简介：摘要目的探讨川乌提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其机制。方法分别用2.5 g/L(AR 2.5 g/L组)、5.0 g/L(AR 5.0 g/L组)和7.5 g/L(AR 7.5 g/L组)川乌提取物处理HUVECs(购自中国科学院上海细胞库)，对照组(Con)未行川乌提取物处理。将微小RNA(miRNA，miR)-NC(miR-NC组)、miR-589(miR-589组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)和anti-miR-589(anti-miR-589组)分别转染至HUVECs中；将anti-miR-NC、anti-miR-589、pcDNA3.1、pcDNA3.1-蛋白激酶B1(Akt1)转染至HUVECs细胞后用5.0 g/L的川乌提取物处理，分别标记为AR 5.0 g/L＋anti-miR-NC组、AR 5.0 g/L＋anti-miR-589组、AR 5.0 g/L＋pcDNA3.1组和AR 5.0 g/L＋pcDNA3.1-Akt1组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-589的表达水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-589和Akt1的靶向关系。两组间比较采用t检验。多组间比较采用SNK-q检验。结果不同浓度川乌提取物组HUVECs细胞增殖活性、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和miR-589表达均显著低于Con组(F＝107.822、86.321、136.234，P<0.05)，凋亡率、p21和bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达显著高于Con组(F＝95.875、124.365、107.541，P<0.05)。miR-589组HUVECs增殖活性、Cyclin D1和bcl-2蛋白表达显著高于miR-NC组(t＝15.358、31.109、8.971，P<0.05)，凋亡率、p21和bax蛋白表达显著低于miR-NC组(t＝23.124、21.175、11.364，P<0.05)，抑制miR-589表达可逆转川乌提取物对HUVECs增殖和凋亡的作用。miR-589可靶向调控Akt1的表达。结论川乌提取物可抑制HUVECs增殖并促进细胞凋亡，可能与调控miR-589/Akt1有关。

简介：摘要目的观察低氧条件下HIF-1α/VEGF/Notch信号通路在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成中的作用。方法将HUVEC进行常氧和低氧[二氯化钴（CoCl2），200 μmol/L]诱导，再将常氧和低氧处理的HUVEC应用Notch1信号通路的抑制剂DAPT （30 μmol/L，24 h）和激活剂JAG-1 （30 μmol/L，24 h）干预。通过体外小管形成实验观察低氧对HUVEC血管生成能力的影响。应用RT-PCR和Western blot检测HUVEC中低氧诱导因子-1α （HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和Notch1信号分子（Notch1、Dell4和JAG-1）的mRNA和蛋白表达。通过Transwell迁移实验和伤口愈合实验观察低氧、DAPT、JAG-1对HUVEC迁移能力的影响。应用MTT法检测低氧及Notch1对HUVEC增殖的影响。两组间比较采用t检验，采用析因设计方差分析低氧和DAPT以及低氧和JAG-1对HUVEC迁移能力、距离、小管形成能力和细胞增殖的交互作用。结果与常氧组比较，低氧组小管总长[（8.18±0.62）mm比（15.43±1.32）mm]增高，差异具有统计学意义（P < 0.05）。与常氧组比较，低氧组的HIF-1α、VEGF、MMP-9、Notch1、Dell4和JAG-1的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量（1.01±0.03比4.43±0.35，1.02±0.03比3.55±0.28，0.98±0.04比3.24±0.25，1.01±0.03比3.22±0.25，0.99±0.02比2.89±0.22，1.02±0.04比2.43±0.19，0.98±0.01比3.13±0.24，0.98±0.02比2.67±0.21，0.97±0.03比2.45±0.19，1.01±0.03比2.44±0.19，1.00±0.04比2.30±0.18，1.03±0.05比2.27±0.18）均升高，差异有统计学意义（P均< 0.05）。Transwell迁移实验和伤口愈合实验显示，低氧条件下，DAPT干预使HUVEC的迁移能力降低，JAG-1干预使HUVEC的迁移能力升高（P均< 0.05）。小管形成和MTT法测定显示，低氧条件下，DAPT干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力降低，JAG-1干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力升高（P均< 0.05）。析因设计的方差分析结果显示，低氧和JAG-1对迁移细胞数、小管形成和细胞增殖能力交互作用具有协同作用（P < 0.05）。结论低氧可通过激活HIF-1α/VEGF/Notch1信号通路提高HUVEC的血管生成能力、迁移能力和细胞增殖能力。

