简介:摘要目的探究长链非编码RNA(lncRNA)CDK5RAP3在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖和侵袭的调节作用。方法通过TCGA数据库分析CDK5RAP3在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异。通过转染pcDNA3.1-CDK5RAP3质粒至Hs-746T细胞,构建过表达CDK5RAP3胃癌细胞株(CDK5RAP3组),转染pcDNA3.1质粒至Hs-746T细胞(对照组)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组细胞中CDK5RAP3表达量的变化。CCK-8法和Transwell实验分别检测过表达CDK5RAP3对Hs-746T细胞增殖、侵袭的影响。通过starBase v2.0数据库预测CDK5RAP3和miR-223-3p的结合位点。双荧光素酶报告基因实验验证CDK5RAP3和miR-223-3p的直接结合。qRT-PCR检测各组Hs-746T细胞中miR-223-3p表达水平。Western blotting检测各组Hs-746T细胞中增殖蛋白和侵袭蛋白的表达水平。实验数据采用SPSS 17.0软件进行分析,符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组均数间比较采用单因素方差分析。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中CDK5RAP3表达水平明显降低(P<0.01)。对照组和CDK5RAP3组Hs-746T细胞中CDK5RAP3表达分别为(1.08±0.77)和(10.63±2.14),差异有统计学意义(P<0.01)。上调CDK5RAP3显著降低Hs-746T细胞的增殖活性(P<0.05)。对照组和CDK5RAP3组侵袭细胞数分别为(137.80±28.72)个和(57.76±24.95)个,差异有统计学意义(P<0.01)。CDK5RAP3能够直接结合miR-223-3p(P<0.01)。对照组和CDK5RAP3组Hs-746T细胞中miR-223-3p表达分别为(6.22±1.20)和(1.01±0.98),差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,上调CDK5RAP3显著减少增殖蛋白和侵袭蛋白的表达水平。结论胃癌组织中CDK5RAP3呈现低表达,CDK5RAP3通过靶向miR-223-3p抑制胃癌Hs-746T细胞的增殖和侵袭。
简介:摘要目的发现和探讨miR-223-3p可能通过调控FOXO3a介导自噬在肝缺血再灌注损伤中发挥作用。方法采用C57/BL6小鼠建立小鼠缺血再灌注(IR)模型,根据再灌注时间不同分为2 h组、6 h组、12 h组和24 h组,假手术组不进行钳夹肝蒂操作。培养小鼠肝AML12细胞,用miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor以及FOXO3a的干扰RNA处理细胞,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miRNA对照组、miR-223-3p模拟物组、miR-223-3p抑制剂组以及siRNA对照组、FOXO3a siRNA组。HE染色、TUNEL检测不同时间点肝脏的损伤及细胞凋亡状况。免疫组化检测肝细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和Caspase-3的变化。RT-PCR和Western blot检测肝组织以及肝细胞内miR-223-3p、FOXO3a、LC3、p62和Caspase-3的表达变化。结果HE染色、TUNEL结果显示12 h肝组织再灌注损伤以及细胞凋亡最严重。在肝组织IR模型中,RT-PCR结果显示IR各组miR-223-3p、FOXO3a的表达均高于假手术组(1.00±0),miR-223-3p在12 h时(9.13±2.12)达最高,FOXO3a在6 h时(5.23±0.90)达最高(P<0.05)。Western blot结果显示再灌注6 h时FOXO3a表达水平最高,12 h时LC3和Caspase-3表达水平最高(P<0.05)。在细胞缺氧复氧模型中,RT-PCR结果显示miRNA对照组(1.00±0)FOXO3a mRNA的表达较miR-223-3p模拟物组(0.45±0.21)降低,反之在miR-223-3p抑制剂组(2.73±0.53)升高(P<0.05)。Western blot检测显示FOXO3a蛋白表达在miR-223-3p抑制剂组最高,miR-223-3p模拟物组最低,反之LC3和Caspase-3均在miR-223-3p模拟物组表达最高(P<0.05)。siRNA对照组中FOXO3a表达较FOXO3a siRNA组高,同时FOXO3a siRNA组中Caspase-3和LC3表达更高。结论研究表明FOXO3a对肝缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其抑制细胞自噬以及凋亡有关,而miR-223-3p通过下调FOXO3a介导自噬促进损伤,提示miR-223-3p和FOXO3a成负相关且可能是肝脏损伤的潜在基因治疗靶点。
