该变异具有1个非常强的致病性证据PVS1，2个中等致病证据PM2，3个支持致病证据PP1、PP3、PP4，属于致病性变异。结论RHO基因c.982delC变异为该家系的致病基因变异位点，该变异位点在中国汉族家系中首次报道。

简介：摘要目的通过对3个PTPN11基因突变的综合征型耳聋家系的临床表型和基因进行分析，了解其分子生物学病因。方法对2019年1月至2020年1月在昆明市儿童医院就诊的3个耳聋家系进行病史采集，体格检查，听力学评估，心电图、心脏彩色多普勒血流成像及颞骨CT检查，之后取先证者外周血DNA进行耳聋基因高通量测序，并针对变异位点对家系成员进行Sanger测序验证，根据美国医学遗传学与基因组学学会制定的变异解读标准对变异的致病性进行评估。结果3个家系中先证者均有耳聋表型。家系1先证者合并多痣，特殊面容，生长迟缓，鸡胸，皮肤弹性异常，隐睾等表现；家系2先证者合并特殊面容，生长迟缓及心脏异常；家系3先证者合并生长迟缓和心电图异常。对3个家系进行基因检测，发现PTPN11基因3个杂合突变：c.1391G>C（p.Gly464Ala）、c.1510A>G（p.Met504Val）和c.1502G>A（p.Arg501Lys）。3个位点均为错义突变，且突变位点在多个同源物种间高度保守。综合临床表现及基因检测结果，先证者1诊断为多痣Noonan综合征，先证者2、3诊断为Noonan综合征。结论PTPN11基因的错义突变可能是3个耳聋家系的致病原因，该研究丰富了中国人群PTPN11基因临床表型和突变谱。

简介：摘要目的探讨NEB基因突变致杆状体肌病的临床、肌肉病理和基因突变特点。方法回顾性分析2019—2021年于山东大学齐鲁医院神经肌肉病理研究室确诊的3例杆状体肌病患者的临床表现、辅助检查、肌肉病理和基因检测的结果，同时结合相关文献进行复习。结果3例患者均为青春期起病，起病症状均为双下肢无力，体格检查均可见高腭弓和狭长脸，肌电图提示肌源性损害。3例患者的肌肉活组织检查（活检）均可见肌营养不良样表现和肌纤维内杆状体结构堆积。病例1 ATP酶染色可见Ⅰ型纤维优势和群组化。基因检测发现病例1存在NEB基因c.21522+3A>G和c.3471dupC（p.N1158Qfs*5）2种突变；病例2存在c.21522+3A>G和c.18991_18992delAG（p.Q6332Afs*8）复合杂合突变；病例3存在c.21522+3A>G和c.3448A>T（p.K1150*）复合杂合突变。3例患者的NEB基因均存在c.21522+3A>G突变，文献复习发现该突变仅在中国人群中有报道；c.3471dupC（p.N1158Qfs*5）、c.18991_18992delAG（p.Q6332Afs*8）和c.3448A>T（p.K1150*）经查阅文献目前国内外均无报道。根据美国医学遗传学与基因组学学会指南的相关内容，c.21522+3A>G、c.3471dupC（p.N1158Qfs*5）、c.3448A>T（p.K1150*）和c.18991_18992delAG（p.Q6332Afs*8）均被评级为致病变异。结论杆状体肌病的起病年龄和症状表现具有异质性，肌肉活检和基因检测是杆状体肌病最重要的诊断方法。NEB基因c.21522+3A>G突变可能在中国人群中是较常见的突变。

