简介：目的：利用基因芯片技术，以细菌16SrDNA和23SrDNA为靶序列筛选引物和探针，建立快速、准确的检测水产食品中肠道致病菌的方法。方法：将致病菌的16SrDNA和23SrDNA全序列进行软件比对，在可变区和恒定区分别设计特异性寡核苷酸探针和通用性引物，点样于玻片制成基因芯片。致病菌DNA经过通用引物扩增后与芯片上的探针杂交，然后通过扫描图像对结果进行判断。对基因芯片检测的灵敏度进行了评价，并对模拟污染样本进行了实际检测，以验证所建立的方法。结果：设计的4对通用引物在同一条件下能够扩增7种常见肠道致病菌。在均一的杂交条件下能够同时检测单核细胞增生利斯特菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、弗氏志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7；以鼠伤寒沙门氏菌为对象，本方法的检测灵敏度可达到10^-3cfu/mL，实际检测模拟污染的样本的正确率达到100%。结论：建立的基因芯片系统可以准确而稳定地实现对7种水产食品中常见致病菌的通用检测，为食源性感染的诊治与预防提供了有效的技术手段和方法依据。

简介：目的：探讨脑胶质瘤患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因MGMT和错配修复基因hMLH1、hMSH2启动子CpG岛甲基化状态,及其在烷化剂化疗中的意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测39例脑胶质瘤和6例正常脑组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态,免疫组化方法测定蛋白表达。结果：脑胶质瘤患者组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46.2%、10.3%和20.5%,3种基因启动子未甲基化模式与其对应蛋白表达模式相似,并与患者性别、年龄、病理类型和病理分级无明显相关性。回顾性分析患者资料,显示39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存期显著高于MGMT基因未甲基化患者（P〈0.05,Log-rank检验）。结论：MGMT及错配修复基因甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,可能与肿瘤的发生有关;检测MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态,在判断脑胶质瘤患者预后和预测烷化剂化疗耐药性中可能具有重要意义。

简介：目的：对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化，找出最佳的外源蛋白表达条件。方法：在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养，优化最佳产酶条件。结果：以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100～200mL/L、甲醇浓度1g/L、pH6.0～7.0、诱导时间96h时酶的表达量最高；摇瓶模拟高密度培养表明影响酵母生长的最主要因素葡萄糖和硫酸铵的最佳浓度分别为20～45和11.5g/L；利用培养基F1进行高密度培养优于其他培养基，工程菌生长符合指数生长曲线，细胞生长延迟期为1.36h，比生长速率μ为0.4846h-1。结论：以葡萄糖为碳源，采用葡萄糖-甲醇混合诱导和100%甲醇单一诱导相结合，在菌体鲜重约为280g/L时连续诱导96h，菌体生长良好，不会出现自溶，且酶的表达量最高，为摇瓶培养的3倍多，酶活最高可达540U/mL。

简介：慕课（MOOC）热带来了在线课程的新体验，学生就此有了提高学术英语能力的迫切要求，同时给高等教育大力倡导的专用英语（ESP）发展创造了难得的机遇。本文简述了慕课和ESP的基本概念、特点及影响，以军医大学的生物化学英语教学为例，从教学内容、教学方式、考核方式等方面探讨了目前生物化学英语教学的现状，提出了生物化学英语ESP课程建设的相关对策，建议选择贴近学习者需求的慕课课程、分阶段有侧重进行专业学术英语技能培训，此举将有助于慕课课程模式下ESP教学改革的开展，促进国际化人才的培养。

简介：目的:探讨核酸适体KMF2-1a为基础的乳腺癌细胞靶向化疗药物载体的应用价值。方法:采用细胞仪检测人体乳腺癌MCF-1OAT1细胞内吞KMF2-1a的药物载体的作用,其结果以分光光度计检测。结果:核酸适体KMF2-1a及其药物载体可被MCF-1OAT1细胞特异性内吞。结论:核酸适体KMF2-1a可用于靶向治疗乳腺癌。

