简介:目的构建长链非编冯RNABRE-AS1的慢病毒表达载体。方法利用重叠延伸PCR法构建出BREAS1的全长目的片段,将全长目的片段及慢病毒载体质粒pCDHCMVMC8EF1分别双酶切后进行连接,转化到感受态大肠杆菌后,通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落,提取目的质粒。利用目的质粒制备包装慢病毒,并感染肾细胞癌细胞系OS-RC-2,分别利用荧光显微镜和荧光实时定量PCR检测细胞中BREAS1是否过表达。结果重叠延伸PCR得到正确的BREAS1全长序列,经过双酶切、连接、转化、筛选及I)NA测序,成功构建重组慢病毒载体质粒pCDH-BRE-AS1。通过荧光显微镜检测,几乎昕有经过嘌呤霉素筛选的OSRC2细胞均具有绿色荧光,显示其被重组慢病毒感染;荧光实时定量PCR显示,感染了RNABRE-AS1慢病毒的OSRC2细胞中,BREAS1的表达水平上升了38.5倍。EdU插入实验显示BREASl抑制肾癌细胞的增殖。结论本研究成功构建了BRE-AS1的慢病毒表达载体,并证明BREAS1能抑制肾癌细胞增殖。
简介:摘要目的探究长链非编码RNA(lncRNA)-CECR7在胃癌不同组织中的表达情况及其预后价值。方法以2015年5月至2016年5月成都医学院第一附属医院收治的78例胃癌患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测胃癌组织、癌旁组织中lncRNA-CECR7相对表达情况。分析lncRNA-CECR7表达与患者临床病理特征的关系,绘制Kaplan-Meier曲线进行生存分析,Cox回归分析影响患者3年生存率的因素。结果胃癌组织中的lncRNA-CECR7相对表达量为1.87±0.25,显著高于癌旁组织的1.05±0.13,差异有统计学意义(t=25.701,P<0.001)。lncRNA-CECR7表达与肿瘤大小、Borrmann分型、TNM分期、分化类型、淋巴结转移有关(P<0.05)。患者3年生存率为62.82%(49/78),lncRNA-CECR7低表达组生存率显著高于高表达组(77.14% vs 51.16%,χ2=5.576,P=0.018)。肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、lncRNA-CECR7表达水平是影响胃癌患者预后的独立因素(P<0.05)。结论lncRNA-CECR7在胃癌组织中的高表达与肿瘤大小、Borrmann分型、TNM分期有关,是影响胃癌患者3年生存的危险因素。
简介:摘要长链非编码RNA(LncRNAs)的表达异常与许多卵泡发育异常疾病密切相关,包括多囊卵巢综合征(PCOS)和原发性卵巢功能不全(POI)等。随着对LncRNAs的深入研究,越来越多研究表明,LncRNAs在卵泡发育异常疾病中差异表达并发挥功能。研究结果显示LncRNAs可能参与女性卵泡发育、卵丘扩张、卵子成熟和黄体形成等多个过程,可能影响PCOS患者颗粒细胞的增殖、迁移和凋亡,并且参与其调控内分泌和代谢过程。本文综述了LncRNAs参与卵泡发育及相关疾病的研究,通过揭示疾病发生发展的机制,发现新的生物标志物和治疗靶点,为卵泡发育异常相关疾病的诊断和治疗提供新思路。
简介:摘要目的探讨共生菌群对小鼠肺泡巨噬细胞长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)表达的调控作用。方法分离纯化共生菌缺失小鼠及正常小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs),利用LncRNA芯片技术筛选差异表达的LncRNA并进行生物信息学分析,利用荧光原位杂交(FISH)、RNA干扰等技术检测LncRNA-30162的亚细胞定位及其对RAW264.7细胞基因表达的调控。结果分选后的AMs纯度大于95%,共生菌缺失小鼠与正常小鼠相比较,其差异表达LncRNA共有634个(变化倍数≥2),上调363个(57.26%)、下调271个(42.74%);差异LncRNA的靶基因与免疫系统调控、细胞分化、趋化作用等密切相关;干扰LncRNA-30162的表达可以降低RAW264.7细胞中CCL24及Arg1的表达水平,干扰前CCL24及Arg1的表达水平分别为(420.23±56.25)μg/L、(2.63±0.31)×103U/L,与干扰后表达水平(218.70±31.45)μg/L、(1.24±0.21)×103U/L比较差异有统计学意义(t=5.416、6.409,P=0.006、0.003)。结论共生菌可以调控小鼠AMs LncRNA的表达,差异表达的LncRNA与多个基因功能分析分类和基因信号通路密切相关,LncRNA-30162可以调控RAW264.7细胞CCL24、Arg1的表达。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)在食管鳞状细胞癌(ESCC)患者外周血中的表达及意义。方法收集南京市第一医院2015年6月至2018年12月期间早期(Ⅰ~Ⅱ)ESCC患者(组别1)、中晚期(Ⅲ~Ⅳ)ESCC患者(组别2)、正常成人(对照组)血清标本各5例,采用TRIzol试剂提取总RNA,将转录得到的cRNA为模板反转录合成cDNA,纯化后荧光标记并与lncRNA芯片进行杂交。两两比较筛选出相对表达量比值在2倍以上且差异有统计学意义的lncRNA作为差异表达的lncRNA。