简介：摘要目的探讨自噬是否参与调节亚砷酸钠诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能失调。方法分离培养人原代脐静脉内皮细胞，不同剂量亚砷酸钠处理24 h，分别为0（对照）、2、5、10、20、30、50 μmol/L，CCK8法检测细胞活力。根据细胞活力结果确定后续实验染砷剂量，流式细胞术检测细胞内一氧化氮（NO）含量（亚砷酸钠处理4 h），蛋白免疫印迹法（Western blot）检测自噬标志蛋白LC3表达（亚砷酸钠处理0、6、12、24 h），电镜检测自噬体（亚砷酸钠处理12 h）。同时，以0.1 mmol/L 3-MA（自噬抑制剂）预处理人原代脐静脉内皮细胞2 h，然后30 μmol/L亚砷酸钠诱导，与单独30 μmol/L亚砷酸钠组比较上述检测指标。结果成功分离培养人原代脐静脉内皮细胞。与对照组[细胞活力：（99.97 ± 5.33）%，NO含量：42 048.34 ± 789.61]比较，30 μmol/L亚砷酸钠组细胞活力[（73.00 ± 0.86）%]显著下降，细胞内NO含量（23 353.97 ± 971.85）显著降低，差异有统计学意义（P均< 0.01）。30 μmol/L亚砷酸钠分别处理6、12和24 h，LC3Ⅱ表达水平（5.782 ± 2.789、9.692 ± 2.222、5.573 ± 2.941）明显高于处理0 h（1.000 ± 0.383，P均< 0.05），其中12 h时LC3Ⅱ表达水平最高。30 μmol/L亚砷酸钠处理12 h，电镜下观察细胞内自噬体明显多于对照组。与单独30 μmol/L亚砷酸钠组[细胞活力：（68.78 ± 1.55）%；LC3Ⅱ表达水平：5.680 ± 0.545；NO含量：13 025.78 ± 962.61]比较，3-MA预处理组细胞活力[（79.54 ± 4.99）%]升高，LC3Ⅱ表达水平（3.956 ± 0.398）下降，差异有统计学意义（P均< 0.05）；细胞内NO含量（13 988.51 ± 1 671.07）差异无统计学意义（P > 0.05）。结论自噬参与砷诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能失调。

简介：摘要目的探讨脑源性微囊泡(BDMVs)对脐静脉内皮细胞骨架的影响。方法体外制备BDMVs，并予透射电镜观察及粒径检测。将PKH26荧光染料标记的BDMVs与脐静脉内皮细胞共培养0.5 h、1 h、2 h后，应用流式细胞术检测不同时间点的脐静脉内皮细胞吞噬BDMVs情况。将体外常规培养的脐静脉内皮细胞分为对照组、BDMVs组(加入终浓度1.5×107/mL的BDMVs处理细胞)及尼莫地平组[予2 μg尼莫地平(0.2 mg/mL)预处理10 min后加入终浓度1.5×107/mL的BDMVs处理细胞]，应用激光共聚焦显微镜观察罗丹明标记鬼笔环肽染色后各组脐静脉内皮细胞中纤维型肌动蛋白的荧光强度及应力纤维数目。结果透射电镜下可见体外制备的BDMVs具有完整的膜结构，粒径范围为100~1000 nm。流式细胞术检测显示，吞噬BDMVs的脐静脉内皮细胞比例随培养时间的延长呈时间依赖性升高(0.5 h：22.7%±1.2%；1 h：52.3%±1.3%；2 h：71.6%±1.9%)，各时间点间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察显示，与对照组相比，BDMVs组中纤维型肌动蛋白的荧光强度明显升高且应力纤维数目明显增多增粗；而与BDMVs组相比，尼莫地平组中纤维型肌动蛋白的荧光强度明显降低且应力纤维数目明显减少变细。结论脐静脉内皮细胞吞噬BDMVs的作用随时间延长而增强，且吞噬BDMVs后可导致细胞骨架重构，而尼莫地平可部分阻断该作用。

