简介：摘要目的探讨lncRNA HOTTIP通过调控miR-663a表达对4个非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响。方法用0、2、4、6、8 Gy分别照射H838、H157、A549、H1299细胞系，采用克隆形成实验检测细胞存活情况。qRT-PCR检测细胞中HOTTIP和miR-663a表达水平。以A549、H1299细胞为研究对象，沉默HOTTIP表达、过表达miR-663a后用克隆形成实验检测细胞存活情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H2AX表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证HOTTIP和miR-663a的靶向关系。结果HOTTIP在放射耐受的H157、A549、H1299细胞中表达上调，miR-663a表达下调。沉默HOTTIP或过表达miR-663a均可抑制A549、H1299细胞存活(放射增敏比分别为1.562、1.507)，促进Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H2AX表达，促进放射照射诱导细胞凋亡。miR-663a是HOTTIP的靶基因，HOTTIP可负性调控miR-663a的表达。抑制miR-663a表达可逆转沉默HOTTIP对肺癌细胞系放射敏感性的影响。结论沉默HOTTIP通过上调miR-663a表达，抑制肺癌细胞系存活，促进其凋亡，从而提高肺癌细胞系的放射敏感性。

简介：摘要目的探讨miR-146a基因单核苷酸多态位点rs2910164 G/C是否影响miR-146a的表达并改变其对胃癌的易感性。方法选取53例胃癌患者和6株胃癌细胞株(AGS、BGC-823、HGC27、MKN-28、MKN-45和SGC-7901)，采用Taqman定量PCR检测miR-146a的表达，构建miR-146a过表达细胞模型，探究miR-146a过表达对胃癌细胞AGS生长的影响，然后对417例胃癌患者和420名无癌对照者进行病例对照研究，检测miR-146a基因rs2910164位点的等位基因和基因型频率，基因分型采用Taqman等位基因判别法；用Taqman对65例已知基因型胃癌患者的成熟和pri-miR-146a转录本进行定量分析。结果miR-146a在53例胃癌和6种胃癌细胞系中表达下调，miR-146a的过表达通过抑制AGS细胞G1/S期转变抑制胃癌细胞生长；病例对照研究结果显示，与GG基因型受试者相比，携带GC/CC基因型的受试者患胃癌的风险显著降低；与GG基因型相比，GC/CC基因型miR-146a G/C SNP显著提高成熟miR-146a水平。结论miR-146a的下调在胃癌发生中发挥重要作用，miR-146a基因rs2910164多态位点可通过影响成熟miR-146a的加工过程而降低胃癌风险。

简介：摘要miR-203是近来研究发现的上皮特异性miRNA，通过调控靶mRNA转录后的表达，抑制角质形成细胞增殖潜能，诱导细胞周期退出和细胞分化，在上皮相关疾病中发挥重要作用。HPV通过抑制miR-203，调控下游靶基因以调节病毒生命周期。本文就miR-203的生物学特性，调控靶基因p63、survivin、细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）在HPV感染中的作用以及与宫颈癌、尖锐湿疣和口咽癌等相关疾病的研究进展作一综述。

