盐酸小檗碱片的处方前研究

盐酸小檗碱片的处方前研究

段丽萍 1 . 2 . 3* 、陈雪江 1 . 2 . 3 、陈晓雪 1 . 2 . 3 、徐红贵 1 . 2 . 3 、 杨志 1 . 2 . 3

(1 . . 云南省药物研究所、 2 . 云南白药集团创新研发中心、 3. 云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明 650111)

摘 要：目的 对盐酸小檗碱片进行理化性质测定，为处方工艺研究提供理论指导。方法 对盐酸小檗碱的性状、引湿性、晶型和结晶水等进行考察，并建立高效液相色谱法检测原料在不同pH值下溶解度。结果 盐酸小檗碱为黄色结晶性粉末，在热水中溶解，在水或乙醇中微溶；盐酸小檗碱略有引湿性；盐酸小檗碱为含结晶水晶体结构；所建立的含量测定方法专属性强，线性范围广，测试出盐酸小檗碱溶解度为pH依赖型，在pH1.2~pH3.0范围内溶解度增加趋势明显，在pH3.0~pH8.0范围内溶解度变化趋于平缓。结论 本研究结果可为盐酸小檗碱片处方设计及工艺研究提供试验依据。

关键词：盐酸小檗碱；处方前研究；结晶水；溶解度

盐酸小檗碱是一种临床上广泛使用的抗菌药物，又名盐酸黄连素，临床主要用于痢疾杆菌、大肠杆菌等导致的肠道感染^[1][2]。目前，盐酸小檗碱有植物提取和化学合成两种来源，均按化学药管理，共有批文42个，目前国内在产仅有6家。化学合成厂家主要为东北制药集团、山西同济药业等，植物提取厂家主要为四川协力制药股份有限公司、四川玉鑫药业等。本研究的目的在于了解盐酸小檗碱的基本性质，为开展本品一致性评价奠定基础，为处方设计及工艺研究提供依据。现将研究结果报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，Agilent 1260二极管阵列检测器，Waters XTerra C₁₈色谱柱(4.6×250 mm，5 µm)，LC Open lab色谱数据工作站；ATY-124分析天平(苏州岛津分析仪器有限公司)；T60-A型干燥箱(重庆创测实验仪器有限公司)。

1.2 试药

盐酸小檗碱植物提取原料药(四川协力制药股份有限公司，批号：C025A160905)；盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110713-201613；含量：86.8%)；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验 C₁₈柱(Waters Xterra C18, 4.6×250mm; 5μm)；以0.05 mol/L磷酸二氢钾和乙腈(78:22)；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：263nm；进样量：20μl，在此色谱条件下，盐酸小檗碱峰型尖锐，理论板数按盐酸小檗碱计3000，小檗碱主峰与其他相邻杂峰的分离度大于1.5。

2.1.2 线性关系 精密称取盐酸小檗碱对照品15mg，置100ml容量瓶中，加适量流动相，超声10分钟，加流动相定容至刻度，摇匀，作为母液，分别精密吸取适量母液用流动相配制成浓度分别为15、30、45、60、75、90和105µg/ml的溶液，照“2.1.1”项下色谱条件进样测定，结果在浓度15µg/ml~105µg/ml范围内，盐酸小檗碱浓度与峰面积线性关系良好，线性方程为Y=89.525X+2.7175(r=1.0000)。

2.1.3 仪器精密度 取“2.1.2”项下的中间浓度溶液（60µg/ml），照“2.1.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，考察主峰的保留时间和峰面积变化，结果主峰保留时间稳定（RSD=0.44%，n=6），主峰面积差异小（RSD=0.41%，n=6），仪器精密度符合测定要求。

2.1.4 重复性及中间精密度试验 精密称取同一批盐酸小檗碱原料药适量（约15mg），共6份置100ml容量瓶中，加适量流动项超声15分钟，加流动相定容至刻度，摇匀，精密取4ml，置10ml容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀作为供试品溶液；照“2.1.1”项下色谱条件测定含量，结果6次含量测定结果的RSD值为0.62%，表明本法重复性良好。

