简介：摘要目的探讨生殖道病原菌感染、微小RNA-200c(miR-200c)及血浆中抗顶体蛋白酶抗体(AcrAb)诊断及鉴别不孕症的价值。方法本研究为前瞻性研究，选取2018年6月至2020年6月新乡市中心医院(新乡医学院第四临床学院)生殖医学科收治的190例女性不孕症患者作为不孕组，年龄(30.71±4.32)岁，年龄范围为21~49岁。另选取同期新乡市中心医院(新乡医学院第四临床学院)体检科体检的190名健康女性作为健康组，年龄(30.74±4.36)岁，年龄范围为22~50岁。比较分析两组纳入者生殖道病原菌感染、miR-200c及AcrAb与不孕症的相关性。结果不孕组生殖道1种菌种感染率[76.3%(145/190)]高于健康组[26.3%(50/190)]；2种及以上菌种感染率[22.6%(43/190)]高于健康组[1.6%(3/190)]，差异有统计学意义(P<0.05)。不孕组沙眼衣原体[18.9%(36/190)]、解脲支原体[14.2%(27/190)]、滴虫率[12.6%(24/190)]和假丝酵母菌感染率[54.2%(103/190)]均高于健康组[5.8%(11/190)、4.7%(9/190)、4.7%(9/190)、12.6%(24/190)]，差异有统计学意义(P<0.05)。不孕组miR-200c(3.17±0.70)及AcrAb水平[( 3.58±0.58)μg/L]高于健康组[(1.03±0.18)、(1.52±0.21)μg/L]，差异有统计学意义(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析显示，生殖道病原菌感染(解脲支原体和假丝酵母菌)、miR-200c和AcrAb联合诊断不孕症价值高于单一生殖道病原菌感染(解脲支原体和假丝酵母菌)、miR-200c和AcrAb诊断。继发性不孕患者解脲支原体[36.4%(32/88)]和假丝酵母菌感染率[69.3%(61/88)]高于原发性不孕[4.9%(5/102)、47.1%(48/102)]；继发性不孕患者miR-200c及AcrAb水平[(2.15±0.13)、(2.80±0.24)μg/L]低于原发性不孕患者[(3.62±0.16)、(3.92±0.27)μg/L]，差异有统计学意义(P<0.05)。结论不孕症患者生殖道病原菌感染风险明显增加，且miR-200c、AcrAb水平显著上升，联合生殖道病原菌感染、miR-200c及AcrAb三项指标能提升诊断及鉴别不孕症价值。原发性不孕患者解脲支原体和假丝酵母菌感染率较低，而miR-200c及AcrAb水平较高，有利于与继发性不孕进行鉴别诊断。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1(PTBP1)调控乳腺癌细胞生物学的行为机制。方法选取乳腺癌及癌旁组织标本83例，收集患者临床病理资料，同时选取乳腺癌细胞系(MCF-7)、正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A)，实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133b和PTBP1 mRNA表达，分析与临床病理特征的关系，MCF-7细胞分为阴性对照组、miR-133b模拟物(mimic)组、miR-133b inhibitor组、miR-133b mimic+PTBP1沉默组和miR-133b inhibitor+和PTBP1沉默组，噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测MCF-7细胞增殖及周期的变化，划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭，蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和PTBP1蛋白表达，双荧光素酶实验验证miR-133b对PTBP1的靶向调控机制。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，计数资料采用χ2检验和Fisher精确检验进行分析。结果miR-133b和PTBP1 mRNA在乳腺癌组织(0.94±0.18、4.28±0.27)及乳腺癌细胞的表达水平(1.09±0.22、3.65±0.19)分别明显低于和高于癌旁组织(2.12±0.09、t＝4.343，P<0.05；1.37±0.21、t＝6.006，P<0.05)及MCF-10A细胞(1.99±0.11、t＝5.223，P<0.05；1.15±0.09、t＝5.774，P<0.05)。miR-133b和PTBP1均与TNM分期(1.204±0.057、3.865±0.172，χ2＝6.217，P<0.001)和淋巴转移(0.489±0.041、1.632±0.147，χ2＝7.031，P<0.001)等明显相关，而与年龄(0.601±0.052、2.008±0.187，χ2＝0.261，P>0.05)、分化程度(0.592±0.057、1.994±0.187，χ2＝0.274，P>0.05)和病理分级无关(0.587±0.059、1.921±0.172，χ2＝0.257，P>0.05)。