简介:目的构建长链非编冯RNABRE-AS1的慢病毒表达载体。方法利用重叠延伸PCR法构建出BREAS1的全长目的片段,将全长目的片段及慢病毒载体质粒pCDHCMVMC8EF1分别双酶切后进行连接,转化到感受态大肠杆菌后,通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落,提取目的质粒。利用目的质粒制备包装慢病毒,并感染肾细胞癌细胞系OS-RC-2,分别利用荧光显微镜和荧光实时定量PCR检测细胞中BREAS1是否过表达。结果重叠延伸PCR得到正确的BREAS1全长序列,经过双酶切、连接、转化、筛选及I)NA测序,成功构建重组慢病毒载体质粒pCDH-BRE-AS1。通过荧光显微镜检测,几乎昕有经过嘌呤霉素筛选的OSRC2细胞均具有绿色荧光,显示其被重组慢病毒感染;荧光实时定量PCR显示,感染了RNABRE-AS1慢病毒的OSRC2细胞中,BREAS1的表达水平上升了38.5倍。EdU插入实验显示BREASl抑制肾癌细胞的增殖。结论本研究成功构建了BRE-AS1的慢病毒表达载体,并证明BREAS1能抑制肾癌细胞增殖。
简介:摘要目的研究分析乳腺癌患者采用血浆长链非编码RNAH19的潜在诊断效果。方法选取2016年1月—2018年1月我院接收的乳腺癌患者64例,并同期选择接收的乳腺良性病变患者34例,同时选择同期来我院接收常规体检的健康女性34例,对所有研究对象均进行血浆中H19表达水平检测,分析血浆H19与乳腺癌患者病理参数的关联性,分析血浆长链非编码RNAH19、CEA以及CA153在乳腺癌诊断中的价值。结果通过分析乳腺癌患者的病理资料,发现血浆H19表达水平与ER、淋巴结转移、c-erbB-2、PR相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。常规组总有效率为(80.95%),同时研究组复发率为(2.38%),常规组复发率为(14.29%),差异显著具有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析,血浆H19与CEA、CA153联合诊断的价值(AUCROC=0.862),要高于各单独诊断的价值。结论对乳腺癌患者的临床诊断过程中,采用血浆长链非编码RNAH19,其潜在诊断效果较优,能够作为乳腺癌患者诊断重要的参考依据。
简介:目的本研究探索冠心病差异表达长链非编码RNAASO3973在人脐静脉内皮细胞中对白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达调控作用。方法应用敲低和过表达ASO3973的策略,利用real-timePCR技术检测炎症因子和黏附分子的mRNA表达水平;利用WesternBlot和ELISA检测IL-6、ICAM-1的蛋白表达水平;利用免疫荧光流式细胞术检测细胞膜表面ICAM-1的表达。结果敲低ASO3973导致炎症因子(IL-6、IL-8、IL-1β)和黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)的mRNA水平显著降低(P〈0.05),细胞上清液中的IL-6分泌量显著降低(P〈0.05),细胞总蛋白中IL-6和ICAM-1的蛋白表达水平显著降低(P〈0.05),细胞膜表面ICAM-1的表达显著降低(P〈0.01);过表达ASO3973导致IL-6、ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达水平显著升高(P〈0.05),细胞上清液中的IL-6的分泌量显著升高(P〈0.05),细胞膜表面ICAM-1的表达显著升高(P〈0.01)。结论LncRNAASO3973显著调控内皮细胞IL-6、ICAM-1的基因表达水平。提示ASO3973可能通过调控内皮细胞炎症因子和粘附分子的表达,影响血管内皮细胞功能,参与动脉粥样硬化的发生。
简介:利用雄性不育系做母本生产杂交一代种子,为改善作物的生产提供了十分有利的条件.细胞质雄性不育(CMS)和由光周期(PGMS)/温度诱导(TGMS)的不育性极大地促进了作物杂交育种的发展.越来越多的研究表明非编码ncRNA分子与植物雄性不育有关,如水稻的PGMS和TGMS与ncRNA密切相关.在CMS中,线粒体ORF影响小孢子发育而导致CMS发生的机制仍然不明确.高通量测序使得在全基因组范围内发现和验证这些调控分子及其靶基因,并阐述它们与CMS的相关性成为可能.植物线粒体DNA中的ncRNA以及其可能诱导的CMS的机理是当前研究的热点,但目前尚没有证据表明ncRNA与CMS有关,还需要转基因等遗传方法来进行验证.在本文中,我们总结了最近关于ncRNA与植物CMS关系的相关研究,希望能够提高对控制植物CMS的ncRNA介导的调控途径的理解.深入了解植物CMS可为促进CMS在农作物育种的利用提供技术支撑.