简介：摘要目的通过对创伤性脑损伤（TBI）后脑组织的基因表达谱数据进行权重基因共表达网络分析（WGCNA），筛选具有重要意义的基因集，并明确其涉及的功能及信号通路，为TBI的机制研究和治疗提供参考。方法在基因表达数据库（GEO）中下载大鼠TBI基因表达谱数据GSE2871，将全部47个大鼠脑组织样本的8 799个基因的表达情况进行WGCNA分析；计算选择β加权软阈值后，对全部基因构建无向加权基因网络，识别具有高度绝对相关性的基因集；从数据库中获取样本信息并计算样本特征与模块间的相关性，选取与损伤程度及取样部位相关的模块进行基因本体（GO）分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析，从而获悉上述关键模块中基因涉及的生物学过程和通路；计算关键模块内基因的模块相关度和性状相关度，进而遴选关键模块中的核心基因。结果将GSE2871表达谱数据库中的所有大鼠脑组织样本和基因纳入WGCNA，共得出22个模块，分别标记为模块A~V。其中模块E、G、T、U与取样部位显著相关，模块E和模块G同时与损伤程度显著相关；GO分析和KEGG通路分析提示，与损伤程度和取样部位均显著相关的模块E、G中的基因主要参与白细胞迁移、细胞趋化及各种免疫反应调控等相关生物学过程，涉及抗原处理与呈递、细胞因子-细胞因子受体相互作用及白细胞介素（IL）-17信号等信号通路。与取样部位显著相关的模块T、U主要参与低氧反应、细胞代谢、细胞膜离子通道调控和信号传导等生物学过程，涉及神经退行性疾病信号通路、核糖体、自噬、神经活性的配体-受体相互作用等信号通路；Tuba1b/1c、Ifitm3、Cebpd、Nfkbia、Serinc3、Pmpcb、Cyp4a8等为上述关键模块的核心基因。结论与大鼠TBI显著相关的基因主要参与免疫激活、炎症反应、能量代谢异常、钙离子通道失调、自噬异常及细胞凋亡等病理生理环节。

简介：摘要目的构建人干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)沉默子的荧光素酶报告质粒，在人胚肾细胞(HEK293T)和人类宫颈癌细胞(HeLa)中检测荧光素酶活性，生物信息学预测其可能结合的转录因子并通过实验验证。方法通过PCR扩增人STING-5-1a(-124～+267，相对于转录起始位点，TSS: 0)和STING-5-2a(-124～+168)区域，亚克隆至pGL3-Basic质粒；将人STING沉默子区域STING-5-1b(+169～+267)正向反向亚克隆至pGL3-Control质粒(pGL3-C-5-1b-positive/negative)，并把STING-5-1b分为两段互补片段，亚克隆至pGL3-Control载体上，命名为pGL3-C-STING-5-1b-α(+169～+209)/pGL3-C-STING-5-1b-β(+210～+267)，双荧光素酶报告活性分析检测上述重组质粒在HEK293T和HeLa中的活性。应用生物信息学方法预测人STING沉默子的转录因子结合位点，将预测结合位点进行多点突变，检测荧光素酶活性。敲低转录因子，免疫印迹试验检测STING的表达水平。染色体免疫共沉淀反应进一步验证转录因子与人STING沉默子的结合。结果核酸测序证实，上述重组质粒构建成功。截短STING-5-1b(+169～+267)片段后相对荧光素酶活性上升。同时，与pGL3-Control质粒相比，pGL3-C-5-1b-positive重组质粒的相对荧光素酶活性下降(P<0.05)，其中，STING-5-1b-β(+210～+267)序列起主要抑制作用。应用生物信息学软件预测发现转录因子PR结构域锌指蛋白4(PRDM4)、Thanatos相关蛋白1(THAP1)、TEA域转录因子1(TEAD1)、核受体亚家族4 A组成员1(NR4A1)、类Krueppel因子4(KLF4)和叉头转录蛋白O3(FOXO3)可能与人STING沉默子区域(+210～+267)结合。对上述转录因子的结合位点进行多点突变构建突变体并转染至HEK293T和HeLa，发现THAP1-Mut和TEAD1-Mut的相对荧光素酶活性显著上升，提示STING沉默子可能含有THAP1和TEAD1的结合位点。将转录因子THAP1和TEAD1敲低后，STING的表达水平有显著上升。染色体免疫共沉淀试验表明，转录因子TEAD1和THAP1在细胞内与人STING沉默子区域结合。结论本实验成功构建了人STING沉默子荧光素酶报告质粒，通过活性比较，推测人STING的核心沉默子区位于+210～+267区域，通过生物信息学分析及点突变实验初步确定人STING沉默子可能含有的潜在转录因子结合位点。并使用免疫印迹试验和染色体免疫共沉淀进一步证实转录因子TEAD1和THAP1与人STING沉默子的结合，为后续研究提供实验资料。

