简介:摘要目的探讨circ-PRKDC对肺癌细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法培养正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系NCI-H1299、NCI-H2170、NCI-H1975。将NCI-H1299细胞分为si-NC、si-PRKDC、pcDNA-NC、pcDNA-PRKDC、miR-NC、miR-505-3p、anti-miR-NC、anti-miR-505-3p、si-PRKDC+anti-miR-NC、si-PRKDC+anti-miR-505-3p组。RT-qPCR检测circ-PRKDC和miR-505-3p的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;平板克隆形成实验检测细胞放射敏感性;双荧光素酶报告实验检测circ-PRKDC和miR-505-3p的靶向关系。结果与BEAS-2B细胞相比,NCI-H1299、NCI-H2170、NCI-H1975细胞circ-PRKDC表达水平升高(3.65、3.10、2.67∶1.00,P<0.05),miR-505-3p表达水平降低(0.42、0.50、0.54∶1.02,P<0.05)。低表达circ-PRKDC后CyclinD1表达水平降低(0.42∶0.81,P<0.05),Cleaved-caspase-3和γ-H2AX表达水平升高[(0.71∶0.33,P<0.05)和(0.89∶0.465),P<0.05];细胞A值降低(0.413∶0.839,P<0.05);细胞凋亡率升高(20.35∶6.21,P<0.05);细胞存活分数降低(P<0.05);β-catenin表达水平降低(0.35∶0.73,P<0.05)。miR-505-3p高表达后CyclinD1表达水平降低(0.34∶0.83,P<0.05),Cleaved-caspase-3(0.65∶0.32,P<0.05)和γ-H2AX (0.96∶0.45,P<0.05)表达水平升高,细胞A值降低(0.386∶0.851,P<0.05),细胞凋亡率升高(16.38∶6.20,P<0.05),细胞存活分数降低(P<0.05)。与miR-NC比较,miR-505-3p组转染circ-PRKDC野生型报告质粒的细胞荧光素酶活性降低(0.44∶1.00,P<0.05)。下调miR-505-3p能逆转circ-PRKDC低表达对NCI-H1299细胞增殖、凋亡和放射敏感性以及β-catenin表达的影响。结论低表达circ-PRKDC可能通过上调miR-505-3p抑制肺癌细胞增殖,促进凋亡以及增强细胞的放射敏感性,且其可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。
简介:摘要目的探索SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征分析及功能预测。方法探究了hsa_circ_0004777的基本特征,包括验证反向剪接位点,RNase R消化实验,细胞内RNA的胞质胞核分布,蛋白翻译潜能的预测。此外,使用生物信息学方法,预测hsa_circ_0004777结合的微小RNA(microRNA,miRNA)以及miRNA的靶基因,并且构建了circRNA-miRNA-mRNA的网络图。再对预测到的miRNA的靶基因进行基因本体论(gene ontology,GO)功能富集分析和信号通路富集分析。结果hsa_circ_0004777的形成是由SOX13基因第4号外显子反向剪接至第2号外显子,hsa_circ_0004777能抵抗RNase R处理,主要分布在细胞质。生信预测hsa_circ_0004777通过作为hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-637、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-384、hsa-miR-660-5p、hsa-miR-942-5p、hsa-miR-331-3p这8个miRNA的海绵来发挥作用;hsa_circ_0004777潜在结合的8个miRNA的靶基因在对聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、DNA模板、骨骼肌细胞分化等生物过程显著富集。结论成功探索了SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征,并且从circRNA-miRNA-mRNA网络图中预测了它的功能,为进一步研究hsa_circ_0004777奠定了基础,也为更深入研究SOX13提供了思路。
简介:目的旨在研究来源于抗病毒基因HERC5的新型环状RNAhsa_circ_0001426的特征,并探索该环状RNA真核过表达载体的构建和鉴定。方法从反向剪切位点的验证、蛋白翻译的潜能、对RNaseR处理的抵抗性、在细胞内的胞质胞核分布情况四个方面来研究hsa_circ_0001426的特征。此外,还利用环状RNA克隆构建试剂盒来构建hsa_circ_0001426的过表达载体,并验证其表达效果。结果hsa_circ_0001426是由HERC5基因第18号外显子反向剪切至第12号外显子形成,其序列中包含一条可翻译318个氨基酸的开放阅读框,其抵抗RnaseR的处理,主要分布于细胞质。针对该环状RNA的过表达载体构建成功,其在转染HEK293T细胞后48h的表达量最高。结论首次成功分析了抗病毒基因HERC5的新型环状RNAhsa_circ_0001426的特征,并利用试剂盒首次成功构建了hsa_circ_0001426的真核过表达载体,并可在细胞中高效表达;为深入研究hsa_circ_0001426的特征和功能奠定基础,并进一步扩充了HERC5基因的相关研究。
