简介：摘要内皮祖细胞(EPCs)是具有血管生成潜能的祖细胞，其主要功能一方面是通过旁分泌促血管生成因子及神经保护因子而发挥作用，另外一方面是具有向血管内皮细胞分化的能力，并将自身整合到新形成的毛细血管中，因而在血管修复和神经保护中发挥重要作用。EPCs的表面标志物和功能研究是EPCs研究的基础。目前一系列临床试验、动物实验和离体细胞学研究表明，EPCs的自体移植或与其他细胞联合移植可促进视网膜血管修复，改善视网膜功能且安全性较好。糖尿病视网膜病变(DR)被定义为由全身代谢异常引起的视网膜神经血管单位(NVU)受损的难治性视网膜疾病，EPCs数目改变及功能受损参与DR的发生和发展，眼科医师应该关注基于EPCs的疗法对DR的治疗意义。目前DR的治疗策略包括EPCs移植、EPCs与其他细胞联合移植以及内源性EPCs的调节，EPCs独特的生物学特性为其在修复NVU损伤及DR防治方面提供许多可能性。本文从EPCs的起源、生理病理状态、功能、治疗策略、临床应用5个方面展开，介绍EPCs在DR中的最新研究进展，同时对EPCs治疗存在的问题和技术瓶颈进行讨论。

简介：目的探讨红花黄色素A对大鼠骨髓源性内皮祖细胞的促血管新生活性。方法体外分离培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,观察红花黄色素A低、中、高（20、40、60μg·ml-1）剂量对骨髓源性内皮祖细胞增殖、黏附、迁移及血管形成能力的影响,以及对骨髓源性内皮祖细胞中促血管新生相关因子蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,不同浓度红花黄色素A可显著促进骨髓源性内皮祖细胞的增殖、黏附、迁移及血管形成能力,骨髓源性内皮祖细胞中促血管新生因子血管内皮生长因子及其受体,碱性成纤维细胞生长因子,血管生成素1的蛋白表达水平也显著上升,且均呈浓度依赖性。结论红花黄色素A具有调控骨髓源性内皮祖细胞促血管新生的作用,该作用可能与其上调血管内皮生长因子及其受体VEGFR-2、碱性成纤维细胞生长因子及血管生成素1的表达密切相关。

简介：目的探索流式细胞术单种CD分子（CD146）标记法和三种CD分子（CD45CD31CD146）标记法对非小细胞肺癌外周血循环内皮细胞（circulatingendothelialcells,CECs）检测效果的影响。方法采用流式细胞术单种CD146和三种CD分子标记法检测60例非小细胞肺癌患者及20例健康人外周血CECs。结果流式细胞术单种CD146和三种CD分子标记法对非小细胞肺癌患者和健康人外周血循环内皮细胞检测成功,两种方法显示肺癌患者外周血CECs均高于健康对照,差异有统计学意义（P〈0.05）。两种方法测定CECs的结果呈正相关,有统计学意义（r=0.834,P〈0.01）。精密度试验显示三种CD分子标记循环内皮细胞法优于单种CD146标记法。结论单种CD146和三种CD分子标记非小细胞肺癌患者和健康人外周血细胞均可经流式细胞术用于测定CECs,三种CD分子标记循环内皮细胞法优于单种CD146标记法。