与阴性对照组比较，miR-133b mimic组增殖率[(35.43±1.74)%、(8.43±0.35)%，F＝166.465，P<0.05]、迁移、侵袭细胞数(109±10.562、77±5.751，t＝4.663，P<0.05；128±11.624、81±7.251，t＝7.453，P<0.05)、bcl-2(2.78±0.32、0.76±0.11，t＝4.122，P<0.05)和PTBP1表达(3.45±0.33、0.89±0.26，t＝3.154，P<0.05)明显降低，G1期阻滞明显延长(F＝276.872，P<0.05)，bax表达明显增加(1.22±0.12、3.39±0.46，t＝9.123，P<0.05)，miR-133b mimic+PTBP1沉默组变化更为明显(1.22±0.12、7.71±0.23，t＝6.009，P<0.05)，miR-133b inhibitor组明显逆转上述指标变化(1.22±0.12、0.76±0.11，t＝3.334，P<0.05)，miR-133b inhibitor+PTBP1沉默组逆转更为明显(1.22±0.12、0.33±0.11，t＝5.098，P<0.05)。双荧光素酶实验显示miR-133b可靶向调控PTBP1。结论miR-133b靶向调控PTBP1从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460，以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达，构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞，分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05，F＝5.153，P<0.05)，差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06，t＝9.714，P<0.05)，差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03，0.33±0.01比0.54±0.01，0.54±0.02比0.79±0.00，0.83±0.05比1.10±0.08，t＝5.041、16.840、17.530、3.977，P<0.05)，差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个，t＝27.290，P<0.05]，差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示，miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%，Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个，Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个，t＝16.700、24.020、21.420，P<0.05]，差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2，qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07，t＝3.888，P<0.05)，差异有统计学意义；Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。结论miR-17-5p在结直肠癌中表达升高，并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

简介：摘要

简介：摘要目的探讨miR-224在脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的作用及机制。方法分离清洁级BALB/c小鼠(购自浙江大学实验动物中心)原代PMVEC并体外培养，使用1.0 mg/L LPS处理PMVEC以诱导细胞损伤。通过转染miR-224抑制序列或p21的小干扰RNA(siRNA)序列分别下调PMVEC的微小RNA-224(miR-224)及p21表达水平。采用细胞计数试剂盒法及流式细胞仪检测PMVEC的细胞活力变化及凋亡率变化。实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测PMVEC的miR-224及p21表达水平。使用双荧光素酶报告实验分析miR-224及p21的靶向关系。两组间的均数比较采用t检验，多组间的均数两两比较在采用单因素方差分析基础上使用最小显著差异法(LSD)检验。结果与未经任何处理的PMVEC比较，LPS处理后细胞相对细胞活力降低至(42.333±7.586)%，凋亡率提高至(32.141±2.449)%，miR-224表达增加至1.791±0.167，p21 mRNA水平降低至0.527±0.058，以上差异有统计学意义(t＝8.532、7.261、7.113及8.467，P值均<0.01)。与单纯LPS处理的细胞比较，miR-224下调的细胞在LPS处理后的相对细胞活力增加且凋亡率显著降低，差异有统计学意义(F＝62.618、32.643，P<0.01)。抑制p21表达会消除miR-224下调带来的这种保护作用。结论miR-224可能通过靶向抑制p21参与调控LPS诱导的PMVEC损伤。抑制miR-224可能有助于脓毒症后急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的防治。