简介：摘要目的探究新型自组装多肽水凝胶RATEA16支架对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）增殖及其载血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）促进血管形成的作用。方法制备RATEA16水凝胶，检测其可注射性、微观结构、降解性能及生物相容性等特性；与HUVEC体外三维培养，检测细胞形态及增殖情况；将HUVEC细胞与装载VEGF的RATEA16支架体外三维共培养，倒置显微镜下观察小管形成并通过实时荧光定量PCR检测VEGF-A、血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）和血小板内皮细胞黏附分子1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1，PECAM-1）基因的表达，评估载VEGF支架体系对HUVEC分化的影响，并与HUVEC单独培养的阴性对照组进行比较。结果RATEA16溶液在调节pH值达中性后5 min完成溶胶-凝胶转变；该凝胶可从注射器中轻松推出，具备可注射性；扫描电子显微镜下呈多孔及相互连接的内部结构，支架孔隙率为（67.3±9.4）%；在体外降解4周时剩余质量百分比仍为（82.354±0.006）%；HUVEC在RATEA16水凝胶浸提液中培养24 h后生长良好，与对照组相比HUVEC细胞活力差异无统计学意义（P>0.05）；HUVEC在该水凝胶中三维培养时呈球形，且在14 d内呈持续增殖活力；装载VEGF的RATEA16支架与HUVEC体外三维培养可观察到血管样结构形成，VEGF-A和MMP-9表达是阴性对照组的1.5~2.0倍，vWF表达是阴性对照组的10倍左右，PECAM-1表达是阴性对照组的55倍左右，与阴性对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。结论RATEA16水凝胶具有简便的凝胶化过程、良好的生物相容性、较慢的降解速率及可注射性；HUVEC可在RATEA16支架中生长和增殖；载VEGF的RATEA16支架体系可促进HUVEC在体外成血管分化。

简介：摘要目的探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化（AS）模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。方法本实验共分为4个实验；实验1：用100 μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组，正常培养的细胞作为对照组；实验2：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理，记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组；实验3：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中，记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组；实验4：将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理，记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平；蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （P21）、cleaved caspase 3蛋白表达；MTT检测细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA法检测白细胞介素-1 （IL-1）、白细胞介素-6 （IL-6）水平；荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果与对照组比较，ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.23±0.02比1.02±0.10），细胞增殖率[（47.83±5.01）﹪比（100.06±10.20）﹪]均降低，细胞凋亡率[（26.81±2.47）﹪比（8.23±0.80）﹪]、P21 （0.82±0.08比0.20±0.02）、cleaved caspase 3 （0.67±0.06比0.14±0.01）、IL-1[（792.34±59.37）ng/L比（326.14±34.59） ng/ L]和IL-6表达水平[（53.67±4.65）ng/L比（19.25±2.11）ng/L]均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较，ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.87±0.09比0.22±0.02）、细胞增殖率[（89.94±8.34）﹪比（48.21±4.86）﹪]均升高，细胞凋亡率[（12.33±1.18）﹪比（26.83±2.48）﹪]、P21 （0.33±0.03比0.81±0.08）、cleaved caspase 3 （0.24±0.02比0.69±0.06）、IL-1[ （446.25±46.84）ng/L比（802.21±60.18）ng/L]和IL-6表达水平[（25.64±2.65）ng/L比（55.21±5.10）ng/L]均降低，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较，ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平（2.14±0.21比1.05±0.10）、细胞凋亡率[（23.31±2.33）﹪比（13.75±1.44）﹪]、IL-1水平[（684.26±62.38）ng/L比（451.21±43.58）ng/L]、IL-6水平[（41.29±4.37）ng/L比（26.11±2.39）ng/L]均升高，细胞增殖率[（53.67±5.46）﹪比（90.21±9.16）﹪]降低，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点，荧光素酶报告实验显示，与miR-NC组比较，miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低（0.33±0.03比1.01±0.10，P < 0.05），而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）；与anti-miR-NC组比较，anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高（2.29±0.21比1.00±0.10，P < 0.05），而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）。结论过表达HOXA-AS2促进细胞增殖，抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放，其机制可能与miR-17有关。

