简介:医院急诊急救专业的工作方式不同于其他专科,主要承担各种疾病急性发作时期的抢救工作。急诊患者大都有起病急,具有病情变化较快、不确定性和不可预测性较强、病情较为复杂等特征,要求急诊科医务人员要有科学思维,短时间快速分析病情后得出最佳综合判断,给予针对性强的救治。降阶梯思维模式是一种系统科学高效的急诊临床思维模式,是提高医疗质量,减少疾病误诊和漏诊机率的重要基础,它要求做急诊症状鉴别诊断时通常从危及生命的严重疾病到无生命危险的一般疾病和慢性病,在急诊急救临床工作及临床教学工作中发挥着不可替代的重要价值。
简介:摘要目的构建miR-7-1启动子核心序列的真核表达载体,并初步探讨其意义。方法根据5’端缺失实验原理,设计引物,PCR法分别扩增含不同长度启动子序列和相同miR-7-1成熟体序列的产物;纯化、经KPNI和XHOI双酶切后将它们分别亚克隆入pGL3.0-Basic真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将三个构建成功的pGL3.0-miR-7载体(分别命名为p-1189-miR-7,p-1731-miR-7,p-2192-miR-7)体外瞬时转染小鼠乳腺癌4T1细胞;用Real-timePCR检测各组中miR-7成熟体的表达水平;CCK-8法检测细胞生长的变化;最后,利用TRANSFAC数据库预测结合miR-7-1启动子核心序列的潜在转录因子。结果酶切和测序验证成功构建了p-1189-miR-7、p-1731-miR-7、p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体;与表达载体p-1189-miR-7、p-1731-miR-7转染组相比,表达载体p-2192-miR-7瞬时转染4T1细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制4T1细胞的体外生长(p<0.05),提示miR-7启动子序列-1593位点到-2024位点为核心序列;最后,预测结果显示NK2-同源盒-5(NK2-Homebox-5,NKX2-5)和肝细胞核因子4(hepatocytenuclearfactor4homeobox,HNF-4)可能是结合该核心序列的转录因子。结论成功构建了p-1189-miR-7,p-1731-miR-7,p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体,并筛选到miR-7-1启动子的核心序列(-1593位点到-2024位点),为后续深入研究miR-7-1在乳腺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础。