简介：摘要目的探讨经二代测序确诊的7例CDKL5基因相关早发性癫痫性脑病患儿的临床特征及基因突变特点。方法回顾性分析2018年2月至2019年12月郑州大学附属儿童医院神经内科以癫痫起病的早发性癫痫性脑病患儿的临床资料，采用二代测序方法对先证者全外显子基因组测序，筛选出7例CDKL5基因突变阳性患儿，并对家系成员进行一代Sanger验证明确来源，对其基因突变特点进行分析。结果7例确诊为CDKL5基因相关早发性癫痫性脑病的患儿中，男女比例为2∶5，起病年龄为出生15 d至5个月；临床表型中均有不同程度的发育落后、反复癫痫发作，表现为全面性发作、肌阵挛发作、痉挛发作或局灶性发作；应用抗癫痫药物控制发作较差，部分应用生酮饮食有效。CDKL5基因突变位点均为新生突变，分别为NM_003159：c.772_776del（p.K258Efs*10）移码突变、NM_003159.2 （外显子：9~15）杂合缺失、CDKL5半合子缺失、NM_003159：c.268（外显子5）G>T（p.E90*，941）和NM_003159：c.2578C>T（p.Q860*，171）无义突变、NM_003159：c.211A>G（p.Asn71Asp）和NM_001323289：c.545T>C（p.L182P）错义突变。其中c.772_776del（p.K258Efs*10）、c.268（外显子5）G>T、c.2578C>T（p.Q860*， 171）尚未见报道。结论CDKL5基因相关早发性癫痫性脑病是一种起病较早的癫痫综合征，多见于女性，癫痫发作形式不一，脑电图特征早期呈严重异常脑部放电，病情进展呈多种形式演变，头颅磁共振成像无特异性改变。不同基因突变位点可能有不同表型及预后差异，多种抗癫痫治疗效果差，部分对生酮饮食有效。

简介：摘要目的在新疆伊犁地区献血人群中筛查Vel-稀有血型，评估Vel血型SMIM1 c．64_80del等位基因的频率，了解新疆伊犁地区Vel-稀有血型的分布情况。方法采用DNA汇集法PCR-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primers，PCR-SSP)筛查新疆伊犁地区Vel血型基因SMIM1 c．64_80缺失变异个体；对筛查到含缺失变异个体的SMIM1基因第3外显子进行测序以验证PCR-SSP结果；对SMIM1基因第2内含子直接测序分析与Vel表达量相关的单核苷酸位点多态性。结果在新疆伊犁地区3328名献血者中，发现14人为SMIM1 c．64_80杂合缺失个体，SMIM1 c．64_80del等位基因频率为0.21%，未见纯合缺失个体。14名SMIM1 c．64_80杂合缺失个体rs1175550位点的基因型均为AA，其中5人SMIM1第2内含子存在7111 ins GCA(rs143702418)杂合变异。结论新疆伊犁地区SMIM1 c．64_80del等位基因的频率尚未见报道，本文研究结果丰富了中国不同地区人群Vel血型等位基因数据。

简介：摘要目的采用加权基因共表达网络分析法，筛选影响脓毒症预后的关键基因。方法从美国生物技术信息中心的基因表达数据库中，获取脓毒症患者和健康志愿者外周血基因芯片数据GSE54514，采用R语言加权基因共表达网络分析包构建脓毒症患者与健康志愿者差异基因的共表达网络，筛选与脓毒症预后相关的模块与枢纽基因，并对与脓毒症预后相关性最高的模块中的基因进行富集分析。结果通过对脓毒症患者与健康志愿者的622个差异表达基因构建共表达网络，筛选得到与脓毒症预后相关性最高的模块。GO富集分析显示该模块中的基因与髓系细胞的激活、中性粒细胞的激活相关；而KEGG通路富集分析显示这些基因在病毒感染过程中具有重要作用。最后通过构建蛋白质互相作用网络在与脓毒症预后相关性最高的模块中筛选得到15个枢纽基因。结论通过生物信息学方法挖掘出与脓毒症预后高度相关的15个关键基因，这些基因与调节机体对感染的免疫应答有关。