简介：摘要目的探讨罗哌卡因对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法2019年1月至2020年4月，将体外培养A549细胞(购自中国科学院上海细胞库)分为对照组、不同剂量[25、50、100 mg/L，罗哌卡因组(Rop组)]、乱序无意义阴性序列组(si-NC组)、si-circ_0044516组、Rop＋pcDNA组和Rop＋pcDNA-circ_0044516组，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移和侵袭，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0044516和微小RNA(miRNA，miR)-198表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0044516和miR-198调控关系。两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果不同剂量Rop组A549细胞抑制率均高于对照组[(22.54±2.11)%、(47.01±4.28)%、(65.84±4.63)%比(0.00±0.00)%，F＝670.553，P<0.05]，细胞迁移数[(82.08±4.60)、(63.02±4.34)、(47.94±3.85)个比(105.64±11.21)个，F＝123.952，P<0.05]、侵袭数[(70.94±5.08)、(53.63±4.11)、(31.01±3.34)个比(93.00±6.25)个，F＝267.501，P<0.05]及Ki-67(0.62±0.05、0.46±0.04、0.32±0.03比0.75±0.04，F＝191.409，P<0.05)、MMP-2(0.41±0.03、0.28±0.03、0.13±0.02比0.59±0.04，F＝361.500，P<0.05)和MMP-9(0.67±0.05、0.52±0.03、0.36±0.03比0.82±0.06，F＝177.835，P<0.05)的蛋白表达、circ_0044516表达均低于对照组(0.81±0.06、0.61±0.05、0.45±0.04比1.00±0.06，F＝182.097，P<0.05)，miR-198表达高于对照组(1.64±0.12、2.16±0.20、2.77±0.23比1.00±0.05，F＝185.997，P<0.05)，差异均有统计学意义。si-circ_0044516组细胞抑制率高于si-NC组[(51.27±4.11)%比(5.69±0.46)%，t＝33.064，P<0.05]，迁移数[(55.57±4.04)个比(107.65±10.84)个，t＝13.506，P<0.05]、侵袭数[(43.02±4.08)个比(92.42±7.84)个，t＝16.768，P<0.05)及Ki-67(0.40±0.03比0.78±0.05，t＝19.551，P<0.05]、MMP-2(0.21±0.03比0.58±0.04，t＝22.200，P<0.05)和MMP-9(0.42±0.04比0.86±0.06，t＝18.305，P<0.05)的蛋白表达均低于si-NC组，差异均有统计学意义。circ_0044516靶向负调控miR-198。Rop＋pcDNA-circ_0044516组细胞抑制率低于Rop＋pcDNA组[(28.57±2.49)%比(67.48±4.78)%，t＝21.658，P<0.05]，迁移数[(88.57±5.31)个比(46.35±4.33)个，t＝18.486，P<0.05]、侵袭数[(74.57±5.97)个比(28.26±2.19)个，t＝21.848，P<0.05]及Ki-67(0.64±0.04比0.31±0.03，t＝19.800，P<0.05)、MMP-2(0.46±0.04比0.12±0.02，t＝22.808，P<0.05)和MMP-9(0.73±0.06比0.33±0.03，t＝17.889，P<0.05)的蛋白表达均高于Rop＋pcDNA组，差异均有统计学意义。结论Rop可能通过调控circ_0044516/miR-198轴抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的建立燃煤污染型氟暴露人群血浆中差异表达的5个微小RNA（microRNA，miRNA）靶基因的蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络，筛选具有重要作用的基因及基因模块。