简介：目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）对于水凝胶中内皮祖细胞集落形成单位（EPCs）增殖、分化、成熟,以及血管化的影响。方法制备分别含有bFGF/VEGF和不含bFGF/VEGF的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）水凝胶,分为A、B2组。同时包埋EPCs,流式细胞仪检测培养7d后的细胞存活率,倒置显微镜观察EPCs的生长及长入水凝胶的情况并计数,分析bFGF、VEGF对EPCs存活率的影响。培养7d后用定量实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测总RNA量,并检测PECAM1、CD34、KDR、Angiopoietin-2、pcdh12基因的表达。然后用酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测2组去水凝胶的培养上清液中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达,并用荧光法检测水凝胶的降解速度,bFGF、VEGF对EPCs释放MMP的影响。最后以鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）技术检测含有bFGF、VEGF的水凝胶体外诱导血管新生的作用。结果A组水凝胶,消化7d后,流式细胞仪检测发现39.43%的EPCs尚存,B组4.14%;两组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。水凝胶表面种植EPCs可观察到的细胞数A组为378.3333,B组为302.3333;两组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。ELISA法检测2组中MMP-2、MMP-9的表达,发现水凝胶中MMP-2和MMP-9随时间推移在72h内持续释放,A组较B组释放浓度显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。荧光法检测水凝胶的降解发现,从第1天开始,A组水凝胶降解百分比急速升高,之后增长速度减缓,而B组呈继续增长之势,差异有统计学意义。定量RT-PCR检测发现A组较B组基因Ct值高,且差异有统计学意义（P〈0.05）。CAM技术检测发现A组（空白组）、B组（不含bFGF、VEGF组）、C组（含bFGF、VEGF组）的新生血管总数分别为9、25、36;两两比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论体外研究证实,缓释的bFGF、VEGF不仅能促进水凝胶中EPCs增殖、分�

简介：目的：观察红细胞生成素（EPO）对慢性肾衰竭大鼠（CRF）外周血内皮祖细胞（EPC）血管生成素-1（Ang-1）表达的影响.方法：采用分阶段5/6肾切除制备大鼠CRF模型.实验动物随机分为3组：假手术组、CRF模型组、EPO治疗组.从第3周开始,治疗组大鼠每次皮下注射重组人EPO50U/kg,每周3次,共6周.8周时取其外周血分离与培养EPC,并检测EPC的功能.采用实时荧光定量PCR和western印迹方法检测外周血EPC的Ang-1mRNA和蛋白的表达.结果：与模型组比较,EPO治疗能提高CRF大鼠外周血EPC数量及其增殖、黏附与形成血管腔样结构的能力（均P〈0.05）;并可上调外周血EPC的Ang-1mRNA及蛋白的表达（均P〈0.05）.结论：EPO可动员慢性肾衰竭大鼠外周血EPC,并能增加外周血EPC血管生成素1表达.

简介：内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）能够参与血管损伤修复，给再生医学治疗带来了希望。Asahara等^[1]从人类外周血中分离出内皮前体细胞，发现这种细胞参与缺血组织的血管新生。多项研究证实，EPCs通过分化成新生内皮细胞替代损伤的血管内皮，参与血管损伤修复怛^[2-3].EPCs参与血管损伤修复过程涉及EPCs动员、迁移、分化等一系列过程，期间多种因子通过多种途径参与调节此过程，其中发挥关键作用的是基质细胞衍生因子一1（stromalcell-derivedfactor-1，SDF-1）及其受体CXC趋化因子受体4（Cxcchemokinreceptor4，CXCR4）。笔者结合SDF-1与CXCR4作用构成的SDF-1／CXCR4轴以及CXCR4阻断剂等对血管损伤修复的影响综述如下。

简介：摘要血管新生是创面修复的核心步骤，血管内皮祖细胞(EPC)在其中发挥着极其重要的作用。新近研究显示，血管EPC源性外泌体(EPC-Exo)能保护血管，促进血管内皮细胞增殖、迁移及对血管内皮细胞具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用。本文就近年来血管EPC-Exo在血管新生的作用机制及创面修复领域的潜在应用研究方面进行综述。