简介：摘要微小核糖核酸(miRNAs)是一类广泛存在的内源性单链非编码小RNA，在组织与体液中均稳定表达，通过与信使RNA(mRNA)序列互补来降解靶mRNA，阻断蛋白编码基因的表达，在转录后调控和不同的生物学过程中发挥着关键作用。近年来越来越多的研究表明，miRNAs与肿瘤的发生、发展密切相关。其中，微小核糖核酸-196(miR-196)作为miRNAs家族中的成员之一，在非小细胞肺癌患者的血清、组织及细胞中异常表达，参与非小细胞肺癌的发生、发展，在肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移等多种生物学过程中起着重要的调控作用，为非小细胞肺癌的早期筛查提供诊断依据。本文就miR-196在非小细胞肺癌发生、发展及诊断中的研究进展进行综述。

简介：摘要目的探讨血浆miR-151a在狼疮性肾炎(LN)患儿中的表达及其临床意义。方法选取2017年1月至2019年10月在本院收治的82例LN的儿童设为LN组，其中Ⅱ型13例、Ⅲ型17例、Ⅳ型32例、Ⅴ型15例、Ⅵ型5例，另选取健康体检正常者40例作为对照组。采用系统性红斑狼疮(SLE)病情活动指数(SLEDAI)评分将82例LN患儿分为LN稳定组(n＝30，SLEDAI评分<10分)和LN活动组(n＝52，SLEDAI评分≥10分)。采用实时定量PCR法检测各组血浆miR-151a表达水平，Pearson相关分析LN患儿血浆miR-151a表达水平与抗dsDNA抗体及SLEDAI评分的相关性。结果LN活动组和LN稳定组的血沉(ESR)、血肌酐(Scr)及血尿素氮(BUN)水平均明显高于对照组(P<0.05)，而LN活动组和LN稳定组的补体C3、C4水平均明显低于对照组(P<0.05)。LN组、LN活动组、LN稳定组血浆miR-151a表达水平明显低于对照组(0.63±0.10 vs.1.78±0.61，P<0.01)，且LN活动组血浆miR-151a表达水平明显低于LN稳定组(0.46±0.07 vs.0.92±0.18，P<0.01)。LN活动组抗dsDNA抗体及SLEDAI评分均明显高于LN稳定组[(315.26±76.28)IU/mL vs.(246.35±55.38)IU/mL，(14.85±4.90)分vs.(8.30±2.40)分，P<0.01]。LN患儿Ⅴ～Ⅵ型组血浆miR-151a表达水平明显低于Ⅱ～Ⅲ型和Ⅳ型患儿(0.32±0.06 vs.1.05±0.24 vs.0.71±0.15，P<0.01)，而Ⅴ～Ⅵ型组抗dsDNA抗体及SLEDAI评分均明显高于Ⅱ～Ⅲ型和Ⅳ型患儿(P<0.01)。相关分析显示，LN患儿血浆miR-151a表达水平与抗dsDNA抗体和SLEDAI评分均呈负相关(r＝-0.617、-0.705，P<0.001)。结论LN患儿血浆miR-151a表达水平明显降低，且其低表达与疾病活动度及LN分型密切相关，可能参与了LN的发生发展。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miRNA)-6751-3p表达对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(MGC803、BGC823、SGC7901、HS-746T)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中miR-6751-3p的表达水平。将miR-6751-3p表达水平最低的胃癌细胞株分为对照组和实验组，分别转染miR-NC和miR-6751-3p模拟物。qRT-PCR检测两组细胞miR-6751-3p的表达水平。分别采用CCK-8法和划痕愈合实验检测miR-6751-3p过表达细胞的增殖和迁移情况。通过Deepbase v2.0和microRNA.org在线网站预测miR-6751-3p的潜在靶基因，采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。qRT-PCR和Western blot检测miR-6751-3p过表达细胞靶基因的表达。结果与正常胃黏膜上皮细胞相比，miR-6751-3p在胃癌细胞株中表达明显下调(P<0.05)，表达水平最低的细胞株是MGC803细胞(P<0.01)。与对照组相比，miR-6751-3p过表达可抑制MGC803细胞的增殖能力(P<0.05)。对照组和实验组MGC803细胞划痕愈合率分别为(65.14±5.65)%和(23.40±6.78)%。与对照组相比，实验组MGC803细胞划痕愈合率显著降低(t＝4.73, P<0.001)。在线网站预测miR-6751-3p的靶基因可能是脂肪酸结合蛋白5(FABP5)，miR-6751-3p可互补结合FABP5信使RNA(mRNA)(P<0.01)。与对照组相比，miR-6751-3p过表达可抑制MGC803细胞中FABP5基因的表达(t＝4.01, P<0.01)。结论胃癌细胞株中miR-6751-3p呈低表达，miR-6751-3p过表达可通过下调FABP5基因能抑制胃癌MGC803细胞增殖和迁移能力。