简介：摘要目的探讨甲状腺素（T4）及丙硫氧嘧啶（PTU）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC细胞）一氧化氮合酶表达的影响。方法体外培养HUVEC细胞，实验分为6组，分别为对照组（未加T4及PTU），10-9、10-7、10-4 mol/L T4组，PTU组（5 μg/ml PTU），10-4 mol/L T4 + PTU组，作用时间为24 h。采用CCK-8法检测细胞活性；硝酸还原酶法检测细胞培养液一氧化氮（NO）、总一氧化氮合酶（TNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）含量；蛋白质印迹法检测eNOS蛋白表达水平。结果6组细胞存活率[（100.00 ± 0.00）%、（96.73 ± 1.17）%、（86.20 ± 7.54）%、（47.37 ± 9.10）%、（53.37 ± 5.47）%、（53.40 ± 8.84）%]比较差异有统计学意义（F = 29.42，P < 0.05）；与对照组比较，10-7、10-4 mol/L T4组，PTU组和10-4 mol/L T4 + PTU组细胞存活率显著降低（P均< 0.05）。6组细胞培养液NO、TNOS含量比较差异有统计学意义（F = 3.93、3.46，P均< 0.05）；与对照组比较，PTU组TNOS含量显著降低（P < 0.05）；与10-4 mol/L T4组比较，PTU、10-4 mol/L T4 + PTU组NO含量显著降低（P均< 0.05）。6组细胞培养液eNOS含量及蛋白表达水平比较差异无统计学意义（F = 0.24、0.17，P均> 0.05）。结论高浓度T4可造成体外培养HUVEC细胞活性的损伤，PTU通过调节NO、TNOS起到对其的缓解作用，具体作用机制还需进一步分子生物实验的深入研究。

简介：摘要目的探讨静脉注射免疫球蛋白（Intravenous immunoglobulin，IVIG）不敏感型川崎病中循环内皮细胞（Circulating endothelial cells，CECs）、内皮细胞微粒（Endothelial microparticles，EMPs）检测的临床意义。方法选取小儿川崎病患者55例为研究对象，分别在急性期、亚急性期和恢复期检测外周静脉血中CECs、EMPs及IL-6、TNF-α的水平，同时在疾病各个时期行心脏彩超检查，动态监测冠状动脉病变（Coronary artery lesions，CALs）情况。根据研究对象对IVIG敏感程度，选取IVIG不敏感型川崎病9例为观察组，随机选取18例IVIG敏感型川崎病为对照组，其中观察组根据病程中出现CALs与否分为CALs组5例、NCALs组4例，总结临床资料并统计分析。结果（1）观察组急性期、亚急性期CECs、EMPs水平高于同期对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；恢复期观察组与对照组CECs、EMPs水平差异无统计学意义（P>0.05）。（2）观察组在亚急性期CECs、EMPs、IL-6、TNF-α水平略低于急性期，但差异无统计学意义（P>0.05）；其急性期及亚急性期以上指标明显高于恢复期，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）采用Spearman相关系数分析，观察组CECs与IL-6、TNF-α呈正相关（r＝0.691，P<0.01；r＝0.584，P<0.01）；观察组EMPs与IL-6、TNF-α呈正相关（r＝0.714，P<0.01；r＝0.799，P<0.01）。（4）观察组中CALs组急性期及亚急性期CECs、EMPs、IL-6、TNF-α水平均高于同期NCALs组，差异有统计学意义（P<0.05）；恢复期两组指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论IVIG不敏感型川崎病患者CECs、EMPs水平变化与全身中小血管炎密切相关，考虑外周静脉血CECs、EMPs检测可能有助于对川崎病患者出现IVIG不敏感的早期预测，有助于对IVIG不敏感型川崎病患者疗效评估及出现冠状动脉病变的早期判断。