简介：摘要目的探讨黄芪甲苷对人内皮祖细胞(EPC)分泌外泌体及外泌体中微小RNA-126(miRNA-126)表达的影响。方法取湖南中医药大学第一附属医院妇产科2019年出生的1名足月健康新生儿脐带血，采用密度梯度离心法分离单个核细胞并培养7 d，其间行形态学观察；取第3代细胞，采用CD31免疫磁珠分选法和双荧光染色法鉴定。将鉴定成功的EPC按照随机数字表法分为黄芪甲苷组和磷酸盐缓冲液(PBS)组。黄芪甲苷组细胞加入终质量浓度100 mg/L的黄芪甲苷培养24 h，PBS组细胞加入等体积的PBS培养24 h。培养结束后收集2组细胞培养上清液中的外泌体，采用蛋白质印迹法检测外泌体特征性标志物CD9、CD63和CD81表达，于透射电子显微镜下观察EPC外泌体(EPC-Exo)形态，采用纳米颗粒跟踪分析技术检测EPC-Exo的粒径，采用二辛丁酸法测定EPC-Exo的浓度(样本数为3)，采用反转录PCR法测定EPC-Exo中与血管新生相关miRNA-126-3p和miRNA-126-5p的表达(样本数为3)。对数据行独立样本t检验。结果(1)培养第4天，细胞开始贴壁生长，圆形、梭形、条形等多形态同时出现；继续培养至第7天时，细胞边缘清晰，呈铺路石样排列，中央细胞呈圆形，周边细胞呈梭形。(2)CD31免疫磁珠分选法显示细胞膜染绿色，细胞核染蓝色；双荧光染色法显示细胞呈橙黄色。经以上鉴定，细胞被证实为EPC。(3)培养24 h，2组EPC-Exo的CD9、CD63和CD81表达均呈阳性，证实本实验已成功提取EPC-Exo。(4)培养24 h，2组EPC-Exo均呈圆形膜囊泡，形态无明显差异。(5)培养24 h，黄芪甲苷组中98.7%的EPC-Exo粒径为84.7～143.1 nm，PBS组中98.0%的EPC-Exo粒径为88.7～123.5 nm。(6)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo的质量浓度为(310±5)μg/mL，明显高于PBS组的(257±5)μg/mL，t＝13.369，P<0.01。(7)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo中miRNA-126-3p(t＝16.062，P<0.01)和miRNA-126-5p(t＝3.252，P<0.05)均明显多于PBS组。结论黄芪甲苷可改善人EPC分泌外泌体的功能，且所分泌的外泌体负载miRNA-126。

简介：以往研究认为内皮祖细胞(endothelialpro-genitorcells,EPCs)仅存在于胚胎发育阶段,之后的研究发现EPCs也存在于成体。目前的研究结果发现,EPCs主要来源于胚胎的中胚层和出生后的骨髓,是一群被发现的同时存在于胎肝、脐带血和成人外周血中、能够分化为内皮细胞的多潜能细胞,

简介：摘要目的探讨循环血内皮细胞微粒(EMPs)与晚期肺癌疾病进展(PD)的关系及其对疗效的预测价值。方法收集2018年10月至2019年5月解放军总医院第一医学中心肿瘤科常规治疗的88例晚期肺癌患者资料，检测治疗前血常规、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤标志物以及CD105＋EMPs的表达情况。采用流式细胞仪检测CD105＋EMPs数目，采用多因素logistic回归分析晚期肺癌进展的预测指标。结果88例晚期肺癌患者中，客观反应组60例，PD组28例。两组患者的性别、年龄、基础疾病史、肿瘤分期、肿瘤类型、治疗方案等差异均无统计学意义(均P>0.05)，两组患者细胞角蛋白19片段、神经元特异性烯醇化酶、LDH、总微粒(MPs)、CD105＋EMPs的差异均有统计学意义(均P<0.05)。logistic多因素回归分析结果显示，CD105＋EMPs≥70 events/μl(OR＝3.623，95%CI为1.345～9.761，P＝0.011)和LDH(OR＝1.008，95%CI为1.001～1.015，P＝0.032)能够预测晚期肺癌的进展。根据多因素回归分析结果建立预测晚期肺癌进展模型，受试者工作特征曲线示，曲线下面积为0.729(95%CI为0.620～0.837，P＝0.001)，敏感度为32.1%，特异度为91.6%，阳性预测值为64.2%，阴性预测值为74.3%。结论CD105＋EMPs与晚期肺癌进展相关，CD105＋EMPs联合LDH能够预测晚期肺癌的疗效。