简介：摘要目的探讨miR206在骨骼肌失神经萎缩中的作用机制。方法2020年9月至2020年12月，共选取40只SPF级SD大鼠进行本研究。应用16只SD大鼠剪除后肢坐骨神经1 cm建立腓肠肌失神经支配模型,分别在腓肠肌失神经支配时间0、3、7、14 d分为4组取材,每组4只,将样本进行湿重比测定观察无干预下大鼠肌肉失神经萎缩的变化。另24只大鼠同样建立腓肠肌失神经支配模型,并分为3组,每组8只,分别为：去神经加miR206转染组、去神经加对照转染组和假手术组,于失神经支配7 d后取材。将样本进行湿重比测定和Masson染色下肌纤维横截面积测量来评估肌肉萎缩的程度,并通过Western blot和qPCR检测腓肠肌中Myostatin和miR206的表达水平来评估二者的关系。细胞实验中,以C2C12细胞为对象,将带Myostatin（MSTN）mRNA 3'UTR端的荧光质粒和带mut MSTN mRNA 3'UTR端的荧光质粒,分别与mmu-miR206、mmu-miR206抑制剂、NC和NC抑制剂共转染,通过荧光素酶报告分析,对比各组的荧光强度来验证miR206和Myostatin的靶向关系。两组数据间比较采用t检验,多组数据结果间比较采用单因素方差分析,若组间差异有统计学意义,进一步以Bonferroni法进行两两比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果在去神经组观察中发现,大鼠腓肠肌湿重比整体随失神经支配时间延长而降低,于第7天时最为明显。去神经加miR206转染组、去神经加对照转染组和假手术组的腓肠肌湿重比分别为0.63±0.04、0.51±0.02和1.05±0.02,肌纤维横截面积分别为（761.30±21.79）、（640.30±30.31）和（1 066.00±51.65）μm2,各组间差异均有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示,去神经加miR206转染组中Myostatin的蛋白相对表达量低于去神经加对照转染组,qPCR结果显示两组Myostatin的mRNA相对表达量分别为0.57±0.04和0.81±0.04。无论蛋白和mRNA,去神经加miR206转染组中的相对表达量均低于去神经加对照转染组,差异均有统计学意义（P<0.05）。荧光素酶报告分析显示, mmu-miR206共转染MSTN荧光质粒组的荧光相对强度是（0.26±0.07）,显著低于其余各组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论外源性miR206能通过特定的作用靶点来抑制Myostatin的表达,进而在大鼠腓肠肌失神经性肌萎缩中发挥积极的作用,并且二者间存在靶向作用的可能。