简介:目的研究长链非编码RNA-NR_024158在肾肿瘤中的表达及其调控机制,并探讨其对肾肿瘤细胞增殖和迁移的影响。方法逆转录实时定量PCR检测NR_024158在肾肿瘤组织和细胞系中的表达;甲基化特异性PCR检测NR_024158启动子区甲基化状态;逆转录实时定量PCR检测非特异性去甲基化药物(5Aza.dc)处理后肾肿瘤细胞系中NR_024158表达的变化;MTS技术检测过表达NR_024158后细胞的生长情况;Transwell小室实验检测过表达NR_024158后细胞的迁移和侵袭情况。结果肾肿瘤组织和细胞系中NR_024158的表达较相对参照系(HK-2)降低;NR_024158启动子区存在甲基化;5Aza.dc处理后,肾肿瘤细胞系NR_024158的表达明显增加;过表达NR_024158后肾肿瘤细胞系的增殖和迁移、侵袭明显受到抑制。结论NR_024158在肾肿瘤中发挥抑癌基因样作用,其表达受甲基化调控。
简介:目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19促进膀胱癌细胞增殖的分子机制。方法(1)应用实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)分别检测膀胱癌组织中lncRNAH19和miRNA-29c-3p的表达并分析其相关性。(2)应用RNA干扰和细胞转染技术抑制膀胱癌细胞系T24及5637中H19基因的表达,其后通过细胞增殖实验检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;RTqPCR检测细胞中H19的表达变化。(3)在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-29c-3p和H19,运用荧光素酶报告系统验证miR-29c-3p对H19及细胞周期蛋白D2(CCND2)的靶向作用,应用Westernblot检测膀胱癌细胞系T24与5637中抑制H19表达后CCND2的表达变化。结果H19在膀胱癌中高表达,miR-29c-3p在膀胱癌中低表达,H19和miR-29c-3p的表达为负相关,H19与CCND2的表达为正相关。MiR-29c-3p可同时靶向H19及CCND2。在膀胱癌细胞系中过表达miR-29c-3p可以抑制H19的表达,miR-29c-3p在膀胱癌中起肿瘤抑制作用,而H19具有促进癌细胞增殖和改变细胞周期的能力,表现为癌基因样作用,抑制膀胱癌细胞系T24和5637中H19的表达可以在翻译水平减少CCND2的表达。结论lncRNAH19通过与CCND2竞争结合miR-29c-3p,降低miR-29c-3p对CCND2的表达抑制,从而在膀胱癌中发挥肿瘤促进作用。
简介:摘要本文主要用斯图亚特·霍尔的“编码与解码”的理论来解释在当前媒介融合的状态下对电视节目的解读,处于媒介融合的背景下是否这一理论还适用于此,并且用三种解码的形式来看当前的一些问题。
简介:摘要lncRNA是一类内源性、转录本长度一般大于200nt、缺少特异完整的开放阅读框、无蛋白质编码功能的RNA分子。其作为增殖与分化调控通路上的调控分子,在基因的转录、翻译等过程中起重要作用,lncRNA也从转录、转录后和表观遗传学水平在关键性肿瘤信号通路中扮演重要角色,随着高通量筛查技术以及生物信息学的发展,更多具有重要调控功能的lncRNA将会被发现。
简介:在熔融状态下用马来酸酐官能化的线性聚丙晞(PPg)和环氧树脂(双酚A二缩水甘油醚,ER)之间的反应在PPg的分子结构中生成长链分支LCB。用马来酸酐官能化的线性聚丙烯和环氧树脂(双酚A二缩水甘油醚)在熔融状态下反应,得到具有长链分支的PPg分子结构。用浓度为3.15wt%的环氧树脂可得到不同级别的支化。红外光谱分析显示,PPg中的酸酐基在反应中被消耗并形成新的酯基。使用多种检测手段如排阻色谱法和流变学分析可以验证长链分支的存在。随着ER浓度的增加,PPg中长链支化的程度增加。此外,随着ER的浓度增大出现凝胶现象,材料性质改变。长支链聚合物也表现出热流变复杂性。热性能研究表明,LCB在结晶过程中具有成核作用,能够引起PPg的结晶活化能增加。
简介:摘要目的探讨培美曲塞治疗晚期非小细胞肺癌NSCLC的疗效及预后因子。方法回顾性分析2016年7月-2018年6月在南通市肿瘤医院接受培美曲塞联合顺铂一线化疗的100例ⅢB期、Ⅳ期NSCLC患者。采用荧光定量PCR方法检测患者外周血TS、DHFR基因表达情况,研究各项指标与NSCLC治疗疗效的关系。同时选取98例健康体检者的外周血样本作对照。结果100例NSCLC患者接受培美曲塞单药或联合治疗,无CR病例,PR25例,SD45例,PD30例。25例化疗敏感者的DHFR水平为(0.21±0.11)pmol/L,75例化疗抵抗者的DHFR水平为(0.41±0.18)pmol/L,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血TS可作为预测培美曲塞化疗晚期肺癌预后的分子标志,DHFR可能作为近期疗效的预测因子。