简介：摘要目的研究高脂饮食小鼠腹脂微小RNA(miRNA)的差异表达，探讨高表达miR-335在脂类代谢过程中作用。方法对高脂饮食的小鼠腹脂进行miRNA芯片分析，检测小鼠腹脂miRNA的差异表达；采用生物信息学方法预测miR-335靶基因，双荧光素酶报告系统及点突变实验验证靶基因外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶4(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphordiester-ase4, ENPP4)和脂肪酸去饱和酶1(fatty acid desaturase1, FADS1)；3T3L1细胞中转染miR-335模拟体，检测靶基因mRNA和蛋白表达量；实时荧光定量PCR检测miR-335和靶基因在高脂饮食小鼠不同组织中的表达量。结果高脂饮食后，模型组小鼠体型明显大于对照组，小鼠血清总胆固醇(P＝0.016)和三酰甘油(P＝0.014)水平显著上升。高脂饮食的小鼠脂肪组织中多种miRNA发生差异表达，其中miR-335表达上升尤为明显(P＝0.024)。通过Targetscan预测miR-335靶基因，结合其功能，筛选出ENPP4和FADS1。报告基因试验显示miR-335通过"种子区"与ENPP4和FADS1预测靶位点结合从而抑制ENPP4和FADS1基因的表达，点突变实验证实了结合的靶位点；设计合成miR-335模拟体转染3T3L1细胞，培养48 h后，FADS1 mRNA表达水平显著下降(P＝0.038)，ENPP4和FADS1蛋白水平均显著下降(P＝0.033, P＝0.007)。与对照组相比，高脂饮食后miR-335在肝脏、白棕脂肪组织和脑中显著性高表达(P＝0.017, P＝0.002, P＝0.003, P＝0.031)；而ENPP4和FADS1在脑(P＝0.006, P＝0.034)和棕色脂肪组织(P＝0.014, P＝0.037)中表达量显著下降，同时ENPP4在肝脏中的表达量也极显著下降(P<0.001)。结论miR-335是与脂类代谢和脂肪沉积相关的miRNA，ENPP4和FADS1基因是miR-335的靶基因。

简介：摘要目的观察miR-3074-5p及其靶基因p27在子痫前期胎盘组织中的表达情况，初步探讨miR-3074-5p/p27分子途径在子痫前期病理过程中的作用。方法收集2017年9月至2018年3月期间在天津医科大学第二医院产科行剖宫产手术的子痫前期患者（子痫前期组，16例）和相同孕周非子痫前期的剖宫产产妇（对照组，9例）的胎盘组织，通过实时定量PCR、免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）和Western blotting检测，比较两组胎盘组织中miR-3074-5p以及p27、细胞周期蛋白D1（cyclin D1，CCND1）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2，CDK2）等蛋白的表达水平。应用双荧光素酶基因报告系统，验证miR-3074-5p对p27 mRNA的靶向抑制作用；通过RNA干扰技术，敲低人绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo中p27蛋白的表达水平，观察p27表达下调对细胞生理活性的影响。结果与对照组相比，子痫前期组胎盘组织中miR-3074-5p（P=0.034）与CCND1蛋白的表达量都显著下调（P=0.031），而p27蛋白的表达量则显著上调（P=0.010）；IHC结果显示，p27和CCND1蛋白主要表达于合体滋养层细胞中。双荧光素酶报告系统检测结果证实，miR-3074-5p能与p27 mRNA的3’UTR序列结合而抑制其表达；敲低HTR-8/SVneo细胞中p27的表达水平后，细胞的增殖（P=0.014）和侵袭（P=0.045）活性都显著增强。结论miR-3074-5p可能通过直接靶向抑制p27的表达而参与调控人绒毛外滋养层细胞的生理活性，进而影响胎盘发育及功能；胎盘组织中miR-3074-5p的异常低表达可能通过诱导p27的表达而参与子痫前期的病理过程。

简介：摘要目的研究miR-451对膀胱癌细胞迁移、侵袭及E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)基因表达的调控作用。方法培养人膀胱癌细胞株T24、5637、SW790并采用荧光定量PCR检测miR-451的表达量；T24细胞随机分为不转染模拟物的对照组、转染NC模拟物的NC组、转染miR-451模拟物的miR-451组，采用荧光定量PCR检测miR-451的相对表达量，采用Western blot检测E-cadherin和Vimentin的相对表达量，采用Transwell检测细胞的迁移、侵袭能力。结果T24细胞中miR-451的相对表达量均低于5637细胞、SW790细胞；在T24细胞中，miR-451组的miR-451相对表达量、E-cadherin相对表达量明显高于对照组、NC组，迁移能力、侵袭能力均明显弱于对照组、NC组，Vimentin相对表达量明显低于对照组、NC组。结论miR-451能够抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭且该抑制作用与增加E-cadherin表达、减少Vimentin表达有关。