简介：摘要目的探讨微小RNA（microRNA，miRNA，miR）-4753-3p对胃癌细胞株增殖、侵袭的影响及其调控机制。方法采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）分析胃癌细胞株（HS-746T、SGC7901、BGC823、MGC803）和正常胃黏膜上皮细胞（GES-1）中miR-4753-3p的表达。选择miR-4753-3p表达最低的胃癌细胞株，采用脂质体转染技术分别转染miR-NC（对照组）和miR-4753-3p mimics（试验组）。分别采用CCK-8法和Transwell侵袭试验检测miR-4753-3p对胃癌细胞株增殖、侵袭的影响。生物信息学预测miR-4753-3p可能的靶基因，采用双荧光素酶报告基因试验、qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）验证miR-4753-3p的靶基因。结果正常胃黏膜上皮细胞（GES-1）和胃癌细胞株（HS-746T、SGC7901、BGC823、MGC803）中miR-4753-3p的表达分别为（1.00±0.03）、（0.56±0.03）、（0.77±0.05）、（0.31±0.03）和（0.65±0.04）。与GES-1细胞相比，miR-4753-3p在胃癌细胞株中呈低表达（均P＜0.01），miR-4753-3p表达最低的胃癌细胞株是BGC823细胞（P＜0.01）。与对照组相比，过表达miR-4753-3p后BGC823细胞的增殖能力显著降低（P＜0.05），其侵袭能力显著降低（P＜0.01）。生物信息学显示胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2）可能是miR-4753-3p的靶基因。双荧光素酶报告基因结果显示miR-4753-3p可与IGFBP2信使RNA（mRNA）3’UTR互补结合（P＜0.01）。与对照组比较，高表达miR-4753-3p后BGC823细胞中IGFBP2基因表达明显下降（P＜0.01）。结论miR-4753-3p在胃癌细胞株中低表达，miR-4753-3p可能靶向负调控IGFBP2表达降低胃癌BGC823细胞增殖和侵袭能力。

简介：摘要目的观察miR-216a和ARID1A对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、周期和迁移能力的影响，揭示miR-216a在NSCLC中的作用及机制。方法前瞻性研究。收集2017年3月至2020年3月上海市浦东新区人民医院NSCLC手术且血浆miR-26a异常表达患者126例，所有患者进行肺部病灶的CT测量，检测ARID1A在NSCLC组织和癌旁正常组织中的表达水平；TargetScan和双荧光素酶报告基因试验筛选并证实miR-216a的靶基因，qRT-PCR和Western blot检测在A549细胞中转染miR-216a模拟物对ARID1A表达的影响。CCK8法、流式细胞法和Transwell实验分别检测miR-216a和ARID1A对A549细胞增殖、S期细胞比值及迁移的影响。建立肺癌裸鼠移植瘤模型，检测miR-216a对瘤体生长的影响。结果高表达miR-216a患者肺部病灶的轴位最大长径、与其垂直的最大短径、冠状位最大垂直长径均较miR-216a低表达者大，分别(3.83±0.59) cm、(2.38±0.41) cm、(4.13±0.72) cm比(2.31±0.45) cm、(1.69±0.34) cm、(2.41±0.48) cm；并且NSCLC组织中ARID1A的表达水平明显降低，miR-216a能靶向调控ARID1A的表达；在A549细胞中过表达miR-216a能促进细胞的增殖，S期阻滞和迁移能力，但上调ARID1A能逆转miR-216a的调控效果。在肺癌裸鼠移植瘤模型中，上调miR-216a的表达能抑制ARID1A并促进瘤体生长。结论miR-216a能通过靶向调控ARID1A的表达促进A549细胞的生物学行为及裸鼠中瘤体的生长，提示miR-216a对NSCLC可能具有促癌的作用。

简介：摘要目的初步研究恩度联合X线照射对心肌纤维母细胞(CF)影响及miR-21的作用。方法使用大鼠CF进行实验，设空白对照组、10 Gy X线照射组、恩度组、10 Gy X线+恩度组、10 Gy X线+恩度+NC mimics组(阴性对照组1)、10 Gy X线+恩度+miR-21 mimics组、10 Gy X线+恩度+NC抑制剂组(阴性对照组2)、10 Gy X线+恩度+miR-21抑制剂组。MTT法检测CF增殖，蛋白印迹法检测胶原蛋白I (Collagen Ⅰ)的表达、q-PCR检测Collagen Ⅰ和miR-21 mRNA的表达。结果与空白对照组、10 Gy X线+恩度组及阴性对照组1比较，10 Gy X线+恩度+miR-21 mimics组CF增殖及Collagen Ⅰ mRNA、miR-21 mRNA表达增加(均P<0.05)。与空白对照组、10 Gy X线+恩度组及阴性对照组2比较，10 Gy X线+恩度+miR-21抑制剂组的CF增殖及Collagen Ⅰ mRNA表达降低(均P<0.05)。结论模拟miR-21基因表达CF增殖和Collagen Ⅰ表达增加，抑制该基因表达CF增殖和Collagen Ⅰ表达降低。