简介：摘要：目的：在本次的研究中探究检测非小细胞肺癌外周血循环内皮细胞过程中使用流式细胞术进行检测的效果。方法：在此次的研究当中，选取的是来我院进行治疗并且被诊断为非小细胞肺癌患者60例，同时还选取了20例健康人员作为此次研究的健康对照组，对这两组样本人员都通过CD146以及及三种CD分子标记法进行检测，来对检测的结果进行对比的分析，探究出检测非小细胞肺癌外周血循环内皮细胞过程中使用流式细胞术的作用。结果：此次试验当中对非小细胞肺癌患者组和健康对照组人员使用流式细胞术单种CD146以及三种CD分子标记法进行检测，检测的结果显示非小细胞肺癌患者组与健康对照组人员的外周血CECS进行比较，患者组的都比健康对照组人员的数据更高，差异具有统计学意义，P

简介：目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)调控大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)自噬,探讨其对静脉血栓再通的影响。方法密度梯度法取大鼠骨髓EPCs,体外诱导分化并鉴定。建立大鼠静脉血栓模型。实验分为4组:单纯生理盐水组(对照组,A组)、单纯3-MA组(5mmol/L3-MA,B组)、单纯EPCs组(C组)和3-MA联合EPCs组(5mmol/L3-MA作用于EPCs24h,D组),每组各20只大鼠。在血栓形成后的10天经大鼠尾静脉注入各组试剂,再过14天取标本。苏木精-伊红染色(HE)及vWF免疫组化染色观察血栓机化再通情况,并在镜下计数各组毛细血管数目,取其平均值。结果(1)D组经HE及免疫组化染色观察发现新生血管最多,与其余各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);(2)C组分别与A组和B组比较,差异有统计学意义(P<0.05);(3)A组与B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论5mmol/L3-MA调控自噬后的EPCs经大鼠尾静脉注射可促进大鼠静脉血栓再通,且比单纯注射EPCs效果更好。

简介：摘要目的探索细胞疗法暨内皮祖细胞（EPCs）移植法对急性肺损伤的治疗作用，比较体外移植内皮祖细胞、使用阿托伐他汀提高循环中内皮祖细胞数量和活性以及二者联合应用三种方法的疗效。方法取人脐带血分离内皮祖细胞，经一周培养；用脂多糖（LPS）造大鼠急性肺损伤（ALI）模型，分别口服给予阿托伐他汀、尾静脉注入BrdU标记的内皮祖细胞及两者联合给药。2日后评估其肺损伤的程度、肺血管诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达及免疫组化法追踪移植内皮祖细胞修复血管内皮的情况。结果EPCs移植组和联合治疗组中，免疫组化可检测到肺血管内皮BrdU呈阳性的移植EPCs；大鼠肺动脉中iNOS表达较LPS模型组受到抑制；肺实质中，中性粒细胞（PMN）明显减少，肺水含量、透明膜形成及肺出血均减少。而他汀治疗组与LPS模型组未见明显差异结果EPCs体外移植对ALI大鼠模型的肺血管内皮有保护作用，同时也维持了肺泡毛细血管屏障的完整性。而阿托伐他汀对移植EPCs有协同作用，联合应用将会取得更好的疗效。而单独的他汀药物治疗未见明显疗效。