方法将本课题组前期筛选的燃煤污染型氟暴露人群血浆中差异表达的5个miRNA（hsa-miRNA-3131、hsa-miRNA-4516、hsa-miRNA-6501-5p、hsa-miRNA-10b-5p、hsa-miRNA-4683）的靶基因定位到STRING在线数据库（https：//string-db.org），筛选PPI网络。使用Cytoscape v3.6.0软件对PPI网络可视化，通过NetworkAnalyzer插件得到拓扑属性值度和拓扑属性值介数，筛选PPI网络的中心节点（度和介数均最高的节点）。同时，采用CytoHubba插件中的最大团中心（MCC）分析方法来确定PPI网络中的重要节点。通过MCODE插件进行聚类分析，筛选PPI网络的基因模块。将基因模块所包含的蛋白质名称在线提交KOBAS v3.0数据库（http：//kobas.cbi.pku.edu.cn/），对MCODE插件筛选出的基因模块进行KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路富集分析。结果靶基因的PPI网络由1 035个节点和4 346个边组成。泛素蛋白A-52残基核糖体蛋白融合产物1（UBA52）的度（101）和介数（0.010 723 89）均最高，为PPI网络的中心节点。经MCC分析，UBA52为PPI网络中的重要节点。从PPI网络中选择排名前5的基因模块，5个基因模块的KEGG通路富集分析中高度富集的基因通路分别为泛素介导的蛋白水解、剪接体、内吞作用、神经活性配体-受体相互作用、囊泡转运。结论成功建立了燃煤污染型氟暴露人群血浆中差异表达的5个miRNA靶基因的PPI网络，筛选出UBA52基因和5个基因模块主要通路。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miR)-155对人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化的心房肌细胞L-型钙通道α1c(Cav1.2)钙电流(ICa-L)、基因及蛋白表达的影响。方法诱导并鉴定H7hESCs(购自中国科学院)分化获得的人心房肌细胞(分化第8～10天可获得)，向心肌细胞转染含有miR-155前体序列或反义序列的慢病毒，分为对照组、miR-155模拟物(Mimics)组、miR-155抑制子(Inhibitors)组。于72 h后，运用膜片钳、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测ICa-L、mRNA及蛋白的变化。组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果成功获得心房肌细胞，转染miR-155模拟物后，miR-155表达高于对照组(25.52±3.63比1.00±0.00，t＝11.713，P<0.05)，差异有统计学意义。转染miR-155抑制子后，miR-155表达低于对照组(0.59±0.07比1.00±0.00，t＝10.933，P<0.05)，差异有统计学意义。膜片钳结果发现miR-155上调组ICa-L明显低于对照组(-9.79±3.70比-14.27±3.95，t＝2.611，P<0.05)，差异有统计学意义，RT-qPCR及Western blot证实，miR-155上调组Cav1.2的mRNA表达量(0.45±0.06比1.00±0.00，t＝17.226，P<0.05)及蛋白表达量(0.71±0.07比1.00±0.00，t＝7.708，P<0.05)均低于对照组，差异均有统计学意义。结论对于hESCs诱导的心房肌细胞，上调miR-155可导致Cav1.2蛋白表达水平下降，ICa-L电流减小，可能参与心房肌细胞的电重构。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-630对膀胱尿路上皮癌侵袭转移的调控作用及其分子机制。方法通过生物信息学预测，APC膜募集蛋白(Amer2)为miR-630下游靶基因。构建含miR-630结合位点的Amer2基因3’端非编码区(3’UTR)荧光素酶报告载体，检测miR-630与Amer2的3’UTR相互作用对荧光素酶活性的影响。miR-630模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)用脂质体(Lipofectamine) 2000在体外瞬时转染膀胱癌细胞株EJ，转染72 h后采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Amer2、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF-H1)的表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测Amer2、GEF-H1蛋白的表达变化；细胞划痕实验、Transwell小室体外侵袭实验反映细胞增殖、转移潜能的变化，组间比较采用两独立样本t检验。