简介：摘要目的探讨微小RNA-30c（miR-30c）是否通过靶向酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta多肽（YWHAZ）介导胰腺癌细胞对吉西他滨（gemcitabine，Gb）耐药性的作用。方法用RT-qPCR法筛选出人胰腺癌细胞系中miR-30c表达最低的SW1990细胞株，并建立吉西他滨耐药细胞株SW1990/吉西他滨，设置为SW1990/吉西他滨组（未转染）、miR-30c过表达（Ad-miR-30c）组、Ad-miR-30c阴性对照（Ad-eGFP）组、SW1990组。RT-qPCR法检测miR-30c水平；CCK-8法测细胞半数抑制浓度（IC50）及耐药指数（IR）；Western blot法检测耐药相关蛋白P-gp、凋亡相关蛋白Caspase-1、迁徙转移相关蛋白MMP-9、YWHAZ蛋白及下游通路-激酶丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/细胞外调节蛋白激酶1（ERK1）蛋白表达。共转染Ad-miR-30c及YWHAZ过表达腺病毒（Ad-YWHAZ），Western blot法测细胞P-gp及YWHAZ通路相关蛋白表达。结果SW1990/吉西他滨耐药细胞的IC50[（59.16±5.14）nmol/L]及IR（11.15±0.19）、YWHAZ蛋白（1.59±0.15）、P-gp（2.43±0.26）表达升高，miR-30c（0.25±0.02）表达降低（P<0.05），p38MAPK/ERK通路处于活化状态。上调SW1990/吉西他滨细胞中miR-30c（1.59±0.15）表达后，细胞的IC50[（25.14±2.15）nmol/L）及IR（5.48±0.12）、YWHAZ（1.49±0.13）、P-gp（1.46±0.10）降低（P<0.05），p38MAPK/ERK通路处于活化状态。上调YWHAZ表达，可逆转Ad-miR-30c的上述作用（P<0.05）。结论胰腺癌耐吉西他滨细胞株中miR-30c表达降低，上调miR-30c表达可靶向抑制YWHAZ/p38MAPK/ERK途径，并抑制耐药蛋白P-gp表达，降低胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药性。

简介：摘要目的探讨微小RNA-132（miR-132）对PC12细胞的保护作用及其可能的作用机制。方法研究时间为2021年9月至2022年3月。取对数生长期PC12细胞，采用谷氨酸处理，建立兴奋性损伤模型；实验组采用瞬时转染法转染miR-132 mimics，培养24 h后加入谷氨酸处理24 h。采用CCK8法检测各组PC12细胞存活率；流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）及丙二醛（MDA），酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达。采用LSD-t检验和χ2检验。结果谷氨酸处理后的PC12细胞，miR-132表达水平低于对照组（P<0.01）。转染miR-132 mimics后PC12细胞的活力均高于转染NC mimics后（P<0.05）。转染miR-132 mimics后的氧化应激水平较NC mimics组降低（均P<0.05）。miR-132 mimics细胞炎症因子下调。结论miR-132可促进PC12细胞的增殖、抑制PC12细胞凋亡，其机制可能为抑制氧化应激，下调炎症调节相关因子IL-1β、IL-6的表达。