简介：随着我国医疗水平的不断提高,我国在糖尿病与糖尿病肾病上的研究加深,对TLR4/P38Mapks信号通路与糖尿病肾病相关性的研究更进一步,笔者在前人探究结果的基础上,开展探究活动。糖尿病与糖尿病肾病患者的TLR4/P38Mapks表达都高于健康人群,因此TLR4/P38Mapks表达与糖尿病肾病患者的病情存在密切关系,且糖尿病与糖尿病肾病患者的TLR4/P38Mapks表达与尿蛋白排泄率、尿素氮之间存在正相关,而DN组TLR4/P38Mapks表达又与患者血清中的IL-6、IL-8之间也存在正相关关系。本文先是对MAPKs信号通路生化特征与糖尿病肾病的相关性进行概述,又详细阐述了糖尿病肾病与TLR4的相关性。

简介：利用同源模建方法预测了t-PAK1区的三维结构。通过结构叠合确定了t-PAK1、K2区,纤溶酶原K1、K4区及UKK区的赖氨酸结合口袋。静电势计算及疏水性分析表明,在t-PAK2区以及纤溶酶原K1、K4区与纤维蛋白裸露的赖氨酸之间存在明显的静电势互补和疏水面契合。确定了影响Kringle区结合口袋与赖氨酸亲和的重要氨基酸,分析了t-PAK1区、UKK区不能结合赖氨酸的原因,由此设计了具有赖氨酸亲和力的新型t-PAK1区及UKK区突变体。利用模拟残基突变技术预测了突变体的结构变化,分析了突变后t-PAK1区及UKK区与赖氨酸亲和力的变化,初步在理论上肯定了设计方案的合理性。

简介：由于国际上对转基因产品的安全性存在较大争议,因此对没有加施标签予以声明的情况下大量进入中国市场的转基因产品进行检测就显得十分迫切且意义重大.本研究以进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆为材料,通过比较分析外源的CP4-EPSPS基因的核苷酸序列和表达的氨基酸序列,设计出两对不同的引物,采用PCR方法分别对转基因油菜籽和大豆中外源的CP4-EPSPS基因进行了检测.

简介：目的：构建带Myc标签的LC3B—PLA2基因的真核表达质粒，获得LC3B—PLA2融合蛋白，并应用LC3B—PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，PCR扩增获得LCgB序列，与PLA2G]O拼接后插入pCMV—Myc载体，用构建的重组质粒转染HEK293T细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，用LC3B—PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果：菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功，Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达，LC3B—PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论：构建了pCMV—Myc—LC3B—PLA2真核表达质粒，LC3B—PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要，为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

简介：目的：探讨错配修复基因1（hMLH1）、错配修复基因2（hMSH2）启动子区甲基化与子宫内膜异位症的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法检测23例子宫内膜异位症组织和20例正常子宫内膜中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果：hMLH1基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为39％（9/23），在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5％（1／20），两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；hMSH2基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为8％（2／23），在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5％（1／20），两者比较，无明显差异（P〉0．05）。结论：hMLH1基因启动子区甲基化可能与子宫内膜异位症发病有关；hMSH2基因启动子区甲基化与子宫内膜异位症之间不存在显著联系。

简介：绿脓杆菌是烧伤及外科手术感染的主要病原菌之一,而绿脓杆菌外毒素A(PEA)是该菌的最主要的毒力因子之一,极微量的PEA便可引起肝、肾等组织细胞死亡,进而导致肝、肾等多器官功能衰竭,这是临床上绿脓杆菌感染后高死亡率的主要原因。同时,PEA还严重影响创口的愈合。目前临床上对于绿脓杆菌感染的控制以及对PEA毒血症的防治尚无有效的方法与手段。本实验是利用基因工程手段克隆表