简介：摘要脑微出血(cerebral microbleeds，CMBs)是脑小血管病的一种影像学表现。目前越来越多的观点认为，血管内皮损伤在CMBs的发病过程中起着重要作用。血管内皮功能障碍所致的血脑屏障破坏以及炎症反应可能促进了CMBs的发生和发展。同时，CMBs病灶周围含铁血黄素的沉积也可能触发炎症反应。不过，相关的机制以及因果关系尚未完全阐明。文章对与CMBs相关的血管内皮炎性因子及其在CMBs发病中的作用机制进行综述。

简介：摘要内皮细胞结构和功能的改变是许多疾病发生的病理基础。细胞焦亡是最近发现的一种细胞程序性死亡方式，表现为细胞不断胀大直至破裂，细胞内容物释放，激发炎性反应。内皮细胞焦亡在动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤、急性肺损伤、创伤性脑损伤、糖尿病等多种疾病的发生、发展中起重要的作用。本文就近年来有关内皮细胞焦亡及其相关疾病的研究现状进行综述。

简介：摘要目的探讨循环血内皮细胞微粒(EMPs)与晚期肺癌疾病进展(PD)的关系及其对疗效的预测价值。方法收集2018年10月至2019年5月解放军总医院第一医学中心肿瘤科常规治疗的88例晚期肺癌患者资料，检测治疗前血常规、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤标志物以及CD105＋EMPs的表达情况。采用流式细胞仪检测CD105＋EMPs数目，采用多因素logistic回归分析晚期肺癌进展的预测指标。结果88例晚期肺癌患者中，客观反应组60例，PD组28例。两组患者的性别、年龄、基础疾病史、肿瘤分期、肿瘤类型、治疗方案等差异均无统计学意义(均P>0.05)，两组患者细胞角蛋白19片段、神经元特异性烯醇化酶、LDH、总微粒(MPs)、CD105＋EMPs的差异均有统计学意义(均P<0.05)。logistic多因素回归分析结果显示，CD105＋EMPs≥70 events/μl(OR＝3.623，95%CI为1.345～9.761，P＝0.011)和LDH(OR＝1.008，95%CI为1.001～1.015，P＝0.032)能够预测晚期肺癌的进展。根据多因素回归分析结果建立预测晚期肺癌进展模型，受试者工作特征曲线示，曲线下面积为0.729(95%CI为0.620～0.837，P＝0.001)，敏感度为32.1%，特异度为91.6%，阳性预测值为64.2%，阴性预测值为74.3%。结论CD105＋EMPs与晚期肺癌进展相关，CD105＋EMPs联合LDH能够预测晚期肺癌的疗效。

简介：摘要多糖包被作为内皮细胞表面的屏障性结构，通过减少炎性因子释放、免疫细胞趋化黏附及微血栓形成，避免了内皮细胞损伤相关的器官功能障碍。在脓毒症的治疗策略中，加强对多糖包被的保护和重建，如选择合适的复苏液体，应用肝素类药物等，或可改善患者预后。关注脓毒症时多糖包被的作用，探索更直观的检测方法，寻找强有力的保护措施，将成为脓毒症治疗的新靶点。

简介：摘要目的观察高能量快速角膜交联术对角膜内皮细胞的影响。方法前瞻性病例研究。收集济南明水眼科医院2018年1月至2019年2月的圆锥角膜76例(76眼)行高能量快速角膜交联术，术中总能量7.2 J/cm2，观察比较术前、术后1周、1个月及6个月角膜内皮细胞密度(CD)、角膜内皮细胞面积的变异系数(CV)及六边形角膜内皮细胞比率(6A)。结果术前CD，CV及6A分别为(2 856.71±276.13)个/mm2，30.93±7.65及(57.78±16.52)%。术后1周CD为(2 724.94±317.33)个/mm2，与术前比较差异有统计学意义(P＝0.007)，但是术后1个月、6个月的CD与术前比较差异无统计学意义(均P>0.05)。术后1周、1个月及6个月的CV、6A与术前比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高能量快速角膜交联术治疗圆锥角膜耗时短，且对角膜内皮细胞影响小。