简介：摘要目的探讨过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对阿霉素(Dox)诱导下血管内皮祖细胞(EPCs)衰老及凋亡的影响。方法抽取SD雄性大鼠外周动脉血，分离培养EPCs，进一步分为，正常EPCs组、空载体组、Mfn2过表达组，经0.2 μmol/L和2.0 μmol/L Dox诱导，通过激光共聚焦显微镜观察线粒体分裂情况；通过β-半乳糖苷酶活性检测、原位末端标记法(TUNEL)染色，检测细胞衰老和凋亡情况；蛋白印迹法检测细胞衰老标志蛋白多肿瘤抑制基因1(p16INK4A)的表达；实时荧光定量聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血管性血友病因子(vWF)的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果在0.2 μmol/L和2.0 μmol/L Dox处理下，Mfn2过表达组[(5.83±1.71)%、(6.72±0.57)%]线粒体分裂的细胞比例低于正常EPCs组[(19.16±0.82)%、(68.56±5.31)%]和空载体组[(17.53±2.86)%、(66.54±2.86)%，F＝40.403、302.725，P<0.05]，差异均有统计学意义；在0.2 μmol/L Dox处理下，Mfn2过表达组[(15.0±0.33)%]β-半乳糖苷酶活性升高的细胞比例低于正常EPCs组[(35.0±0.61)%]和空载体组[(36.0±1.23)%，F＝637.291，P<0.05]，差异均有统计学意义；在2 μmol/L Dox处理下，Mfn2过表达组[(11.90±0.50)%]TUNEL+细胞的比例低于正常EPCs组[(34.50±0.80)%]和空载体组[(35.20±1.60)%，F＝458.327，P<0.05]，差异均有统计学意义；在0.2 μmol/L Dox处理条件下，Mfn2过表达组eNOS mRNA(0.65±0.02)和vWF mRNA(0.65±0.01)的相对表达高于正常EPCs组(0.43±0.03、0.50±0.02)以及空载体组(0.34±0.02、0.48±0.02，F＝134.643、71.646，P<0.05)，差异均有统计学意义；在2.0 μmol/L Dox处理条件下，Mfn2过表达组eNOS mRNA(0.71±0.02)和vWF mRNA(0.66±0.03)的表达高于正常EPCs组(0.33±0.02、0.28±0.02)以及空载体组(0.38±0.03、0.35±0.01，F＝225.712、262.934，P<0.05)，差异均有统计学意义。结论过表达Mfn2可以抑制线粒体分裂，拮抗Dox诱导下EPCs的衰老及凋亡，恢复EPCs的功能。

简介：目的观察血管内皮生长因子-165（vascularendothelialgrowthfactor-165,VEGF165）对过氧化氢（hydrogenperoxide,H2O2）诱导的人外周血来源内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）增殖损伤及细胞周期相关蛋白表达的影响.方法采用密度梯度离心法和贴壁培养法从人外周血中分离培养内皮祖细胞.在经MTT实验筛选出过氧化氢处理浓度后,对EPCs进行实验分组：正常对照组,不给予任何处理因素;VEGF165处理组,以终浓度为25ng/mL的VEGF165孵育24h;过氧化氢处理,以终浓度200μmol/L过氧化氢处理内皮祖细胞24h;VEGF165预处理组,经浓度为25ng/mL的VEGF165预孵育30min后,再与终浓度为200μmol/L的H2O2共孵育24h.CCK-8法检测各组内皮祖细胞增殖活性的差异;Westernblot分析各组内皮祖细胞中细胞周期相关蛋白cyclinD1和PCNA的蛋白表达情况.结果与对照组相比,VEGF165处理组内皮祖细胞增殖活性增高（P＜0.05）;过氧化氢处理组内皮祖细胞增殖活性较对照组降低（P＜0.05）,且细胞周期相关蛋白cyclinDl和PCNA下调（P＜0.05）;VEGF165预处理组中,EPCs增殖活性较过氧化氢处理组增高（P＜0.05）,且cyclinD1和PCNA蛋白表达上调（P＜0.05）.结论VEGF165可促进人外周血来源的内皮祖细胞的增殖,对过氧化氢诱导的内皮祖细胞增殖损伤有一定的保护作用,其机制可能与细胞周期相关蛋白cyclinD1和PCNA表达升高有关.