简介:摘要目的本研究旨在探讨微小RNA(miR)-376b-3p和miR-654-5p在大肠癌中的表达水平及其临床意义。方法荧光定量PCR检测34组来自2018年6月至2019年1月淮安市肿瘤医院大肠癌及癌旁组织中miR-376b-3p和miR-654-5p的表达。利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析miR-376b-3p和miR-654-5p的表达与大肠癌患者临床病理因素以及生存预后的关系。应用SPSS 17.0软件对所有结果进行统计分析。结果相对于癌旁组织,大肠癌组织中miR-376b-3p表达下调,miR-654-5p表达上调,差异有统计学意义(P<0.001)。miR-376b-3p表达的降低和miR-654-5p表达的升高与肿瘤的转移和临床分期密切相关。此外,单因素分析结果显示miR-376b-3p的低表达或miR-654-5p的高表达的大肠癌患者总体生存率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析发现miR-376b-3p低表达和miR-654-5p高表达是大肠癌患者预后差的独立预测因子。结论miR-376b-3p的低表达和miR-654-5p的高表达可能与大肠癌的发生、发展明显相关。
简介:目的:探讨氯沙坦钾对糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3及VEGF表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组(C组)、DN模型组(DN组)、氯沙坦钾组(L组)。采用单次腹腔内注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)法建立DN大鼠模型,周期12周。实验12周末检测大鼠血糖、Scr、BUN、24h尿蛋白定量;光镜及电镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用免疫组化方法检测大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3、VEGF表达。结果:实验12周末,模型组大鼠血糖、Scr、BUN、24h尿蛋白定量均高于对照组(P﹤0.05),肾组织中p-JAK2、p-STAT3、VEGF表达均高于对照组(P﹤0.05);氯沙坦钾组大鼠Scr、BUN、24h尿蛋白定量均低于模型组(P﹤0.05),肾组织p-JAK2、p-STAT3、VEGF表达均低于模型组(P﹤0.05)。结论:氯沙坦钾可能部分通过调控p-JAK2、p-STAT3及VEGF的表达而发挥肾脏保护作用。
简介:
简介:摘要在当今世界,随着多元文化的融合,中国传统文化正面临着巨大的冲击。因此,从艺术的角度将传统文化资源引入幼儿教育是一次非常有益的探索。为了将传统文化融入幼儿艺术教学过程,有必要更全面、更深入地理解和学习传统文化。基于此,本文针对传统文化资源引入3-6岁幼儿美术教学当中的方法与策略展开深入地分析和研究。
简介:摘要:本教学设计案例围绕 预备单元(Starter Unit 3What color is it ? )展开。通过复习句型(What’s this/that? It’s an apple. What color is it? t’s red. Spell it ,please.It’s red)谈论物体颜色学习语法(an/a/the),同时训练学生听,说的能力 .本教学设计依据新课程标准要求,通过希沃游戏,大转盘游戏激发学生学习兴趣,采用图片直观教学法, 通过师生练习,小组练习,双人练习呈现新句型(It’s a red apple.The apple is red.),让学生观察发现总结 规律学习语法。通过完成听力任务培养学生抓住关键词寻找答案的听力技能,培养学生好的听力习惯 。同时以教材为本,结合实际,采用小组合作表演培养学生的口语技能和初步写作能力。本教学案例教学手段多样,使用希沃游戏教学,大转盘游戏,图片插入直观教学,图片裁剪,多媒体希沃白版5手机拍照视频上传,音乐剪辑插入播放等多种信息技术教学手段提高学生学习兴趣,调动学生积极性, 尽力让学生全体参与。教学过程中贯穿课程思政的理念,作业设计注重学生能力的培养。
简介:MicroRNAs(miRNAs)aresmall,non-codingRNAsthatnegativelyadjustgeneexpressioninmultifariousbiologicalprocesses.However,theregulatoryeffectsofmiRNAsonSchwanncellsremainpoorlyunderstood.PreviousmicroarrayanalysisresultshaveshownthatmiRNAexpressionisalteredfollowingsciaticnervetransaction,therebyaffectingproliferationandmigrationofSchwanncells.ThisstudyinvestigatedwhethermiR-148b-3pcouldregulatemigrationofSchwanncellsbydirectlytargetingcullin-associatedandneddylation-dissociated1(Cand1).Up-regulatedexpressionofmiR-148b-3ppromotedSchwanncellmigration,whereassilencingofmiR-148b-3pinhibitedSchwanncellmigrationinvitro.FurtherexperimentsconfirmedthatCandlwasadirecttargetofmiR-148b-3p,andCandlknockdownreversedsuppressionofthemiR-148b-3pinhibitoronSchwanncellmigration.TheseresultssuggestedthatmiR-148b-3ppromotedmigrationofSchwanncellsbydirectlytargetingCandlinvitro.