简介：摘要目的研究子痫前期（PE）产妇胎盘组织中长链非编码RNA（lncRNA）的差异表达及其中之一MIR210HG对绒毛膜滋养层细胞系HTR8/SVneo细胞生物学特性的影响，并对MIR210HG进行功能分析。方法选取2018年7月至2019年7月青岛大学附属医院收治的PE产妇39例（PE组）和同期正常妊娠产妇39例（对照组）。（1）采用转录组测序（RNA-seq）技术分析两组产妇胎盘组织中差异表达的lncRNA；实时荧光定量PCR技术方法检测两组产妇胎盘组织中差异表达的lncRNA之一MIR210HG的表达水平，并分析MIR210HG表达水平与收缩压、舒张压和新生儿出生体重的相关性。（2）构建小分子干扰RNA（siRNA），转染HTR8/SVneo细胞以敲低MIR210HG的表达，实验分为两组，即MIR210HG敲低（KD）组（HTR8/SVneo细胞转染siRNA敲低了MIR210HG的表达）和阴性对照（NC）组（HTR8/SVneo细胞转染NC siRNA），采用活细胞计数（CCK-8）法、穿膜小室（transwell小室）体外实验检测两组HTR8/SVneo细胞增殖和迁移能力的变化。（3）采用RNA相互作用百科全书（ENCORI）数据库预测与MIR210HG相互作用的RNA，并采用基因本体（GO）功能注释、京都基因和基因组百科全书（KEGG）和BioCarta通路富集方法对MIR210HG的功能进行分析。结果（1）RNA-seq技术共检测出显著差异表达的lncRNA 26个，其中表达上调21个、下调5个。MIR210HG在PE组产妇胎盘组织中的表达水平显著高于对照组（分别为9.30±1.90、1.10±0.20；t=4.425，P<0.01）；MIR210HG的表达水平与收缩压（r2=0.234，P<0.05）和舒张压（r2=0.190，P<0.05）均呈线性正相关关系，与新生儿出生体重呈线性负相关关系（r2=0.157，P<0.05）。（2）与NC组相比，KD组HTR8/SVneo细胞的增殖和迁移能力均显著增强（P均<0.05）。（3）ENCORI数据库分析共预测出可能与MIR210HG相互作用的RNA 38个。GO功能注释分析显示，MIR210HG可能参与免疫应答分子中介物产生的调控等27条通路的功能；KEGG通路富集显示，MIR210HG可能参与同种异体移植物排斥等8条通路的功能；BioCarta通路富集显示，MIR210HG可能参与翻译起始因子通路等8条通路的功能。结论lncRNA MIR210HG在PE产妇的胎盘组织中表达上调，降低MIR210HG的表达水平可促进HTR8/SVneo细胞的增殖和迁移，MIR210HG可能是滋养层细胞生物学行为的调节因子。

简介：摘要目的探讨血清MIR4435-2HG水平在口腔鳞状细胞癌诊断和预后中的价值。方法本研究为回顾性病例对照研究。纳入癌症和肿瘤基因图谱（the cancer genome atlas project，TCGA）数据库中头颈部鳞状细胞癌的口腔鳞状细胞癌患者518个样本，以长链非编码RNA MIR4435-2HG表达量中位数为界，将患者分为高表达组和低表达组，比较两组患者的5年无病生存率和总生存率。收集2012年1月至2015年1月就诊于湖州师范学院附属口腔医院口腔颌面外科的82例口腔鳞状细胞癌患者的血清标本进行验证，探索MIR4435-2HG的预后价值。通过生物信息学手段预测MIR4435-2HG参与的生物学过程。运用SPSS 23.0设定MIR4435-2HG的最佳诊断和预后截点。结果分析TCGA数据库中518个口腔鳞状细胞癌患者样本显示，MIR4435-2HG高表达组患者的5年总生存率[43.2%（112/259）]显著低于MIR4435-2HG低表达组[51.7%（134/259）]（P<0.05）；MIR4435-2HG高表达组的5年无病生存率[56.8%（147/259）]显著低于MIR4435-2HG低表达组[64.1%（166/259）]（P<0.05）。82例口腔鳞状细胞癌患者样本验证结果显示，MIR4435-2HG高表达组的3年总生存率[40.0%（8/20）]显著低于MIR4435-2HG低表达组[80.6%（50/62）]（P<0.05）。对血清MIR4435-2HG高表达组和血清MIR4435-2HG低表达组患者的临床病理资料进行比较，结果显示两组患者的性别、年龄、肿瘤发生部位、TNM分期差异均无统计学意义（P>0.05）。MIR4435-2HG高表达组的淋巴结转移率[45.0%（9/20）]显著高于低表达组[12.9%（8/62）]（P<0.05），且高表达组的组织学分级[80.0 %（16/20）]显著高于低表达组[24.2 %（15/62）]（χ2=20.030，P<0.05）。生物信息学分析结果显示，MIR4435-2HG靶基因的生物功能主要富集于蛋白质代谢、核仁和胞质中rRNA的加工、SEMA4D诱导细胞迁移过程、线粒体翻译启动及伸长过程等。结论血清MIR4435-2HG可作为口腔鳞状细胞癌的潜在预后标志物。