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证lnc_TCONS_00011689在ESCC样本中的表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理特征及预后的关系,随访日期截止2019年12月31日。应用GraphPad Prism 5.0统计学软件分析,采用配对t检验和Log-rank生存分析。结果在组别1比对照组中上调的lncRNA有1 620条,下调的lncRNA有102条。在组别2比对照组中上调的lncRNA有17条,下调的lncRNA有129条。在组别2比组别1中上调的lncRNA有9条,下调的lncRNA有73条。生信数据分析显示这些差异表达基因的功能与细胞间相互作用、代谢、免疫应答、细胞黏附分子等功能均具有显著相关(r>0.99,P<0.05)。不同组别差异表达的lncRNA与差异表达的mRNA共表达分析显示表达结果中关联度最大的前1 000个关系对(r>0.99,P<0.05)。lnc_TCONS_00011689在ESCC患者血浆中表达与正常人比较明显降低,其在ESCC患者血浆中的表达为5.12±0.31,在正常人血浆中的表达为4.03±0.26,差异有统计学意义(t=2.187, P<0.05)。lnc_TCONS_00011689与ESCC临床TNM分期呈负相关(t=2.716,P<0.05),而与年龄、性别、分化程度以及淋巴结转移均无明显相关(P>0.05)。随访结果显示lnc_TCONS_00011689表达低的ESCC患者总生存期相比于高表达的患者更短(F=0.048,P<0.05)。结论建立不同分期的ESCC患者外周血中差异lncRNA表达谱。lnc_TCONS_00011689可作为食管鳞癌诊断、分期及预后监测的血浆分子标志物。
简介:摘要肿瘤干细胞(CSCs)指肿瘤内部一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,虽然仅占整个肿瘤细胞的小部分,却是导致肿瘤发生、扩散和复发的"起源细胞",这也正是肿瘤放疗失败的根源所在。CSCs对放疗具有耐受性,并以直接或间接方式促进肿瘤转移,因而被认为是肿瘤转移的基础。此外,CSCs的异质性可能是造成器官特异性转移的原因之一。长链非编码RNA (lncRNA)是一类长度>200个核苷酸,且无蛋白质编码能力的RNA分子,参与肿瘤发生和发展,并与肿瘤放射耐受性的形成密切相关。近年来肿瘤放射耐受性相关的lncRNA及其与CSCs关系的研究日益成为热点。本文就放疗后lncRNA介导的CSCs的调节以及lncRNA在肿瘤放射耐受中的作用进行综述。
简介:背景:研究发现,干扰长链非编码RNAH19的表达,可以降低胃癌细胞系MGC-803肿瘤球细胞的成瘤能力、增殖和克隆形成能力,而H19在胃癌中是否能通过影响肿瘤干细胞关键标志物Sox2的表达进而调控胃癌干细胞尚不清楚。目的:研究长链非编码RNAH19在胃癌组织及胃癌干细胞中的表达水平,并探讨其对胃癌干细胞增殖和转移的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测H19在38例胃癌组织、癌旁组织、胃癌干细胞CSC-G、人永生化正常胃上皮细胞GES-1中的表达;经脂质体分别转染H19siRNA(si-H19)和阴性对照siRNA(si-NC)48h后,软琼脂克隆形成实验、MTS实验、Transwell实验检测CSC-G细胞干性、增殖和转移能力,Westernblot检测CSC-G细胞中Sox2蛋白的表达。结果与结论:①qRT-PCR结果显示H19在胃癌组织中的表达显著高于其配对的癌旁组织,且在肿瘤T分期高及有淋巴结转移的组织中高表达(P均<0.05),同时H19在CSC-G细胞中的表达显著高于GES-1细胞(P<0.05);②转染H19siRNA后,CSC-G细胞软琼脂克隆球形成的数目显著减少,细胞增殖能力抑制、细胞侵袭能力减弱、Sox2蛋白表达减少(P均<0.05);③结果表明,H19在胃癌组织和胃癌干细胞中高表达,H19可能通过作用于干细胞相关蛋白Sox2促进胃癌干细胞的增殖和转移。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) HOX转录反义RNA(HOTAIR)对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法收集2013年8月到2018年1月新乡市中心医院120例乳腺癌和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析lncRNA HOTAIR表达水平。在乳腺癌细胞株MCF-7细胞株中建立lncRNA HOTAIR敲降细胞株(lnc HOTAIR KD组)和对照细胞株(lncRNA对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞的增殖能力;采用异种移植瘤模型分析细胞在体内的增殖能力。采用生物信息学分和双荧光素酶报告基因分析lncRNA HOTAIR作用靶点。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.09±0.19)比较,乳腺癌组织中lncRNA HOTAIR表达水平(2.98±0.21)显著升高,差异有统计学意义(t=3.011,P<0.05)。