简介:摘要目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSC)联合自体Meek微型皮片移植对大面积烧伤患者的效果。方法采用前瞻性自身对照研究方法。2019年5月—2022年6月,解放军联勤保障部队第九九〇医院收治的16例大面积烧伤患者符合入选标准,按照剔除标准剔除3例患者,最终纳入13例患者,其中男10例、女3例,年龄24~61(42±13)岁。共选择受试区20个(创面40个,大小均为10 cm×10 cm)。采用随机数字表法将每个受试区中的2个相邻创面分为涂抹含hUCMSC透明质酸凝胶的hUCMSC+凝胶组及涂抹单纯透明质酸凝胶的单纯凝胶组,每组20个创面,随后2组创面均移植扩展比例为1∶6的自体Meek微型皮片。术后2、3、4周,观察创面愈合情况并计算创面愈合率,记录创面愈合时间。术后,若创面出现脓性分泌物,则采集创面分泌物标本行微生物培养。术后3、6、12个月,采用温哥华瘢痕量表评估创面瘢痕增生情况。术后3个月,取创面组织,行苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤组织形态学变化,行免疫组织化学染色观察Ki67阳性和波形蛋白阳性表达情况并统计阳性细胞数。对数据行配对样本t检验及Bonferroni校正。结果术后2、3、4周,hUCMSC+凝胶组创面愈合率分别为(80±11)%、(84±12)%、(92±9)%,均明显高于单纯凝胶组的(67±18)%、(74±21)%、(84±16)%(t值分别为4.01、3.52、3.66,P<0.05)。hUCMSC+凝胶组创面愈合时间为(31±11)d,较单纯凝胶组的(36±13)d明显缩短(t=-3.68,P<0.05)。术后,相邻的2组创面分泌物标本微生物培养情况均相同,4个受试区结果为阴性,16个受试区结果为阳性。术后3、6、12个月,单纯凝胶组创面温哥华瘢痕量表评分分别为(7.8±1.9)、(6.7±2.1)、(5.4±1.6)分,均明显高于hUCMSC+凝胶组的(6.8±1.8)、(5.6±1.6)、(4.0±1.4)分(t值分别为-4.79、-4.37、-5.47,P<0.05)。术后3个月,HE染色显示,hUCMSC+凝胶组创面表皮层厚度、表皮嵴等较单纯凝胶组增加;免疫组织化学染色显示,hUCMSC+凝胶组创面Ki67阳性细胞数较单纯凝胶组明显增加(t=4.39,P<0.05),2组创面波形蛋白阳性细胞数无明显差异(P>0.05)。结论将含hUCMSC的透明质酸凝胶涂抹于创面的应用方式操作方便,是一种较佳的给药途径。hUCMSC外用可促进大面积烧伤患者自体Meek微型皮片移植术区愈合,缩短创面愈合时间,减轻瘢痕增生,可能与创面表皮层厚度、表皮嵴增加和细胞增殖活跃有关。
简介: 摘要:目的:探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体miRNA介导TNF-α通过NF-κB信号通路对BMSCs成骨分化的影响。方法:将MC3T3-E1细胞株分对照组(正常培养的MC3T3-E1细胞株)、BMSCs-EXOS组(MC3T3-E1细胞株与BMSCs-EXOS共同培养)、BMSCs-miR-326-EXOS mimics组(MC3T3-E1细胞株与BMSCs-miR-326-EXOS mimics共同培养)、BMSCs-miR-326-EXOS-NC- mimics组(MC3T3-E1细胞株与BMSCs-miR-326-EXOS-NC- mimics共同培养)、BMSCs-miR-326-EXOS inhibitor组(MC3T3-E1细胞株与BMSCs-miR-326-EXOS inhibitor共同培养)及BMSCs-miR-326-EXOS-NC inhibitor组(MC3T3-E1细胞株与BMSCs-miR-326-EXOS inhibitor共同培养)。采用qRT-PCR方法检测各组细胞miR-326表达;茜素红染色定量分析矿化;碱性磷酸酶染色检测分化;免疫印迹检测各组细胞ALP、OPG、BMP2、TNF-α及NF-κB蛋白水平。结果:与对照组相比,BMSCs-EXOS组miR-326 mNRA表达、茜素红染色定量、ALP活性、ALP、OPG、BMP2蛋白水平升高,TNF-α及NF-κB蛋白水平降低(P<0.05),BMSCs-EXOS组及BMSCs-miR-326-EXOS-NC- mimics组组间比较无意义(P>0.05),与BMSCs-miR-326-EXOS-NC- mimics组相比,BMSCs-miR-326-EXOS-mimics组miR-326 mNRA表达、茜素红染色定量、ALP活性、ALP、OPG、BMP2蛋白水平升高,TNF-α及NF-κB蛋白水平降低(P<0.05),BMSCs-miR-326-EXOS-NC inhibitor组无意义(P>0.05),BMSCs-miR-326-EXOS inhibitor组miR-326 mNRA表达、茜素红染色定量、ALP活性、ALP、OPG、BMP2蛋白水平降低,TNF-α及NF-κB蛋白水平升高(P<0.05)。结论:骨髓间充质干细胞源性外泌体miR-326可通过抑制TNF-α及NF-κB蛋白而促进BMSCs成骨分化。
