简介:目前,在供体器官短缺的情况下,大家公认猪是最合适的异种器官和组织的提供者,用猪肝细胞治疗急性肝衰病人已有报道.如何将肝细胞最大限度完整地、无损伤地分离出来,这是非常关键和重要的一步.我室在进行猪肝细胞的分离中,逐渐探索出一套比较行之有效的方法.材料与方法:采用中国实验用小型猪,常规麻醉、消毒、开腹,用D-Hank′s液进行肝脏原位灌注,再用0.02%EDTA-Hank′s液(37℃)灌注18~20min,摘取肝脏行多点灌注5min,置肝脏于60目钢网上,用直剪迅速剪开肝脏被膜,用镊子夹起轻轻抖动,并用1640液冲洗,边抖动边冲洗,使细胞滤出漏于烧杯中.与此同时,用剪刀把肝组织剪成小块,再用玻璃注射器芯轻轻研磨,边研磨边冲洗,操作要轻,并保持无菌,收集肝细胞,离心洗涤三次,并逐级用80目、100目、120目、150目钢网过滤.分离出的肝细胞进行计数、台盼蓝拒染试验检查、PAS染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色及电镜检查.结果:肝细胞存活率90±1.3%,PAS染色显示肝糖元丰富,葡萄糖-6-磷酸酶染色显示酶的活性良好.电镜观察,肝细胞的线粒体、内质网等亚显微结构未见异常.对于猪肝细胞的分离,国外文献报道多采用Ⅳ型胶原酶循环灌注法,但费用很昂贵.在实践中,我们用EDTA代替胶原酶,采用肝脏原位灌注+多点灌注+机械研磨的方法,取得了较为满意的效果.此法与胶原酶灌注法比较,从分离的肝细胞数量、活力、肝糖元及细胞中一些酶的活性都与胶原酶法无显著差异,且光镜及电镜观察,显示细胞形态及亚细胞结构未见异常.我们认为此方法易于控制,价格低廉;而胶原酶法容易消化过度,造成细胞膜破损,或消化不完全造成多个细胞连在一起,且费用昂贵.实验证明,改良的猪肝细胞分离方法为用猪肝细胞治疗急性肝衰病人的研究提供了一个可行的方法.
简介:树突状细胞(DC)是一类专职性抗原呈递细胞,不仅启动免疫反应和诱导免疫耐受,还在调节免疫反应与免疫耐受的平衡中起决定性作用.肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中深受关注,肝移植物容易存活,伴有肝移植的其他器官(如心脏、肾脏等)移植存活时间也较其单独移植明显延长.最近有人提出,在肝移植耐受中DC可能起关键作用,但因其难于分离培养,国外仅美国Pittshburgh大学在做相关研究,国内尚未见报道.材料与方法:1.肝非实质细胞的分离:取6~8w小鼠,麻醉后无菌开腹,门静脉插管,用前灌液(PBS+肝素500μ/100ml)灌流2~3min,改用注射器缓慢推注2mlⅣ胶原酶(GIBCOL公司,0.05%);取材后剪碎,15mlⅣ胶原酶液(0.05%)体外消化30min.尼龙网过滤,PBS液清洗(400g×5min离心)两次,稀释成4~5ml细胞悬液.下铺细胞分离液Percoll(Pharmacia公司)制成的不连续密度梯度液,500g×30min离心后,细胞分三层,先吸弃最上层细胞碎片,再吸取两液体界面的肝非实质细胞,避免吸到最底层的血细胞,RPMI1640液(GIBCOL公司)清洗两次,400g×5min离心,即可得肝非实质细胞.2.肝树突状细胞(HDC)的培养:将肝非实质细胞用含灭活的10%胎牛血清(GIBCOL公司)的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2.5×106/ml,接种于24孔培养板,每孔1ml,加GM-CSF(GIBCOL公司)10ng/ml.培养第三天轻轻吸去未贴壁细胞,换液.后隔天半量换液,培养第7~8d可收取HDC.结果与讨论每只小鼠可得肝非实质细胞约1.0~1.5×107个,细胞大小不一,类型较多.培养24~48hr后,有大量细胞贴壁生长,少量HDC前体细胞半贴壁状散在分布,经筛选、扩增,第4d时HDC数量增多,出现6~8个细胞组成的小集落.第7~8d,HDC数量增多,此阶段细胞有一明显的增殖高峰,有大量半贴壁半悬浮的集落,集落表面的细胞有小的突起.第7~8d,每只小鼠HDC得率约为2~3×106个.因HDC难于分离培�
简介:关于人类死亡的定义和机理,是一个十分复杂的问题,人们不仅要从生理、医学等方面研究和探讨什么是死亡,还要从社会学、哲学的角度研究探讨什么是死亡,给予死亡一个多视角的概念和定义。近代医学与生物学认为:人是具有意识和感觉的有机统一体,人的躯体是各种意识、行为活动的物质载体,而驾驭这个统一体的是人脑。从纯生物学的角度讲,人的死亡是人的意识、行为活动及各种生理功能的丧失。唯物主义认为:生命是整个肉体的各种运动的总和,而感觉和思维只是作为这些运动的一个部分,因此,在死人那里,感觉和思维也像所有的其他运动一样都是停止的,精神灵魂不过是物质的一种“变形”,身体死亡之时,灵魂就象蒸气一样消散了。因此,世界上根本不存在灵魂或者死者的鬼神之类。唯物主义还认为死亡是生命的终结,是对生命的否定,是对人生的盖棺定论,是对人生价值的最终评定,一个人的生命虽然结束了,但其生前所创造的价值依然存在,并对社会产生或多或少的影响,因此,后人应尊重其人格,其遗体作为其人的物质的代表也应得以妥善的处置和尊重。
简介:目的探讨基于CDIO教学模型的构建在肿瘤专科护士临床实践培训中的应用价值。方法选取2015年3月至2018年3月我院肿瘤专科的106例护士作为研究对象,按采用的不同教学方法将其分为对照组和观察组(各53例)。对照组采用传统教学法进行临床实践培训,观察组患者采用CDIO教学模式进行临床实践的培训,培训结束后比较两组护士间的培训效果。结果(1)对照组护士理论与操作成绩培训前后无明显差异,但临床实践综合能力在培训后有明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组护士培训后理论、操作、综合能力较培训前均有明显提高,且高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)培训后观察组护士对教学模式的总满意度(100.00%),明显高于对照组总满意度(84.90%)(P<0.05)。结论CDIO教学模式与传统教学模式比较,更有利于提高肿瘤专科护士的临床理论知识、操作能力、临床实践综合能力,值得临床上推广使用。
简介:四种变异畸形的个例报导付乙,袁琼加成都体育学院一、梨状肌缺如:中年男尸。局解中发现右侧梨状肌缺如,仅有臀中肌在梨状肌的位置。坐骨N穿臀中肌后部中份纤维出骨盆。臀上A.V.N点距骶后正中线6.9cm,距髂嵴上缘垂直线5.8cm。坐骨结节内侧缘距大转子外...
简介:目的探讨Mainz急诊评分系统在急诊护理中的应用。方法按照Mainz急诊评分要求设计调查表格,由急诊科首次接诊护士和各接诊医生在患者就诊时对各项参数进行测量记录,并根据评分分为四个分数段:1-5分,6-15分,16-25分,25-28分。根据评分制定相应级别的护理计划,并追踪各分数段患者的去向和预后,加以比较。结果25-28分17例,瞩其回家观察;16-25分109例,在急诊留观治疗2-24h后离院,给予一般护理;6-15分154例,予以一级护理,38例入ICU,116例收住专科病房(HDU);1-5分患者72例,予以特级护理,收入我院ICU。结论Mainz急诊评分能较好的预判急诊患者的病情危重和病死危险性,根据评分对患者施行相应的分流转诊和制定护理方案可提高急诊科护士的工作效率,减少工作量。