简介：摘要目的探讨miR－513a－3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用脂质体法将miR－NC、miR－513a－3p、anti－miR－NC、anti－miR－513a－3p、si－NC、si－MDM2、miR－513a－3p＋pcDNA3.1和miR－513a－3p＋pcDNA3.1－MDM2转染至BGC－823细胞中，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT－PCR)检测miR－513a－3p的表达水平，采用Western blot检测cyclin D1、MMP－2、p21、E－cadherin和MDM2蛋白的表达水平，四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC－823的活性，Transwell法检测各组胃癌细胞BGC－823的迁移和侵袭能力，双荧光素酶报告基因检测实验检测miR－513a－3p与MDM2的靶向关系。结果胃癌细胞BGC－823、MGC－803中miR－513a－3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03，与胃上皮细胞GES－1(0.76±0.08)比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后，miR－NC组细胞的吸光度(A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14，miR－513a－3p组细胞的A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06，差异均有统计学意义(均P<0.05)；miR－NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个，miR－513a－3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个，差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后，si－NC组细胞的A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14，si－MDM2组细胞的A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08；si－NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个，si－MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个，差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后，miR－513a－3p＋pcDNA3.1组细胞的A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06，miR－513a－3p＋pcDNA3.1－MDM2组细胞的A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12，差异均有统计学意义(均P<0.05)；miR－513a－3p＋pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个，miR－513a－3p＋pcDNA3.1－MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR－513a－3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关，可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。

简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-5787在乳腺癌组织及多种乳腺癌细胞系中的表达，分析过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-5787在47例乳腺癌组织及癌旁组织、4种乳腺癌细胞系及正常乳腺上皮细胞中的表达。选择miR-5787表达最低的乳腺癌细胞系，分别转染miR-5787模拟物(实验组)和对照NC模拟物(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中miR-5787的表达。Transwell侵袭实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)分别检测过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-5787可配对结合的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测靶基因mRNA及蛋白的表达。结果与癌旁组织(5.05±0.82)相比，乳腺癌组织miR-5787的表达(1.32±0.33)明显降低(P<0.01)。与正常乳腺上皮细胞相比，4种乳腺癌细胞系miR-5787的表达均降低(P<0.05)，HCC1937细胞中的表达最低(P<0.01)。转染miR-5787模拟物后，实验组HCC1937细胞中miR-5787的表达明显高于对照组(P<0.01)，表明转染成功。过表达miR-5787可抑制乳腺癌HCC1937细胞的侵袭(P<0.05)和增殖(P<0.05)。生物信息学软件预测miR-5787的靶基因可能是硫酸乙酰肝素糖蛋白2(HSPG2)，miR-5787可配对结合HSPG2 mRNA(P<0.01)。qRT-PCR和Western blot结果显示，过表达miR-5787可明显抑制HSPG2蛋白和mRNA的表达(P<0.01)，波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显降低(P<0.05)。结论乳腺癌组织和细胞系中miR-5787均呈低表达，过表达miR-5787通过靶向干扰HSPG2基因的表达，抑制乳腺癌HCC1937细胞的侵袭和增殖。

简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-5787在乳腺癌组织及多种乳腺癌细胞系中的表达，分析过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-5787在47例乳腺癌组织及癌旁组织、4种乳腺癌细胞系及正常乳腺上皮细胞中的表达。选择miR-5787表达最低的乳腺癌细胞系，分别转染miR-5787模拟物(实验组)和对照NC模拟物(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中miR-5787的表达。Transwell侵袭实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)分别检测过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-5787可配对结合的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测靶基因mRNA及蛋白的表达。结果与癌旁组织(5.05±0.82)相比，乳腺癌组织miR-5787的表达(1.32±0.33)明显降低(P<0.01)。与正常乳腺上皮细胞相比，4种乳腺癌细胞系miR-5787的表达均降低(P<0.05)，HCC1937细胞中的表达最低(P<0.01)。转染miR-5787模拟物后，实验组HCC1937细胞中miR-5787的表达明显高于对照组(P<0.01)，表明转染成功。过表达miR-5787可抑制乳腺癌HCC1937细胞的侵袭(P<0.05)和增殖(P<0.05)。生物信息学软件预测miR-5787的靶基因可能是硫酸乙酰肝素糖蛋白2(HSPG2)，miR-5787可配对结合HSPG2 mRNA(P<0.01)。qRT-PCR和Western blot结果显示，过表达miR-5787可明显抑制HSPG2蛋白和mRNA的表达(P<0.01)，波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显降低(P<0.05)。结论乳腺癌组织和细胞系中miR-5787均呈低表达，过表达miR-5787通过靶向干扰HSPG2基因的表达，抑制乳腺癌HCC1937细胞的侵袭和增殖。