简介:摘要:瘾疹是一种常见的皮肤病疾病;王杏林主任医师认为该病分为虚实两端;实证多于风邪有关,主要有风寒束表、风热犯表、湿热束表,虚证多与血虚相关,虚证主要有血虚风燥有关。
简介:内容摘要:王船山思想是湖湘文化的高地。本文从王船山思想中的教育的潜移默化与长远之功、教育的止于至善与实践之用、教育的教化明德与新民之用等三个方面,论述王船山的教育思想对当代职业教育的重要启示作用。
简介:摘要目的研究脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ASCs)来源外泌体抑制高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导心肌细胞损伤的影响。方法购买ASCs细胞株、心肌H9c2细胞株,培养并鉴定ASCs并分离外泌体;培养心肌H9c2细胞并建立H/R损伤模型。将H9c2细胞分为对照组、H/R组、外泌体+H/R组。为验证HMGB1/NF-κB途径在外泌体减轻心肌细胞损伤中的作用,H9c2细胞被分为Ad-NC组、Ad-NC+H/R组、Ad-NC+H/R+外泌体组、Ad-HMGB1+H/R+外泌体组。检测各组细胞存活率、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶( creatine phosphate kinase,CPK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及HMGB1、NF-κB表达水平。结果透视电镜及特异性蛋白CD9与CD63检测显示成功获得了ASCs并分离外泌体。外泌体2 μg/mL及细胞培养48 h分别为本研究的ASCs来源外泌体浓度及培养时间。与对照组、H/R+外泌体组比较,H/R组细胞存活率明显降低,细胞培养基中LDH、AST、CPK、IL-1β、TNF-α、MDA的含量明显增加,细胞中HMGB1、NF-κB的表达水平明显增加,组间差异均具有统计学意义(F值分别为64.81、81.38、77.38、94.71、53.82、71.38、49.57、29.59、41.38,P值均<0.05)。过表达HMGB1后,Ad-NC组、Ad-NC+H/R组及Ad-HMGB1+H/R+外泌体组细胞中HMGB1和NF-κB的表达水平较Ad-NC+H/R+外泌体组明显升高,组间差异具有统计学意义[(0.42±0.07)比(0.93±0.17)比(0.78±0.14)比(0.34±0.08),(0.48±0.08)比(0.84±0.15)比(0.89±0.17)比(0.37±0.06),F值分别为83.91、77.59,P值均<0.05]。与Ad-NC+H/R组比较,Ad-NC组、Ad-NC+H/R+外泌体组及Ad-HMGB1+H/R+外泌体组的细胞存活率明显升高,培养基中LDH、AST、CPK的含量明显降低,组间差异有统计学意义[F值分别为71.85,103.85,88.47,115.49,P值均<0.05];Ad-NC+H/R+外泌体组细胞存活率较Ad-HMGB1+H/R+外泌体组明显降低,培养基中LDH、AST、CPK的含量则较之明显增加,差异均有统计学意义[%:(81.25±9.77)比(53.23±8.12),U/mL:(367.68±61.32)比(603.38±87.67),U/mL:(26.34±5.18)比(40.38±9.12),U/mL:(2.46±0.57)比(5.22±0.74),P值均<0.05]。与Ad-NC组比较,Ad-NC+H/R组、Ad-NC+H/R+外泌体组及Ad-HMGB1+H/R+外泌体组细胞培养基中IL-1β、TNF-α、MDA含量明显升高,组间差异有统计学意义[ng/mL:(1.77±0.35)比(5.45±0.89)比(2.67±0.42)比(5.08±0.77),ng/mL:(3.56±0.73)比(9.23±1.18)比(5.24±0.87)比(8.62±1.09),μmol/mL:(0.91±0.14)比(2.15±0.45)比(1.31±0.27)比(1.89±0.29),F值分别为91.58,83.58,64.84,P值均<0.05]。结论ASCs来源外泌体具有减轻心肌细胞H/R损伤的作用,这一作用与抑制HMGB1/NF-κB途径介导的炎症反应及氧化应激反应有关。