简介：为了观察人心脏是否含具有间充质祖细胞特性的细胞，从胎儿心脏分离、培养单个核细胞并从形态、表型和功能3个方面与骨髓间充质祖细胞进行比较和鉴定。结果表明，从心脏分离培养的细胞为成纤维样，表面抗原为CD73，CD105，CD29，CD44，HLA-ABC，CD166阳性，而CD45，CD34，CD86，HLA-DR阴性。在不同的分化体系中，细胞能分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。细胞扩增迅速，具有低免疫原性特性。结论：从心脏分离培养的细胞具有间充质祖细胞特性。

简介：摘要目的评价内皮祖细胞源性外泌体对氧糖剥夺-复氧复糖神经元损伤的影响。方法培养HT22小鼠海马神经元，采用随机数字表法分为3组(n＝30)：对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)和氧糖剥夺-复氧复糖+内皮祖细胞源性外泌体组(OGD/R+EXO组)。C组细胞正常培养，OGD/R组采用无糖无血清DMEM培养基在94%N2-1%O2-5%CO2混合气体培养6 h进行氧糖剥夺，随后更换正常培养基进行复氧复糖24 h。OGD/R+EXO组于氧糖剥夺-复氧复糖造模前24 h在培养基中加入20 μg/ml内皮祖细胞源性外泌体。采用免疫荧光染色法鉴定内皮祖细胞，Western blot法、透射电镜、纳米颗粒追踪分析法鉴定外泌体。采用CCK-8法检测神经元活力，ELISA法测定MDA含量和SOD活性，TUNEL染色法检测神经元凋亡率，Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果培养细胞为内皮祖细胞，成功提取内皮祖细胞源性外泌体。与C组相比，OGD/R组和OGD/R+EXO组神经元活力降低，MDA含量升高，SOD活性降低，神经元凋亡率升高，Bax表达上调，Bcl-2表达下调，cleaved-caspase-3/caspase-3比值升高(P<0.05)；与OGD/R组相比，OGD/R+EXO组神经元活力升高，MDA含量降低，SOD活性升高，神经元凋亡率降低，Bax表达下调，Bcl-2表达上调，cleaved-caspase-3/caspase-3比值降低(P<0.05)。结论内皮祖细胞源性外泌体可减轻氧糖剥夺-复氧复糖神经元损伤，与抑制氧化应激和神经元凋亡有关。

简介：摘要目的从2型糖尿病患者（T2DM）外周血中分离培养内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)，并探讨其体外诱导培养的条件。观察黄芪多糖（AstragalusPolysaccharides,APS）对T2DM外周血EPCs增殖的影响。方法密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，在鼠尾胶原包被的培养瓶中培养7d后鉴定EPCs，MTT检测APS对T2DMEPCs增殖的影响。结果T2DM外周血单个核细胞在鼠尾胶原包被的培养瓶中培养后呈梭形、铺路石样，表达内皮细胞的特异性抗原CD34和KDR，和干/祖细胞抗原CD133。APS在一定剂量和时间范围内能促进T2DM外周血EPCs增殖（P<0.05）。结论鼠尾胶原可代替EPCs培养中常用的纤维连接蛋白，是体外分离培养外周血EPCs的更节省的一种方法。黄芪多糖（APS）能促进EPCs增殖。

简介：脐血造血干细胞移植具有来源广泛、采集便利和移植后移植物抗宿主反应低等优点,目前国内已有单位在筹建脐血造血干细胞库.脐血中造血干细胞定量检测对于造血干细胞移植有重要的指导意义,由于各地的检测方法和实验条件不同,导致所得结果差异较大.本研究应用流式细胞仪(FCM),探讨3种检测方法的优缺点,并对收集的615份脐血进行造血干/祖细胞定量检测,现报告如下.

简介：据2012年8月3日WesterterpM[CellStemCell,2012,11（2）：195-206]报道,完好的胆固醇代谢平衡,有助于维持造血干细胞和多向祖细胞（HSPC）处于静息状态。负责跨细胞膜转运胆固醇的三磷酸腺苷结合转运因子ABCA1和ABCG1缺陷,可导致小鼠细胞胆固醇流出途径障碍。小鼠细胞胆固醇流出途径障碍．显示出HSPC动员和髓外造血的急剧增加。