简介：摘要目的探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中，并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组；将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20、40、80 μmol/L)处理的C4-2细胞的增殖情况。40 μmol/L姜黄素处理C4-2细胞后，Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力；qRT-PCR检测细胞的miR-199a-3p表达量。将inhibitor NC、miR-199a-3p inhibitor转染至C4-2细胞中，再用40 μmol/L姜黄素处理48 h，采用MTT法、Transwell法检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况；Western blot检测各组C4-2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、β-catenin、Cyclin D1和c-Myc的蛋白表达量。结果与对照组比较，姜黄素能明显抑制C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。姜黄素(40 μmol/L)处理后，C4-2细胞中miR-199a-3p的表达量显著增加(P<0.05)。抑制miR-199a-3p的表达，可逆转姜黄素对C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。使用姜黄素处理miR-199a-3p低表达的C4-2细胞后，与anti-miR-con组相比，anti-miR-199a-3p组C4-2细胞的MMP-2、MMP-9的表达量显著增加(P<0.05)，β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达量均显著增加(P<0.05)。结论姜黄素可上调miR-199a-3p的表达，从而抑制前列腺癌C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的探究miR-519d对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)细胞增殖作用的影响及其潜在的作用机制。方法通过对芯片GSE19945的中NSCLC癌和癌旁组织中不同miRNA的差异表达，Starbase(http：//starbase.sysu.edu.cn)数据分析CC趋化因子受体7(CC chemokine receptor 7, CCR-7)在NSCLC患者中的表达，预后miR-519d以及CCR-7两者的相关性。生物信息方法miR-519d与CCR-7潜在的结合位点。实时定量PCR检测A549细胞中转染miR-519d后miR-519d的表达；通过CCK-8检测不同表达miR-519d对于A549细胞活性的影响，克隆形成以及Ki67检测过表达或者低表达miR-519d后对于A549细胞增殖能力的影响。荧光素酶报告验证CCR-7与miR-519d的靶向作用。采用应用免疫蛋白印迹(Western blot)检测不同表达miR-519d后A549细胞中PCNA、Bax以及CCR-7蛋白的表达。结果对于芯片GSE19945结果分析，发现miR-519d在癌症组织中明显低表达(P＝0.045)，在NSCLC中miR-519d表达明显高于正常组织；低表达miR-519d的患者生存率明显高于高表达miR-519d的NSCLC患者(P＝0.009)，同时，CCR-7在NSCLC患者组织中的表达明显升高，低表达CCR-7的患者生存率明显高于过表达CCR-7的NSCLC患者，且miR-519d与CCR-7在NSCLC患者中表达呈负相关。高表达miR-519d后，A549细胞活性相对于阴性对照组明显降低(P＝0.043)，而低表达miR-519d后活性明显升高(P＝0.031)。过表达miR-519d后A549细胞增殖能力相对于阴性对照组明显降低。生物信息学结果显示miR-519d与CCR-7有潜在的结合位点。Western blot结果表明，不同表达的miR-519d能够影响增殖相关蛋白PCNA以及Bax表达(P＝0.029、0.031)。过表达miRNA-519d后CCR-7表达相对于阴性对照组明显降低(P＝0.038、0.027)，而低表达miRNA-519d后，CCR-7表达明显升高(P＝0.043、0.030)，同时荧光素酶报告结果显示，CCR-7是miRNA-519d的直接作用靶点(P＝0.031)。结论miR-519d能通过靶向调控CCR-7基因的表达进而调控NSCLC细胞增殖，同时miR-519d也是NSCLC患者预后的一个相关因子，本实验结果为miR-519d成为预防、诊断和治疗NSCLC的潜在靶点提供了理论依据。