简介：摘要H型内皮细胞（CD31hiEMCNhi）是一种特殊的血管内皮细胞亚型，主要分布于骨内膜及长骨干骺端。H型内皮细胞通过旁分泌等途径募集、激活骨祖细胞并促进软骨内成骨的进程，从而发挥促成骨功能；破骨细胞群与成骨细胞群等调节H型内皮细胞的生物活动。同时，H型内皮细胞的自我调控也与成血管、成骨过程密切相关。本文拟从H型内皮细胞的特性、细胞因子表达谱及其在成血管-成骨相互调节过程中的中介作用等方面作一综述，为建立基于成血管-成骨偶联的骨再生策略提供参考。

简介：摘要目的探讨健康者和RA患者血浆来源外泌体对人静脉内皮细胞功能的影响。方法收集健康者和RA患者血浆，用试剂盒分离外泌体后，通过透射电镜观察其形态特征、纳米颗粒分析仪（NTA）测量其大小及免疫印迹实验对表面标志蛋白进行鉴定。通过CCK8、细胞划痕、Transwell小室实验检测外泌体对内皮细胞增殖和迁移侵袭能力的影响；RT-PCR检测细胞分泌缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）含量变化。采用t检验。结果透射电镜观察到双凹圆盘状的囊性小泡，纳米颗粒跟踪分析（NTA）测其直径在50~150 nm，蛋白质印迹法显示出血浆外泌体表面标志蛋白flotillin1和CD81，相对分子质量分别为47 000和26 000。内皮细胞活性随着外泌体浓度增高而降低，但2组差异均无统计学意差义（t=1.86，P>0.05）。与健康者血浆外泌体相比，RA血浆外泌体可显著抑制内皮细胞迁移[（2.24±0.23）和（1.46±0.13），t=6.60，P<0.05]，侵袭能力减弱[（0.673±0.030）和（0.827±0.030），t=8.11，P<0.05]，分泌HIF-1α、VEGF细胞因子的能力也显著降低，差异均有统计学意义[（0.706±0.020）和（0.908±0.040），t=10.10，P<0.05；（0.692±0.010）和（0.841±0.020），t=14.90，P<0.05]。结论血浆来源的外泌体可能在RA并血管损伤中发挥重要的作用。

简介：摘要目的观察富里酸（FA）干预缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）基因表达谱的MiSeq测序分析结果。方法体外培养hRMEC，并将其分为缺氧组（缺氧处理）和FA干预组（即缺氧后FA干预）。采用MTT比色法检测不同浓度和不同作用方式的FA对hRMEC活性的影响。选择FA的最佳作用浓度，通过实时荧光定量PCR （RT-PCR）验证FA对缺氧诱导hRMEC中细胞间黏附分子-1 （ICAM-1）、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、MMP-2、TNF-α、TNF-β等炎症因子及炎症相关因子mRNA表达的影响。收集处于对数生长期的缺氧组和FA干预组细胞，应用MiSeq测序技术对两组细胞进行全转录组测序，获得生物学大数据，在此基础上分析差异表达的miRNA；通过基因注释（GO）功能显著性富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路显著性富集分析对差异miRNA的功能及信号通路进行分析。组间炎症因子及炎症相关因子表达比较时，通过miRNA mimic调节细胞中相应miRNA的表达水平，观察其对细胞功能的影响，从而判断该miRNA的作用。结果不同浓度和不同作用方式的FA对hRMEC的细胞活性无影响。RT-PCT检测结果显示，缺氧组hRMEC中ICAM-1、IL-1β、IL-6和TNF-β的mRNA表达较正常组明显上调，差异有统计学意义（t=3.426、6.011、5.282、6.500 ，P=0.027、0.004、0.006、0.003）；FA干预组hRMEC中ICAM-1、IL-6、TNF-α和TNF-β的mRNA表达较缺氧组明显下降，差异有统计学意义（t=9.961、3.676、3.613、3.387，P=0.001、0.021、0.023、0.028 ）。缺氧组和FA干预组之间共有14个差异表达miRNA，其中上调基因9个，下调基因5个。共4个差异miRNA （hsa-miR-1 285-3p、hsa-miR-30d-3p、hsa-miR-3 170、hsa-miR-7 976）的预测靶基因均为ICAM-1。GO功能显著性富集分析结果显示，差异基因的功能主要富集在细胞发育、细胞分化和单生物发育过程中。KEGG通路显著性富集分析结果显示，差异miRNA表达高度富集的是癌症中蛋白多糖通路和细胞因子-细胞因子受体相互作用通路，差异表达较明显的是花生四烯酸代谢通路和安非他明成瘾性通路。结论FA可能通过调控多个miRNA的表达，影响下游ICAM-1 mRNA的表达水平，从而对缺氧刺激hRMEC后细胞的炎性状态产生影响。