2.1.5 稳定性试验 取“2.1.4”项下的任一供试品和对照品溶液，室温放置，照“2.1.1”项下的色谱条件，分别于0、2、4、6、8和24h分别检测，结果供试品和对照品溶液在室温24小时内稳定，峰面积的RSD分别为0.32%和0.28%（n=6）。

2.1.6 破坏性试验 分别取盐酸小檗碱原料适量，分别进行酸、碱、光照、高温和氧化破坏后制备成供试溶液，结果盐酸小檗碱在酸和氧化条件下降解明显，碱、光照、高温条件降解不明显，各降解杂质均能与主峰基线分离，DAD检测主峰纯度均在0.99以上，说明该法专属性较好。

2.2 性状考察

2.2.1性状考察 取盐酸小檗碱原料，置白纸上观察，结果为黄色结晶性粉末；闻其味道，无臭味。

2.2.2 溶解性考察 在室温条件下考察盐酸小檗碱在不同溶剂中的溶解性。称取一定量的盐酸小檗碱粉末置于容量瓶中，分别加入适量的纯化水(热、室温)、三氯甲烷、乙醇、乙醚、乙醇和乙腈溶剂，隔5min强力振摇30s，直至30min内不能完全溶解为止。结果盐酸小檗碱在热水和乙腈中溶解，在水或乙醇中微溶，在三氯甲烷中极微溶解，在乙醚中几乎不溶。

2.3 引湿性的测定

参照中国药典2015版四部9103《药物引湿性试验指导原则》进行试验，结果24小时后的吸水1.51%，判定为略有引湿性，提示在处方工艺研究过程中，需要考虑原料药引湿性可能影响制剂的质量，同时也要注意贮存过程中包材的阻湿性。

2.4 晶型结构与结晶水的考察

2.4.1 X射线粉末衍射 取约10mg盐酸小檗碱粉末置X射线粉末衍射仪放样槽内，以Cu靶/石墨单色器，40KV/25mA，速度0.2°/min进行扫描，结果盐酸小檗碱分别在6.9、8.7、9.2、13.1、13.9、14.1、14.8、15.7、16.4、20.4、21.1、25.6和26.5°有强衍射峰，确定盐酸小檗碱为晶体结构的化合物，对应游离水与结晶水的分解温度，表明盐酸小檗碱含结晶水的化合物。

2.5 不同pH值溶液中溶解度测试

分别取过量的盐酸小檗碱，加入到不同pH值的溶液中，并置于恒温培养振荡器振荡24h，转速150rpm。达到平衡后离心，取上清液用流动相稀释至适宜测试的溶液；参照“2.1.2”项下的方法制备对照品溶液，按2.1.1方法测定，按外标法计算盐酸小檗碱在不同pH溶液中的溶解度，结果盐酸小檗碱溶解度为pH依赖型；在pH1.2~pH3.0范围内溶解度增加趋势明显，在pH3.0~pH8.0范围内溶解度变化趋于平缓。提示在后续制剂处方及工艺研究中，需要关注上述不同pH范围内制剂的溶出情况。

3讨论

本研究对盐酸小檗碱进行了处方前研究，包括溶解性、晶体、溶解度、引湿性等，建立了盐酸小檗碱含量测定方法，并测定在不同pH溶液中的溶解度。试验结果表明，盐酸小檗碱为黄色结晶性粉末，无臭，味苦，本品的患者顺应性可能较差，制备过程需考虑包衣，达到掩味的效果，同时，也要注意生产过程的劳动防护；X射线粉末衍射分析和差示扫描量热分析显示其为含结晶水的晶体结构；不同pH溶液中的溶解度试验结果可知，盐酸小檗碱的溶解度在120μg/ml~3000μg/ml范围内，均大于最小抑菌浓度(MIC)为62.5μg/ml，可较好的发挥其抑菌作用。

参考文献

[1] 张茜, 朴香淑. 小檗碱抑菌作用研究进展[J]. 中国畜牧杂志. 2010, 46(3): 58-61.

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