与lncRNA对照组(1.10±0.10)比较,Lnc HOTAIR KD组乳腺癌细胞增殖能力(0.25±0.05)明显下降,差异有统计学意义(t=2.510,P<0.05)。与lncRNA对照组EdU阳性率[(87.34±9.12)%]比较,Lnc HOTAIR KD组乳腺癌细胞EdU阳性率[(28.13±7.10)%]增殖能力明显下降,差异有统计学意义(t=3.918,P<0.05)。体内异种成瘤模型显示lnc HOTAIR KD组乳腺癌细胞增殖能力较LncRNA对照组显著下降,差异有统计学意义(F=2.109,P<0.05)。生物信息学研究显示lncRNA HOTAIR能与微小RNA(miRNA,miR)-126结合,进而调节CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达水平。结论lncRNA HOTAIR通过靶向作用于miR-126/CXCR4轴进而调节着乳腺癌细胞增殖。
简介:摘要糖尿病视网膜病变(DR)发病机制复杂。长链非编码RNA (lncRNA)中INK4基因座中反义非编码RNA (ANRIL)与细胞增生、分化及个体发育过程密切相关,在视网膜血管内皮细胞的异常增生中起重要作用,是DR发病机制研究中的新领域。现有研究发现,ANRIL可能通过核因子-κB、ROS/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶信号通路以及与p300、miR-200b、EZH2协同调节VEGF在DR中的表达和功能,发挥其在DR发生发展中的作用。特异性阻断ANRIL及其相关通路,可能成为未来DR临床治疗中的新靶点。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)linc00261在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法纳入中南大学湘雅医学院附属海口医院2017年2月至2018年9月收治的100例NSCLC患者,采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者癌组织及对应癌旁组织中lncRNA linc00261的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。通过设计合成lncRNA linc00261表达质粒,转染A549细胞,采用qRT-PCR检测转染细胞中lncRNA linc00261表达水平,使用MTT法检测转染细胞的增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞的凋亡情况。结果qRT-PCR检测结果显示,100例NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261的平均相对表达量(0.15±0.06)明显低于癌旁组织(1.19±0.23),差异有统计学意义(t=7.753,P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理组织类型的NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量比较差异均无统计学意义(P值均>0.05),但不同组织分化程度、临床分期及有无淋巴结转移患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量差异均有统计学意义(P值均<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞中lncRNA linc00261的表达量显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(F=5.196,P<0.001)。MTT检测结果显示,转染24 h后,3组之间细胞增殖能力差异无统计学意义(F=0.183,P>0.05);转染48、72、96 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的细胞增殖能力显著低于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(t=3.187、5.549,P值均<0.05)。流式细胞书检测结果显示,转染48 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的凋亡比例显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(χ2=4.175、6.093,P值均<0.05)。结论lncRNA linc00261在NSCLC患者癌组织中表达下调,并与NSCLC的发生发展有关,其在NSCLC中可能发挥抑癌基因作用,过表达lncRNA linc0026可抑制NSCLC细胞增殖并诱导凋亡,有可能成为NSCLC潜在的治疗靶点。
简介:摘要长链非编码RNA(lncRNA)在多种疾病的发生、发展过程中发挥着重要的作用。近年研究发现,功能基因间重复RNA元件(FIRRE)可参与肿瘤、脑血管病等疾病的进展过程,在转录及转录后等多方面调控基因的表达。本文就lncRNA-FIRRE在各个疾病中的作用及临床应用前景进行综述。