简介：摘要目的探究桥本甲状腺炎(HT)患者外周血miR-454、miR-146a水平及意义。方法选取2018年1月至2020年6月来芜湖市第一人民医院就诊的桥本甲状腺炎患者56例作为HT组，并根据甲状腺功能分成甲状腺功能正常(HT-A组)16例，亚临床甲状腺功能减退(HT-B组)19例，临床甲状腺功能减退(HT-C组)21例，同期选取体检健康者50名作为健康组，比较HT组与健康组的甲状腺功能[促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)]、及外周血miR-454、miR-146a表达水平，探究miR-454、miR-146a与HT病情的关系。结果HT-A组、HT-B组、HT-C组外周血miR-454及miR-146a表达水平均高于健康组，随HT患者甲状腺功能减退而升高(P均<0.05)；miR-454与TSH、TgAb、TPOAb均呈正相关，与FT3、FT4呈负相关(P<0.05)；miR-146a与TSH、TgAb、TPOAb均呈正相关，与FT3、FT4呈负相关(P均<0.05)。结论HT患者外周血中miR-146a及miR-454水平均较健康人高，miR-146a及miR-454可能与甲状腺功能减退相关。

简介：摘要目的检测肾移植受者术后血浆外泌体miR-21、miR-210和miR-4639表达变化，分析外泌体miR-21、miR-210和miR-4639单独及联合对肾移植术后并发慢性移植肾肾病(CAN)的诊断价值。方法回顾性分析2018年1月至2019年1月苏州大学附属第三医院泌尿外科实施的同种异体肾移植受者临床资料，最终纳入34例受者，根据肾移植术后是否发生CAN将其分为CAN组及对照组。采用凝胶排阻色谱法提取血浆外泌体，采用Nanosight NS300分析外泌体粒径，采用蛋白质印迹法(WB)分析外泌体表面标志物(CD63和Alix)表达情况。采用卡方检验比较CAN组和对照组受者性别比例。采用成组t检验比较两组受者移植前年龄、末次血清肌酐、血清尿素氮和估算肾小球滤过率(eGFR)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆外泌体miR-210、miR-21和miR-4639对肾移植术后并发CAN的诊断效能。P<0.05为差异有统计学意义。结果CAN组(n＝18例)和对照组(n＝16例)受者性别以及移植前年龄、末次血清肌酐、血清尿素氮和eGFR差异均无统计学意义(χ2＝0.04、t＝0.86、-1.84、-1.83和0.85，P均>0.05)。透射电镜、Nanosight NS300及WB检测结果均提示提取样本为血浆外泌体。CAN组与对照组血浆外泌体miR-210、miR-21和miR-4639相对表达量差异均有统计学意义(t＝4.13、3.38和2.33，P均<0.05)。miR-210预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.854(95%CI：0.730～0.979，P<0.05)，当截断值＝1.320时，敏感度为66.7%，特异度为93.8%。miR-21预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.774(95%CI：0.618～0.931，P<0.05)，当截断值＝1.243时，敏感度为55.6%，特异度为93.8%。miR-4639预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.670(95%CI：0.482～0.859，P<0.05)，当截断值＝0.936，敏感度为66.7%，特异度为75.0%。随后，构建基于miR-210、miR-21和miR-4639 3个指标的联合诊断模型，回归方程z＝5.293×[miR-210]＋5.046×[miR-21]＋0.433×[miR-4639]-13.373，联合预测概率值p＝ez/(1＋ez)。miR-210、miR-21和miR-4639联合预测肾移植术后并发CAN的ROC曲线下面积为0.938(95%CI：0.860～1.015，P<0.05)，当截断值＝0.587，敏感度为83.33%，特异度为93.75%。当联合预测值为0.587时，CAN组有83.3%(15/18)的个体被联合预测模型诊断出阳性结果，而对照组有93.8%(15/16)的个体被联合预测模型诊断出阴性结果，表明该联合预测模型有较好的诊断价值。结论miR-210、miR-21和miR-4639组成的miRNA阵列可能可以用于早期诊断肾移植术后并发CAN。