简介：HISCL-5000高敏发光全自动免疫分析仪以化学发光酶免疫测定法为工作原理,用碱性磷酸酶标记检测化学发光,采用目前最快速、最灵敏的化学发光底物CDP-Star,曝光时间只需15～60s。反应在液体中进行,实现了短时间内的高效率反应,反应时间可短至17min。我们根据美国临床和实验室标准化协会颁布的EP系列文件,对HISCL-5000分析仪的分析性能进行评价,对相关研究进展做一综述。

简介：选择60Coγ射线5Gy照射后第7天的人胚肺成纤维细胞(HELF),采用聚阳离子脂质体LipofectAMINE介导的基因转染法将人TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo-TGFβ1和pMAMneo-AntiTGFβ1转入HELF,转染细胞经G418抗性筛选出来.提取培养细胞的染色体DNA,用DNA斑点印迹分析表明,它们能与neo基因特异杂交.用neo基因特异的PCR引物能从转染细胞扩增出276bp的阳性片段,而未转染细胞则扩增阴性.

简介：目的：构建GFE-1多吠与重组人肿瘤坏死因子d（rmhTNF一仅）融合蛋白（GFE-1-rmhTNF），研究该融合蛋白的体外活性和体内分布。方法：利用基因工程方法，将人工合成的编码GFE—l的寡核苷酸片段连接在rmhTNF—d序列的3’端，转入大肠杆菌中诱导表达，采用Q—SepharoseFF阴离子层析柱和SP—SepharoseFF阳离子层析柱纯化蛋白，SDS—PAGE和Western印迹鉴定，测定该融合蛋白的体外活性，观察其在小鼠体内的分布情况。结果：构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF，并在大肠杆菌中获得高效表达。体外活性实验显示，GFE-1-rⅢhTNF对L929细胞有明显的杀伤活性；体内分布实验证实，GFE-I-rmhTNF在小鼠肺组织的富集远高于肝肾组织。结论：构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF．，可显著杀伤L929细胞并特异性富集于小鼠肺组织。

简介：与许多在细胞浆内复制的RNA病毒不同，流感病毒的复制及转录都在细胞核内进行。流感病毒感染细胞进入细胞浆后，经病毒脱壳将病毒核糖核蛋白体复合物（vRNP）释放到细胞浆。vRNP含有病毒的RNA基因和碱性聚合酶1（PB1）、碱性聚合酶2（PB2）、酸性聚合酶（PA）及核蛋白（NP）。vRNP被主动运送到细胞核内，开始病毒基因组的复制和转录。流感病毒感染细胞的晚期，在细胞浆中新合成的PB1、PB2、PA及NP蛋白也需要进入细胞核，参与新的vRNP的装配。我们简要介绍有关流感病毒vRNP和新合成的PB1、PB2、PA及NP蛋白进入细胞核的机制。

简介：腺相关病毒(AAV,AdenoassociatedVirus)是一类线状单股DNA的微小病毒。腺相关病毒因共具有定点整合(19q13qter)及非病原性等特点而在基因转移与治疗中可望作为较为理想的载体。其在宿主染色体DNA上的整合需要辅助病毒共转染。根据Cavalier-Smith的线状SSDNA分子复制模式,即复制过程中3′OH端作为引物在DNA聚合酶的作用下合成另一姊妹股DNA分子,然后共价地连接到亲代未折叠的5′端回纹末端而进行DNA复制。本文

简介：HLA-B27阳性患者人群中,内质网氨基肽酶1（ERAP1）基因多态性与强直性脊柱炎（AS）密切相关。内质网中,ERAP1可有效剪切抗原肽,使其成为适合HLA-Ⅰ类分子提呈的寡肽。ERAP1基因多态性决定N端抗原肽修剪功能的正常与否以及HLA-B27分子的稳定表达。细胞水平的研究表明,不同ERAP1等位基因组合对于抗原肽底物的修剪能力决定了B27分子能否在细胞表面稳定表达。但是,功能型与功能异常型ERAP1如何影响HLA-B27抗原肽加工、B27稳定表达,以及如何影响AS疾病进程和免疫病理学改变等均未得到阐明。