简介:摘要目的通过检测分析胃癌细胞中circ_0009910表达,初步探讨其在胃癌细胞中的作用机制。方法用qRT-PCR检测胃癌细胞系BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910表达水平,在BGC823、AGS细胞中采用circ_0009910 siRNA转染敲降circ_0009910,验证转染效果;在circ_0009910敲降的BGC823、AGS细胞中,用MTT法检测细胞增殖、平板法检测集落形成、Transwell检测迁移和侵袭、western-blotting检测上皮间质转化(EMT),采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910相对表达水平为(7.238±0.895)、(5.023±0.786)、(4.184±0.356)、(8.561±1.026)、(3.478±0.301),较正常胃癌显著升高(P<0.01),siRNA转染敲降circ_0009910后,BGC823、AGS细胞活力、集落形成数目、迁移和侵袭能力与对照组相比均明显降低(P<0.01),N-cadherin、Snail蛋白的相对表达降低,而E-cadherin表达增加。结论circ_0009910在胃癌细胞中高表达,可促进胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭及EMT。
简介:无
简介:摘要目的探讨circ_0000253作为骨肉瘤(osteosarcoma,OS)诊断和预后生物标志物的价值。方法GEO数据库筛选OS中差异表达的circRNAs,预测和circRNA存在结合位点的微小RNA(MicroRNA,miRNA)进一步构建ceRNA网络,GO和KEGG分析筛选靶基因。qRT-PCR检测112例OS患者癌组织和癌旁组织、OS细胞及正常成骨细胞中circ_0000253、miR-578及TGFβ2的表达水平。分析circ_0000253对OS的诊断价值及其对预后的影响,探讨circ_0000253表达水平与患者临床病理参数的关系。进一步干预细胞中circ_0000253和miR-578的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT实验检测细胞增殖活力。结果OS组织中circ_0000253表达水平显著高于癌旁组织(t=11.17, P<0.001)。circ_0000253表达与Enneking分期和组织分级和远处转移显著相关(均P<0.05)。circ_0000253可作为OS的一个有效诊断指标(AUC=0.84,P<0.001)且高表达circ_0000253的患者预后较差。Circ_0000253可能通过miR-578/TGFβ2网络对OS进行调控。敲减circ_0000253能降低细胞增殖活力,诱导细胞凋亡,而该作用能被miR-578 inhibitor部分挽救(均P<0.05)。结论circ_0000253可作为OS的新的诊断和预后生物标志物,对OS的靶向治疗也有积极意义。
简介:摘要目的探讨胃癌患者血清hsa_circ_0000437表达水平及其临床价值。方法选取2018年10月至2020年12月南通大学附属医院经病理确诊的80例胃癌患者(男57例,女23例);50例胃良性疾病患者(男28例,女22例)及80名健康对照者(男46例,女34例)。收集血清样本,同时收集上述胃癌患者中35例患者手术后血清样本。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测血清hsa_circ_0000437表达水平。采用Mann-Whitney U检验比较不同组间、胃癌患者不同分期及手术前后血清hsa_circ_0000437水平的差异,采用χ²检验分析胃癌患者血清hsa_circ_0000437水平与其临床病理特征之间的相关性。化学发光法检测癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原724(CA724)。运用受试者工作特征(ROC)曲线及其曲线下面积(AUC)评估hsa_circ_0000437、CEA、CA199以及CA724的诊断效能。Kaplan-Meier生存曲线分析hsa_circ_0000437表达水平与患者预后的关系。结果胃癌、胃良性疾病患者和健康对照者血清hsa_circ_0000437表达水平分别为2.252(1.235,4.765)、1.598(1.139,1.982)及1.000(0.818,1.385),胃癌患者高于胃良性疾病和健康对照者(P均<0.001),胃良性疾病患者高于健康对照者(P<0.001)。胃癌患者术后血清hsa_circ_0000437的表达水平低于手术前(P<0.001)。胃癌患者血清hsa_circ_0000437的表达水平在肿瘤T分期、N分期、肿瘤分化程度差异均有统计学意义(P=0.043、P=0.025和P=0.013)。胃癌患者区别于健康对照者,hsa_circ_0000437、CEA、CA199和CA724 AUC分别为0.863、0.619、657和0.608,4项指标联合检测AUC为0.892,敏感度高达97.5%(78/80)。Kaplan-Meier生存曲线显示血清hsa_circ_0000437高表达患者的总体生存率明显低于血清hsa_circ_0000437低表达患者(P=0.008)。结论hsa_circ_0000437可能是胃癌辅助诊断和预后判断的一个生物学指标。