简介：摘要目的构建携带过表达miR181a的慢病毒载体，转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSC)，使基因修饰后的BMSC持续高水平表达miR181a。方法将miR181a质粒与三种助转质粒PRSV，PRRE，VSVG共同转染进293T细胞中，构建含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFP)的过表达miR181a的慢病毒表达载体。72 h后收获过表达miR181a的病毒液，转染BMSC。用嘌呤霉素筛选，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，即miR181a-BMSC。结果成功构建出携带miR181a的慢病毒载体，转染率超过95%。嘌呤霉素筛选BMSC，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，与BMSC组相比，miR181a-BMSC组中，miR181a的表达量明显增多，差异具有统计学意义(3.80比25.92，t＝19.401，P<0.05)。提取BMSC和miR181a-BMSC的外泌体，纯化后miR181a-BMSC的外泌体内miR181a表达量明显增高，差异具有统计学意义(1.41比0.87，t＝6.003，P<0.05)。结论成功构建出慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞。

简介：摘要目的探讨乳腺癌中长链非编码RNA（LncRNA）牛磺酸调节基因（TUG）1和miR-132表达情况及两者表达水平与患者预后的关系。方法收集2014年1月至2017年11月如皋市人民医院90例手术切除的乳腺癌组织和相应癌旁组织，采用qRT-PCR法检测TUG1和miR-132表达水平，使用Kaplan-Meier法计算TUG1和miR-132表达对乳腺癌患者生存率的影响，采用Cox回归模型分析乳腺癌预后的影响因素。结果与癌旁组织相比，乳腺癌组织中TUG1表达水平明显升高（t=65.781，P<0.001），miR-132表达水平显著下降（t=33.089，P<0.001），均与雌激素受体（ER）、人表皮生长因子受体2（HER-2）、FIGO分期、分化程度和淋巴结转移相关（均P<0.05）。乳腺癌组织中TUG1和miR-132表达之间呈负相关关系（r=-0.767，P=0.025）。TUG1高表达者3年生存率为80.77%（42/52），显著低于低表达者97.37%（37/38）（χ2=5.639，P=0.018）；miR-132低表达者3年生存率为81.25%（39/48），显著低于高表达者95.24%（40/42）（χ2=4.085，P=0.043）。Cox回归分析发现，ER、HER-2、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、TUG1和miR-132均是乳腺癌患者预后的影响因素（均P<0.05）。结论在乳腺癌组织中，TUG1表达水平显著上调，miR-132表达水平显著下调，且两者呈负相关，都是影响预后的独立因素。TUG1可能通过调控miR-132的表达发挥促癌基因的作用，有望成为乳腺癌独立预后标志物和治疗新靶点。