结果转染miR-630 mimics后，Amer2荧光海肾素酶活性低于对照组，差异有统计学意义(13.885±1.624比22.182±1.354，t＝-6.885，P<0.05)；转染miR-630 mimics后，膀胱癌细胞株EJ中Amer2的表达量明显低于对照组(11.786±4.123比8.327±3.863，t＝5.780，P<0.05)，差异有统计学意义，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot结果显示GEF-H1基因及蛋白的表达水平明显高于对照组(9.886±5.422比13.565±4.476，t＝5.420，P<0.05)，差异有统计学意义；转染miR-630 inhibitor后，体外实验表明膀胱癌细胞的迁移活性[(42.320±4.183)%比(35.528±5.433)%，t＝5.825]和侵袭能力[(49.180±5.677)%比(40.422±6.266)%，t＝7.377，P<0.05]明显低于对照组，差异有统计学意义。结论MiR-630在膀胱尿路上皮癌中高表达，可能通过调控Amer2/GEF-H1通路增强肿瘤细胞增殖，诱导膀胱癌细胞侵袭转移。

简介：近年的研究发现非编码RNA（ncRNA）分子能在多个水平参与基因表达的调控机制,其中小分子双链RNA（dsRNA）对相关蛋白表达的特异性抑制作用已经进行了广泛而深入的研究,如小干扰RNA（siRNA）能够诱导与其分子核糖核苷酸排列序列相一致的mRNA降解,

简介：RNAi是指通过双链RNA介导特异性降解靶mRNA，导致转录后水平基因沉默的现象。其作用途径有RdRP依赖的RNAi的途径与非RdRP依赖的RNAi途径2种。利用RNAi的基因敲除技术在dsRNA序列选择、质粒或病毒为载体的dsRNA体内合成、发夹样siRNA的转录、dsRNA的导入方法等方面取得了很大进展，在研究人类或其他生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景。

简介：RNA的完整性分别应用4种方法对甘草的两个组织的RNA进行了提取,RNA的产率和纯度分别应用4种方法对甘草的叶片和根部组织的RNA进行了提取,为从富含多糖的根类组织中提取RNA提供了依据

简介：摘要脂代谢参与了多种代谢相关疾病的发生、发展与调控，涉及营养调节、激素调节和体内平衡。近年来，越来越多的证据表明，非编码RNA的异常表达与代谢性疾病的发生和发展有关。其中，环状RNA作为一种新的非编码RNA，通过与相应的微小RNA或RNA结合蛋白相互作用，在脂代谢相关疾病如肥胖、2型糖尿病、动脉粥样硬化以及非酒精性脂肪性肝病等的发生、发展中起重要作用。

简介：

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-570-3p调控肝胆管癌细胞凋亡的潜在机制。方法纳入2019年1月至2020年1月于山西省人民医院收治确诊为肝胆管癌患者30例，收集胆管癌患者癌组织样本(胆管癌组)和癌旁组织样本(癌旁组)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测30例肝胆管癌患者癌组和癌旁组中miR-570-3p的表达量，同时过表达或敲低miR-570-3p后，Annexin染色测肝胆管癌细胞的凋亡。过表达或敲低miR-570-3p后，检测这些潜在底物的表达量过表达或敲低潜在底物，检测其对肝胆管癌细胞凋亡的影响。通过t检验分析组间差异。胆管癌组与癌旁组使用Mann-Whitney检验分基因表达量差异。结果胆管癌组中miR-570-3p的相对表达量低于癌旁组(0.76±0.14比1.91±0.34，U＝42.123，P<0.05)。过表达miR-570-3p后，过表达组的肝胆管癌细胞RB3的凋亡水平高于对照组(0.79±0.20比0.21±0.05，t＝4.873，P<0.05)；敲低miR-570-3p后，敲低组中爪蟾运动蛋白样蛋白2靶向蛋白(TPX2)和磷脂酰肌醇特异性磷酯酶CB1(PLCB1)的表达水平均高于对照组(1.34±0.28比0.32±0.28，t＝4.462，P<0.05；0.39±0.13比0.14±0.04，t＝3.184，P<0.05)，过表达miR-570-3p后，过表达组中TPX2和PLCB1的表达水平均低于对照组(1.34±0.28比2.06±0.33，t＝2.882，P<0.05；0.39±0.13比1.43±0.39，t＝4.382，P<0.05)；敲低TPX2和PLCB1后，敲低TPX2组中肝胆管癌细胞RBE的凋亡水平高于对照组(0.72±0.13比0.21±0.05，t＝6.342，P<0.05)，而敲低PLCB1组中肝胆管癌细胞RBE的凋亡水平与对照组比较差异无统计学意义(0.23±0.04比0.21±0.05，t＝0.541，P>0.05)。过表达TPX2后，过表达TPX2组中肝胆管癌细胞RBE的凋亡水平低于对照组(0.04±0.01比0.21±0.06，t＝4.841，P<0.05)；同时，胆管癌组中TPX2的相对表达量高于癌旁组(1.25±0.15比0.59±0.04，U＝85.152，P<0.05)。结论miR-570-3p靶向TPX2的3端非编码区，减少了TPX2的表达，最终增加了肝胆管癌细胞的凋亡水平。