简介:摘要:遗传学研究生物的遗传、变异及其规律;人类对遗传的研究从性状开始的,遗传因子的发现到证明遗传密码的存在并破译遗传密码的过程是人们认识遗传的物质基础并揭示遗传规律的过程,在此过程当中遗传基因这个抽象的概念在思维上和实质上逐渐接近染色体、DNA;然后科学家们证明基因是有遗传效应的DNA的片段,从此基因不再是抽象的概念,以后人们又发现性状的表达离不开蛋白质(酶)合成,于是科学家们推测并证明基因通过指导蛋白质的合成而控制生物的性状,于是最终孟德尔的假设得到了科学解释。人民对遗传学的研究是实质上揭示基因表达的过程,这是生物学史上的重大发现。
简介:目的比较HBVS基因与HCVC基因真核表达质粒融合基因免疫与联合基因免疫的效果,为HBV和HCV融合基因疫苗研究奠定基础。方法将同时含HBVS基因与HCVC基因的真核表达质粒SCpcDNA3.1、含HBVS基因真核表达质粒SpcDNA3.1、含HCVC基因真核表达质粒CpcDNA3.1分别免疫小鼠;将SpcDNA3.1+CpcDNA3.1联合免疫小鼠。ELISA法检测血清抗HBs和抗HCV。结果无论是抗HBs和抗HCV阳转出现的时间、阳转率和体液免疫应答强度,融合基因免疫都优于联合基因免疫:融合基因免疫的抗HBs的应答强度低于SpcDNA3.1质粒的免疫,抗HBc的应答强度高于CpcDNA3.1质粒的免疫。结论HCVC基因或其表达产物对HBVS基因或抗原的表达和提呈有抑制作用;HCVC基因与HBVS基因相融合,更有利于HCV核心蛋白的提呈。
简介:摘要目的观察骨肉瘤组织和细胞株中环状RNA circ_0000880表达,及其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤的标本共16例,采用circRNA高通量测序技术检测表达差异的circRNA。提取骨肉瘤及其癌旁组织总RNA,依据circ_0000880序列,设计divergent primer,扩增包含backsplice junction区域片段,随后连接入pGM-T载体进行测序鉴定。采用SYBR Green荧光定量PCR,分别检测骨肉瘤及其癌旁组织,骨肉瘤细胞MG63、SAOS-2、U2OS及正常人成骨细胞hFOB1.19中circ_0000880的表达水平。将circ_0000880小干扰RNA(siRNA)和circ_0000880 NC慢病毒转染至骨肉瘤细胞后检测细胞中circ_0000880的表达水平,并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及克隆形成实验检测对骨肉瘤细胞增殖的影响。两样本两组间比较用t检验。结果采用circRNA高通量测序技术检测结果显示骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880的表达显著上调,并通过测序鉴定证实circ_0000880在骨肉瘤组织中存在、且为环状RNA。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示circ_0000880在骨肉瘤组织中的表达量(2.032±0.165)显著高于其癌旁组织(1.105±0.155,t=16.393,P<0.05)。circ_000088在骨肉瘤细胞系MG63(2.252±0.140)、SAOS-2(2.134±0.176)、U2OS(2.011±0.226)中表达量均显著高于正常人成骨细胞(1.000±0.092,F=71.299,P<0.05)。转染circ_0000880 siRNA的MG63细胞中circ_0000880表达量明显下降(0.646±0.058),转染circ_0000880 NC的MG63细胞中circ_0000880表达水平(1.005±0.121)与空白组(1.000±0.201)比较差异无统计学意义(F=17.977,P<0.05)。CCK-8及克隆形成试验结果显示,与空白组和阴性对照组比较,转染circ_0000880 siRNA的骨肉瘤细胞增殖能力显著受到抑制。结论骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880表达显著上调,敲低circ_0000880表达可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖能力。