简介：摘要目的探讨吉非替尼敏感与耐药非小细胞肺癌(NSCLC)患者miR-200c、miR-19a、miR-155表达差异，并分析miR-200c、miR-19a、miR-155表达差异对患者预后的影响。方法选取2015年8月1日至2019年8月1日南京医科大学第四附属医院采用吉非替尼治疗的80例Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者作为研究对象，其中吉非替尼敏感患者36例，作为敏感组，吉非替尼耐药患者44例，作为耐药组。比较两组患者一般资料、血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平，探究NSCLC患者吉非替尼敏感影响因素及血清miR-200c、miR-19a、miR-155与NSCLC患者临床病理特征的相关性。分析患者生存情况。结果与耐药组比较，敏感组患者吸烟例数较少(χ2＝5.541，P＝0.019)、临床分期Ⅲ期例数较多(χ2＝8.984，P＝0.003)、分化程度高分化例数较多(χ2＝8.673，P＝0.003)、淋巴结转移例数较少(χ2＝6.082，P＝0.014)、血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平均较高(t＝7.249，P<0.001；t＝8.222，P<0.001；t＝10.467，P<0.001)。多因素logistic回归分析显示，吸烟(OR＝0.355，95%CI为0.149～0.845，P<0.001)、临床分期(OR＝0.494，95%CI为0.274～0.892，P＝0.021)、分化程度(OR＝6.062，95%CI为3.258～11.279，P＝0.013)、淋巴结转移(OR＝0.422，95%CI为0.245～0.726，P＝0.019)、血清miR-200c(OR＝5.521，95%CI为3.126～9.752，P<0.001)、miR-19a(OR＝5.384，95%CI为2.947～9.836，P<0.001)、miR-155(OR＝5.325，95%CI为3.058～9.274，P<0.001)水平均为NSCLC患者吉非替尼敏感的影响因素。血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平与NSCLC患者临床分期(t＝3.230，P＝0.002，r＝-0.578；t＝3.188，P＝0.002，r＝-0.612；t＝3.123，P＝0.003，r＝-0.594)、分化程度(t＝2.586，P＝0.012，r＝0.610；t＝4.009，P<0.001，r＝0.632；t＝4.773，P<0.001，r＝0.594)、淋巴结转移(t＝2.902，P＝0.005，r＝-0.587；t＝3.721，P<0.001，r＝-0.629；t＝3.391，P＝0.001，r＝-0.614)均显著相关。与miR-200c、miR-19a、miR-155低水平患者比较，miR-200c(63.19% vs. 4.37%，χ2＝32.562，P<0.001)、miR-19a(61.01% vs. 4.75%，χ2＝37.807，P<0.001)以及miR-155(57.82% vs. 0，χ2＝44.454，P<0.001)高水平患者1年生存率均较高，差异均有统计学意义。结论血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平在吉非替尼敏感NSCLC患者中明显升高，是吉非替尼敏感的重要影响因素，且与NSCLC患者临床分期、分化程度、淋巴结转移密切相关，血清高水平患者预后较好。

简介：摘要目的探讨微小RNA-214（miR-214）和miR-181c在胃癌组织中的表达水平及对预后的影响。方法选取2014年1月至2015年1月于川北医学院附属医院收治的68例胃癌患者为研究对象，均接受手术治疗，出院后随访1~60个月。利用实时荧光定量PCR技术检测患者癌组织和癌旁组织miR-214、miR-181c相对表达量；利用Kaplan-Meier曲线进行生存分析；Cox多因素回归分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。结果胃癌组织中miR-214、miR-181c表达水平均明显低于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）。根据miR-214、miR-181c表达均值将患者分为高表达组和低表达组，miR-214、miR-181c表达水平与年龄、性别、淋巴结是否转移无关，与TNM分期、肿瘤分化程度有关（P<0.05）。患者总生存率为44.12%，miR-214低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.71%、57.69%，两组间比较差异有统计学意义（P=0.035）；miR-181c低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.55%、60.87%，差异有统计学意义（P=0.024）。Cox多因素回归分析结果显示，TNM分期高（HR=1.569，95% CI：1.029~2.391，P=0.036）、miR-214低表达（HR=1.643，95% CI：1.294~2.087，P<0.001）及miR-181c低表达（HR=1.327，95% CI：1.045~1.685，P=0.021）是影响胃癌患者预后的独立危险因素。结论miR-214、miR-181c在胃癌组织中表达显著下调，与胃癌患者临床病理参数及不良预后有关，参与胃癌的发生发展过程。