简介：摘要目的观察尿道上皮细胞中微小RNA(miR)-155-5p通过靶向BTB-CNC异体同源体1(BACH1)促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应，从而参与尿道狭窄的发生和发展。方法生信分析结果BACH1可能是miR-155-5p的直接靶标，然后将miR-155-5p mimics或mimics NC与pmiR-Glo-BACH1-WT或pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染到SV-HUC-1细胞中，转染48 h后，检测荧光素酶活性。将BACH1小干扰RNA(siRNA)转染到SV-HUC-1细胞中，pcDNA3.1-BACH1转染到SV-HUC-1细胞中。转染24 h后，用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(collagen IV)的信使核糖核酸(mRNA)水平，同时应用蛋白质印迹法(Western blot)检测VEGF、FN和Collagen Ⅳ的蛋白质水平。两组间分析采用单因素方差分析。结果miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-WT共转染的细胞，与miR-155-5p和pmiR-Glo-BACH1-MUT共转染的细胞比较的荧光活性明显下降(FLUCR与RLUCR比率为0.54±0.05比0.95±0.07，F＝73.65，P<0.05)。然而，无论转染pmiR-Glo-BACH1-MUT或pmiR-Glo-BACH1-WT，模拟对照细胞中的荧光强度都无明显变化(比率为1.03±0.04比1.01±0.03 F＝0.548，P>0.05)。IL-1β、IL-6和TNF-α水平在BACH1敲低细胞中增加(分别为615.57±29.44比285.37±23.97，F＝226.939；818.53±41.16比502.63±24.38，F＝130.824；596.63±41.16比366.57±28.84，F＝88.349)，P<0.01，但在BACH1过表达细胞中下降(分别为122.70±15.94比298.87±12.44，F＝227.675；282.50±33.16比511.30±39.76，F＝58.585；129.83±9.31比374.80±25.40，F＝245.926，P<0.01)。此外，VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(分别为1.65±0.08比0.96±0.06，F＝149.555；2.00±0.12比0.97±0.07，F＝160.243；1.65±0.06比0.96±0.02，F＝369.388，P<0.01)和蛋白质水平(分别为1.50±0.10比1.01±0.09，F＝38.382；1.42±0.10比0.99±0.09，F＝31.339；1.30±0.06比0.95±0.05，F＝62.642，P<0.01)也因BACH1敲低而增加，但因SV-HUC-1细胞中BACH1过表达而下降(mRNA水平分别为0.39±0.04比0.97±0.04，F＝340.18；0.52±0.04比0.94±0.03，F＝204.165；0.43±0.01比1.03±0.11，F＝47.206；蛋白水平分别为0.42±0.08比0.97±0.12，F＝45.375；0.52±0.05比0.96±0.12，F＝33.781；0.58±0.05比0.99±0.11，F＝36.900，P<0.01)。结论miR-155-5p通过靶向BACH1促进尿道上皮细胞的炎症和纤维化反应。

简介：摘要目的探讨通腑泄热法中药通过线粒体DNA(mtDNA)/Toll样受体9(TLR9)/微小RNA(miR)-223通路抑制肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的作用。方法随机数字法将80只健康无特定病原体(SPF)级SD大鼠分成通路正常组(NP组)、通路激活组(AP组)、通路正常中药组(NPT组)、通路激活中药组(APT组)4组，"通路激活"指在大鼠HIRI建模麻醉后采用TLR9激活剂50 μg/只腹腔注射激活mtDNA/TLR9/miR-223通路，"通路正常"则腹腔注射对应剂量生理盐水；"中药"指手术处理前3 d以通腑泄热法中药按照5 ml/只/次剂量，每日2次给大鼠灌胃。每组20只，均建立肝脏HIRI模型，以分组要求施加不同干预后分别于再灌注后24、48 h两个时间点采集血清及肝组织标本，并进行相关生化指标、病理、蛋白质印迹法(Western blot)及聚合酶链反应(PCR)检测。采用多因素方差分析。结果"通路激活"及"中药干预"均是术后血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)变化的影响因素。