简介:摘要目的分析和验证盐诱导激酶2 (SIK2)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达并探究其对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法利用Ualcan在线分析工具探索SIK2在TNBC中表达情况,结合8对TNBC组织标本运用荧光定量PCR技术进行验证。构建SIK2重组过表达质粒(GV703-SIK2)并包装重组慢病毒。分别感染TNBC细胞株MDA-MB-231和HCC1937,经嘌呤霉素筛选构建SIK2稳定过表达细胞株和阴性对照细胞株。用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TNBC细胞株中SIK2表达水平,通过划痕实验和Transwell小室实验观察SIK2过表达对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响;采用Western blot分析SIK2过表达后对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子SNAI1蛋白(Snail)、锌指转录因子SNAI2(Slug)、磷酸化SMAD家族成员2(p-SMAD2)蛋白、磷酸化SMAD家族成员3(p-SMAD3)蛋白表达水平的影响。组间比较采用t检验。结果SIK2 mRNA在TNBC组织中表达明显低于其配对癌旁组织(t=2.199,P<0.05)。SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞SIK2蛋白表达水平(2.105±0.148、0.942±0.204)明显高于其对照组(0.053±0.007、0.024±0.007),差异有统计学意义(t=24.030、7.792,P<0.01)。划痕实验结果显示SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞划痕愈合率[(61.700±5.126)%、(58.360±14.380)%]均明显低于其对照组[(87.870±1.097)%、(91.410±7.486)%],差异有统计学意义(t=8.645、3.530,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞穿过小室数量[(111.700±15.310)、(101.700±14.220)个]明显低于其对照组[(183.000±19.970)、(187.000±15.100)个],差异有统计学意义(t=4.909、7.125,P<0.01)。SIK2过表达组E-cadherin表达水平(0.754±0.186)明显高于对照组(0.298±0.066),差异有统计学意义(t=3.995,P<0.05);而Vimentin、Snail、Slug、p-SMAD2蛋白、p-SMAD3蛋白的表达水平(0.595±0.144、0.429±0.179、0.609±0.125、0.198±0.090、0.659±0.088)均明显低于对照组(1.112±0.201、0.959±0.198、0.920±0.140、0.497±0.059、1.248±0.148),差异有统计学意义(t=3.624、3.439、2.872、4.804、5.926,P<0.05)。结论SIK2在TNBC中呈低表达,推测SIK2是通过调控转化生长因子-β(TGF-β)/上皮-间充质转化(EMT)通路抑制TNBC细胞的EMT、迁移和侵袭过程。
简介:摘要:王力先生主编的《古代汉语》教材体例完备,内容丰富,是众多院校古汉语课程的首选教材,几经修订再版之后更臻完善。但或由于时代之特殊,或由于工具之落后等多重因素,其第一册文选注释尚有一些疏漏可商之处。如“阙地及泉”之“阙”,“为之箪食与肉”之“食”,“奉厚而无劳”之“奉”,“皆欲赴愬于王”之“愬”,等四则注解,皆可进行商榷补正。
简介:摘要:诔文,是一种应用于丧葬场合,以功德、声名显世之死者为创作对象,通过累列其生前德行对其进行表彰,并由此引发生者哀思的饰终之礼文。魏晋时期的哀悼文学中,诔文蔚然成风。《王仲宣诔》是曹植现存八篇诔文中的一篇,被收入《昭明文选》中,位列诔文之首,在诔文发展史和整个文体发展史上具有相当重要的地位与研究价值。探析《王仲宣诔》的文体创作,可以看到其中“承古”与“新变”的和谐融合,把握整个魏晋时期文体新变的发展趋势;解析《王仲宣诔》中的情感抒发,能够看到其中有别于前代诔文的个人化真挚感情的表达,并且从中学习诔文创作的艺术手法。《王仲宣诔》可谓是一篇具有开创性和划阶段意义的诔文名作,研究其创作模式以及叙述抒情既是对诔文研究的有益补充,也能够帮助掌握魏晋诔文的基本特征。