简介：分泌途径主要由内膜系统构成,内质网和高尔基体对于分泌蛋白的运输及定位具有重要作用.分泌蛋白的运输包括顺行途径和逆行途径.蛋白质通过质流和受体介导的途径运输到小泡中.在植物中,分泌蛋白的运输主要通过小泡和相连的小管来完成.分子伴侣和质量控制不仅能优化新合成蛋白的折叠和组装,而且去除了有折叠缺陷的蛋白.分泌蛋白的定位需要特定的信号肽,而高尔基体固有蛋白以依赖跨膜长度的方式,沿着分泌途径的细胞器分布.本文对植物表达分泌蛋白的分泌途径及定位、相关的分子伴侣和质量控制进行了综述.

简介：引起人泌尿道感染的大肠杆菌(UPEC)的α-溶血素分泌系统属于Ⅰ型分泌系统，能够分泌一种RTX毒素蛋白-α-溶血素。近年来α-溶血素分泌系统的应用日益广泛，特别是在减毒活载体疫苗中呈递外源抗原。本文分析了大肠杆菌α-溶血素分泌系统的遗传特性，详细介绍了其基因的表达调控，为构建更加有效的分泌型载体提供了理论基础。

简介：目的：研制高效分泌表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株。方法与结果：将优化设计的枯草芽孢杆菌MA139β-甘露聚糖酶基因用EcoRI／XbaI双酶切，克隆到诱导型表达载体pPICzoLA中α因子信号肽编码序列的下游，转化大肠杆菌筛选重组质粒，转化毕赤酵母X-33感受态细胞，经Zeocin筛选，获得重组表达菌株X-33／mann。将重组菌株在10L全自动发酵罐中进行高密度发酵培养，甲醇诱导72h发酵活力达到2100U／mL。重组甘露聚糖酶的最适催化温度为40℃，最适催化pH值为6．0。结论：枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达，具有开发作为饲料添加剂的潜能。

简介：目的：利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）纤突糖蛋白S。方法：根据GenBank中猪TGEV纤突糖蛋白S全基因设计一对引物，并在5’引物和3’引物中引入EcoRI、NotI酶切位点，2。2kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体，再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接，SalI线性化重组穿梭质粒pPIC9k—S，电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞，G418筛选鉴定阳性重组子，经甲醇诱导，SDS—PAGE检测诱导后上清。结果：对pPIC9k—S重组酵母表达载体的测序证实已成功克隆了猪TGEVS基因；重组酵母菌诱导表达后，SDS-PAGE检测结果显示表达产物的相对分子质量为为82×10^3，且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外。结论：利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒（河北分离株）纤突糖蛋白S。

简介：目的：构建GFE-1多吠与重组人肿瘤坏死因子d（rmhTNF一仅）融合蛋白（GFE-1-rmhTNF），研究该融合蛋白的体外活性和体内分布。方法：利用基因工程方法，将人工合成的编码GFE—l的寡核苷酸片段连接在rmhTNF—d序列的3’端，转入大肠杆菌中诱导表达，采用Q—SepharoseFF阴离子层析柱和SP—SepharoseFF阳离子层析柱纯化蛋白，SDS—PAGE和Western印迹鉴定，测定该融合蛋白的体外活性，观察其在小鼠体内的分布情况。结果：构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF，并在大肠杆菌中获得高效表达。体外活性实验显示，GFE-1-rⅢhTNF对L929细胞有明显的杀伤活性；体内分布实验证实，GFE-I-rmhTNF在小鼠肺组织的富集远高于肝肾组织。结论：构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF．，可显著杀伤L929细胞并特异性富集于小鼠肺组织。

简介：目的：融合表达表皮生长因子受体（EGFR）胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法：通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果：经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5nmol/L。结论：利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。