通路激活可促进术后血清中ALT、AST、LDH升高，AP组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH高于NP组[ALT：(962.34±42.35) U/L比(747.33±40.04) U/L，F＝11.446，P<0.05；AST：(1 421.58±93.25) U/L比(1 041.87±48.60) U/L，F＝5.893，P<0.05；LDH：(2 312.99±95.77) U/L比(1 974.23±75.80) U/L，F＝5.019，P<0.05]；而中药干预可抑制术后血清中ALT、AST、LDH升高，NPT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT：(561.31±40.49) U/L比(747.33±40.04) U/L，F＝688.807，P<0.05；AST：(792.38±44.03) U/L比(1 041.87±48.60) U/L，F＝838.255，P<0.05；LDH：(1 702.75±62.32) U/L比(1 974.23±75.80) U/L，F＝514.608，P<0.05]；通路激活及中药干预的交互作用呈现出抑制作用，APT组大鼠术后24 h血清ALT、AST、LDH低于NP组[ALT：(437.88±47.88) U/L比(747.33±40.04) U/L，F＝156.296，P<0.05；AST：(510.02±55.54) U/L比(1 041.87±48.60) U/L，F＝272.576，P<0.05；LDH：(1 473.69±71.94) U/L比(1 974.23±75.80) U/L，F＝134.480，P<0.05]；且术后48 h，NP组、AP组、NPT组、APT组4组大鼠血清ALT、AST、LDH均较术后24 h降低。术后24 h 4组大鼠肝细胞病理均呈现出不同程度坏死，以AP组坏死最严重，且术后48 h各组肝细胞坏死程度较术后24 h轻。术后24 h，各组大鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)及ICAM1的表达以NP组表达最高，APT组最低，而术后48 h各组NF-κB及ICAM1表达趋势同术后24 h，且各自较术后24 h表达有所下降。术后24 h，相对于NP组，AP组及APT组中miR-223、TLR9的表达明显升高，NPT组的表达明显降低；而NPT组、AP组及APT组中mtDNA的表达均明显降低，以APT组降低最显著，术后48 h各组三者表达量均较术后24 h降低，以APT组降低最显著。结论通腑泻热法中药可以通过mtDNA/TLR9/miR-223通路改善肝脏缺血再灌注损伤。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miR)调控胰腺癌吉西他滨耐药的分子作用机制。方法反转录聚合酶链反应(qPCR)检测来自桂林医学院附属医院2015年1月至2018年12月收治的胰腺癌患者的临床标本miR-23a-5p表达水平，细胞实验检测miR-23a-5p对吉西他滨处理下肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1(TP53INP1)及细胞增殖和凋亡相关因子表达的影响，噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡情况。荧光素酶报告实验检测miR-23a-5p和TP53INP1是否直接作用。构建胰腺癌皮下成瘤小鼠模型，检测动物体内miR-23a-5p瘤体大小和吉西他滨耐药性的影响，组间比较采用多重比较检验或t检验。结果耐药组织中miR-23a-5p的表达量显著高于不耐药组(2.267±0.334，t＝4.355，P<0.01)，miR-23a-5p直接靶向调控TP53INP1降低其表达(0.423±0.095，t＝5.649，P<0.01)，miR-23a-5p过表达组(IC50＝13.23)胰腺癌细胞增殖活性显著高于对照组(IC50＝8.32，t＝5.119，P<0.01)，细胞凋亡比例[(15.080±0.838)%]显著低于对照组[(30.710±0.566)%，t＝7.163，P<0.01]，TP53INP1和miR-23a-5p共处理组(IC50＝7.932)胰腺癌细胞增殖水平显著低于miR-23a-5p单独处理组(IC50＝12.570，t＝12.57，P<0.01)，凋亡水平[(32.350±3.212)%]显著高于miR-23a-5p单独处理组[(15.680±1.358)%，t＝6.764，P<0.01]，动物实验结果表明敲低miR-23a-5p吉西他滨处理后显著抑制肿瘤生长[(169.090±25.889) cm3，t＝4.351，P<0.01；(0.097±0.031) g，t＝3.776，P<0.01]，差异均有统计学意义。结论miR-23a-5p介导TP53INP1调控胰腺癌细胞凋亡和吉西他滨耐药。