简介:摘要目的探讨血浆外泌体环状RNA(circRNA)hsa_circ_0022417在胃癌中的表达及其临床意义。方法选取临床明确诊断胃癌初诊患者60例,慢性胃炎患者30例(疾病对照组)和同期健康体检者30名(健康对照组),分别检测各组血浆外泌体中hsa_circ_0022417的表达水平以及血清CEA、CA19-9的表达。采用ROC曲线评价各项指标诊断胃癌效能。分析血浆外泌体hsa_circ_0022417的表达与胃癌患者临床病理参数的关系。结果胃癌组血浆外泌体hsa_circ_0022417的相对表达水平高于慢性胃炎组和健康对照组,差异有统计学意义[(1.89±0.15)比(0.93±0.08)比(0.75±0.07),F=9.96,P<0.05]。胃癌组织中hsa_circ_0022417的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义[(2.78±0.24)比(1.18±0.11),t=6.08,P<0.05],并且其表达水平与血浆外泌体表达水平呈正相关(r=0.72,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆外泌体hsa_circ_0022417、血清CEA、CA19-9单指标诊断胃癌的曲线下面积分别为0.79、0.68和0.66,3种指标联合检测诊断胃癌的曲线下面积为0.86。血浆外泌体hsa_circ_0022417的相对表达量与肿瘤大小(χ2=6.42,P<0.05)、分化程度(χ2=5.83,P<0.05)、临床分期(χ2=7.14,P<0.01)及淋巴结转移(χ2=5.17,P<0.05)均有关。结论外泌体hsa_circ_0022417在胃癌患者血浆中高表达,对临床胃癌辅助诊断和早期筛查具有重要意义。
简介:摘要目的探讨circ_0000267对胃癌细胞体外增殖、迁移、侵袭、凋亡及体内生长的影响。方法体外构建敲低circ_0000267和过表达miR-661的胃癌细胞株,采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞中circ_0000267、miR-661和NGAL mRNA表达,采用克隆形成、Transwell小室和流式细胞仪实验检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡,Western blot检测相关蛋白表达,通过在线预测结合双荧光素酶实验和RNA pull down实验验证circ_0000267、miR-661和NGAL之间的靶向关系,裸鼠成瘤实验观察敲除circ_0000267对胃癌细胞体内生长的影响。结果circ_0000267在胃癌组织和细胞中高表达;敲低circ_0000267能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;circ_0000267靶向miR-661,抑制miR-661能够部分逆转敲低circ_0000267对胃癌细胞的影响;NGAL是miR-661的靶基因,过表达miR-661通过抑制NGAL调控胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡;敲低circ_0000267靶向miR-661抑制胃癌细胞中NGAL的表达;敲低circ_0000267抑制胃癌细胞的体内生长。结论circ_0000267可能通过调控miR-661/NGAL的表达调控胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡,并抑制肿瘤在体内生长。
简介:摘要目的评估血浆外泌体源环状RNA(circRNA)hsa_circ_0064910在胃癌中的诊断效能,分析其与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法回顾性研究,纳入2019年10月至2020年12月在河南大学第一附属医院入院治疗的60例胃癌患者,30例慢性胃炎患者(疾病对照组)以及同期健康体检的30名健康者(健康对照组)作为研究对象。收集胃癌患者的一般资料,包括肿瘤大小、分化程度、TNM 分期、有无淋巴结转移等。临床治疗前收集患者血液标本,逆转录聚合酶链反应分别检测3组对象血浆外泌体中hsa_circ_0064910的表达水平,电化学发光法检测同一研究对象血清CEA、CA19-9的表达水平。利用受试者工作特征(ROC)曲线评价hsa_circ_0064910单独诊断及其与CEA、CA19-9联合检测在胃癌患者中的诊断效能。同时分析血浆外泌体hsa_circ_0064910在胃癌患者术前术后的表达差异,以及与胃癌患者临床病理特征的关系。结果胃癌患者血浆外泌体中hsa_circ_0064910的相对表达水平(0.97±0.12)高于慢性胃炎患者(0.47±0.06)(t =2.97,P<0.001)及健康对照组(0.43±0.05)(t =3.23,P<0.001)。ROC曲线分析显示hsa_circ_0064910单指标诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.778,联合CEA、CA19-9指标诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.841,高于CEA(AUC=0.673)、CA19-9(AUC=0.653)单指标及联合检测的诊断效能。临床资料分析表明血浆外泌体hsa_circ_0064910的相对表达量与肿瘤大小(χ²=7.545,P<0.01)、临床分期(χ²=4.571,P<0.05)及淋巴结转移(χ²=6.907,P<0.01)等密切相关。胃癌患者术后血浆外泌体hsa_circ_0064910的相对表达量明显下降(1.21±0.21比0.62±0.11,t =2.463,P<0.01)。结论外泌体源hsa_circ_0064910在术前胃癌患者血浆中相对表达量较高,有望成为胃癌筛查新型无创分子标志物。