简介：摘要目的研究老年宫颈癌组织中微小RNA（micro RNA，miR）-424、miR-19a及miR-95的表达及各指标与放疗敏感性的相关性。方法应用荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测82例老年宫颈癌组织及癌旁正常组织中miR-424、miR-19a、miR-95的表达。统计学分析组间miR-424、miR-19a、miR-95的表达差异及与临床病理特征的关系，分析放疗前后各指标表达变化与放疗敏感性的相关性。结果与癌旁组织相比，宫颈癌组织中miR-19a表达明显较高，而miR-424、miR-95的表达明显较低（均P<0.05）。癌组织miR-424、miR-19a及miR-95表达与肿瘤FIGO分期、肿瘤分化有关（均P<0.05）。与放疗前相比，放疗后癌组织miR-19a表达降低，而miR-424、miR-95升高（均P<0.05）。放疗前后癌组织中miR-424、miR-19a及miR-95表达变化与放疗前后肿瘤体积变化呈显著正相关（r＝0.625、0.578、0.611，均P<0.001）。放疗有效组患者放疗后癌组织中miR-19a水平较放疗前显著降低，而miR-424、miR-95显著升高（均P<0.05），而放疗无效组患者放疗前后miR-424、miR-19a及miR-95表达差异无统计学意义（均P>0.05）。结论老年宫颈癌患者癌组织中miR-19a表达升高，而miR-424、miR-95的表达降低，并且三者放疗前后水平变化与放疗敏感性有关，有望成为新的肿瘤标志物。

简介：摘要目的构建小鼠miR-204过表达重组慢病毒载体，并在二氧化硅（SiO2）诱导的小鼠肺上皮细胞（MLE-12细胞）中验证miR-204与DVL3的靶向调控作用。方法于2019年10月，从小鼠基因组中应用聚合酶链式反应（PCR）法扩增出pre-miR-204基因，测序后将扩增产物克隆到pLenti-CMV-EGFP慢病毒载体，通过PCR筛选及测序对阳性克隆进行鉴定。将miR-204过表达慢病毒载体转染至293T细胞，进行慢病毒的包装和滴度测定，研究分为SiO2对照组、病毒对照组及miR-204病毒组，实时荧光PCR检测miR-204和DVL3基因的表达。结果构建miR-204慢病毒表达载体Lv-miR-204-5p经PCR和测序鉴定正确，并获得滴度为9.57×108 IU/ml的病毒稀释液；实时荧光PCR检测结果显示，miR-204病毒组MLE-12细胞中miR-204基因的表达高于SiO2对照组和病毒对照组，DVL3基因的表达低于SiO2对照组和病毒对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论miR-204过表达慢病毒载体可能在SiO2诱导的MLE-12细胞中抑制DVL3基因的表达。

简介：摘要目的通过整合癌症基因组图谱中肝细胞癌DNA甲基化谱和基因表达谱，分析肝细胞癌中miR-1180-3p表达水平并构建其相关ceRNA调控网络。方法用癌症基因组图谱数据库分析肝细胞癌及癌旁组织中miR-1180-3p的表达水平，并筛选出差异表达长链非编码RNA（lncRNA）和mRNA。分别用LncBase数据库和TargetScan数据库预测miR-1180-3p与lncRNA和mRNA的靶向作用关系，并通过lncRNA的DNA甲基化谱筛选出DNA甲基化介导的lncRNA。用Cytoscape软件构建miR-1180-3p相关ceRNA网络，并用WebGestalt网站对ceRNA中相关mRNA进行GO分析和KEGG分析。结果相比于低表达miR-1180-3p的患者[总生存时间（5.69±0.35）年]，高表达miR-1180-3p患者的总生存时间较短[总生存时间（3.99±0.47）年]，提示miR-1180-3p高表达是影响肝细胞癌预后的危险因素（风险比= 1.28, 95%可信区间为1.1～1.5, P < 0.01）。研究中构建的miR-1180-3p相关ceRNA调控网络包含2个lncRNA（F11-AS1和LINC01511）以及37个mRNA。结论成功构建了miR-1180-3p相关ceRNA调控网络，其中DNA甲基化介导的F11-AS1及F11-AS1/miR-1180-3p/C11of54 ceRNA调控轴在肝细胞癌的发生和发展中起重要作用。