简介：摘要目的探讨LINC01133/微小RNA(miRNA，miR)-205/谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)轴对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法收集河南省人民医院2018年1月到2020年1月手术摘除的129例乳腺癌和癌旁组织，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC01133和miR-205表达水平；在MCF-7细胞建立LINC01133过表达和miR-205沉默细胞系，分别作为LINC01133组、lncRNA对照组、miR-205 KD组和miR对照组。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞增殖能力，采用Transwell分析细胞迁移能力；采用生物信息学分析LINC01133和miR-205关系及其靶蛋白；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析靶蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织LINC01133表达水平(1.12±0.15)比较，乳腺癌组织中LINC01133表达水平(0.57±0.10)显著下调，差异有统计学意义(t＝3.011，P<0.05)。与lncRNA对照组细胞LINC01133表达水平(1.05±0.11)比较，LINC01133组细胞LINC01133表达水平(2.48±0.21)显著增加，差异有统计学意义(t＝4.108，P<0.05)。与lncRNA对照组细胞吸光度值(2.29±0.20)比较，LINC01133组细胞吸光度值(1.54±0.16)显著下降，差异有统计学意义(t＝3.025，P<0.05)。与lncRNA对照组细胞迁移数量[(80.71±8.19)个]比较，LINC01133组细胞迁移数量[(43.77±6.47)个]显著下降，差异有统计学意义(t＝2.810，P<0.05)。生物信息分析显示LINC01133的靶miRNA是miR-205，miR-205的靶基因是GPX3，miR-205与GPX3 mRNA 3’端非编码区(3’UTR)区域存在碱基互补。与lncRNA对照组细胞GPX3蛋白表达水平(0.28±0.10)比较，LINC01133组细胞中GPX3蛋白表达水平(1.08±0.22)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.791，P<0.05)。与miRNA对照组细胞GPX3蛋白表达水平(0.58±0.16)比较，miR-205 KD组细胞GPX3蛋白表达水平(1.98±0.24)显著增加，差异有统计学意义(t＝3.019，P<0.05)。结论LINC01133在乳腺癌中呈低表达，通过miR-205/GPX3轴参与乳腺癌的增殖和迁移。

简介：摘要目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中微小RNA(miR)-204对E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响，及对上皮-间充质转化(EMT)及细胞侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测甲状腺乳头状癌及其癌旁组织中miR-204的表达；将miR-204 mimics转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中，采用荧光定量PCR的方法检测ZEB1、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达水平，应用双荧光素酶报告基因分析实验观察miR-204对ZEB1基因表达的调控作用；同时，将miR-204 mimics与过表达ZEB1质粒共转染至人甲状腺乳头状癌细胞-1(TPC-1)细胞中，采用Transwell细胞侵袭实验观察miR-204和ZEB1表达变化对甲状腺乳头状癌细胞侵袭能力的影响。组间比较采用t检验。结果miR-204在甲状腺癌乳头状组织中的表达水平低于癌旁正常组织中的表达水平，差异有统计学意义(1.14±0.08比3.52±0.07，t＝13.250，P<0.05)；miR-204 mimics转染组侵袭细胞数低于对照组侵袭细胞数[(149.4±20.2)个比(268.6±30.2)个，t＝3.402，P<0.05]，差异有统计学意义；miR-204 mimics转染组细胞E-cadherin表达水平高于对照组细胞(0.98±0.17比0.35±0.12，t＝2.903，P<0.05)，差异有统计学意义，N-cadherin和vimentin表达量低于对照组细胞(0.29±0.11比0.89±0.10，t＝2.974，P<0.05；0.30±0.13比0.93±0.15，t＝2.859，P<0.05)，差异有统计学意义；双荧光素酶报告基因分析结果显示，miR-204 mimics转染组ZEB1的相对荧光素酶活性低于对照组(0.23±0.06比1.12±0.04，t＝12.460，P<0.05)，差异有统计学意义；甲状腺癌乳头状癌TPC-1细胞中转染miR-204 mimics组ZEB1基因的表达水平低于对照组(0.41±0.06比1.10±0.07，t＝6.783，P<0.05)，差异有统计学意义；miR-204 mimics与ZEB1过表达质粒共转染后，甲状腺癌细胞的侵袭细胞数与对照组比较差异无统计学意义[(224.4±23.5)个比(230.0±28.5)个，t＝1.140，P>0.05]，差异有统计学意义。结论miR-204能够通过靶向抑制ZEB1的表达，从而抑制细胞发生上皮间质转化进而抑制甲状腺乳头状癌细胞的侵袭能力。