简介：摘要目的探讨海南儋州地区白内障患者角膜内皮细胞密度和形态的影响因素。方法采用横断面研究方法，纳入2009年2—12月"亮睛工程"在海南儋州"亮睛点"儋州市第一人民医院收治的白内障患者573例573眼。采用TOPCON非接触式角膜内皮显微镜测量角膜内皮细胞密度、中央角膜厚度(CCT)、六角形细胞比例、内皮细胞面积等参数，比较不同性别、眼别和年龄组受检者上述各检测参数的差异，并分析其影响因素。结果海南儋州地区白内障患者平均角膜内皮细胞密度为(2 533.00±366.67)个/mm2，CCT为(501.15±31.67)μm。年龄、CCT、最大角膜内皮细胞面积、角膜内皮细胞面积标准差、角膜内皮细胞面积变异系数、角膜内皮六角形细胞比例、平均内皮细胞面积是角膜内皮细胞密度的主要影响因素，各年龄组间角膜内皮细胞密度比较差异均有统计学意义(均P<0.05)，60～79岁组和≥80岁组患者角膜内皮细胞密度值小于60岁以下组，但≥80岁组角膜内皮细胞密度值大于60～79岁组，差异均有统计学意义(均P<0.01)。性别、角膜内皮细胞面积标准差、角膜内皮细胞面积变异系数、角膜内皮细胞密度是CCT的主要影响因素，男性CCT为(516.27±35.84)μm，明显高于女性的(492.20±24.97)μm，差异有统计学意义(t＝89.205，P<0.01)，不同性别间其他角膜内皮参数比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。不同眼别间角膜内皮各相关参数比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论海南儋州地区白内障患者角膜内皮细胞密度随年龄增长，角膜内皮细胞面积变异系数、平均角膜内皮细胞面积值增大，角膜内皮六角形细胞比例的减小而逐渐降低，60岁以上白内障患者角膜内皮细胞衰老速度存在差异。

简介：

简介：摘要目的探索脂多糖（LPS）对大鼠心脏微血管内皮细胞（rCMECs）转录组的调节作用。方法对照组（正常培养rCMECs），LPS组（100 ng/mL LPS处理6 h的rCMECs），每组进行3个生物学重复转录组测序。得到差异基因后，使用实时定量PCR对部分差异基因mRNA的表达进行验证。分别对上调和下调基因进行GO和KEGG富集，并对差异基因进行共表达网络分析。采用独立t检验进行统计学分析。结果LPS处理后，265个基因表达上调，118个基因的表达下调。前10个最显著上调基因为：Mt2a、Cyp7b1、Sod2、Icam1、Ccl2、AC128848.1、Mt1、Cebpd、Serpinb2和Tnfrsf11b。前10个最显著下调基因为：Cavin2、Ankrd1、Edn1、Prss35、Lmod1、Dhrs3、Ttc22、Sema6a、Map2k3和Sema7a。定量PCR的结果表明Mt2a、Sod、Ccl2、Cxcl1、Icam1和Vcaml基因的表达得到了上调（P均< 0.01）；而Cavin2、Ankrd1、Edn1和Prss35基因表达下调（P均< 0.05）。GO和KEGG富集的结果表明，上调基因与内皮细胞对炎性免疫细胞的趋化作用和黏附作用密切相关；而下调基因则是与钙离子信号和G蛋白相关通路以及内皮通透性增加有关。此外，差异基因进行共表达网络分析发现Sod2处于核心位置，提示其可能与LPS诱导的rCMECs的各种变化密切相关。结论LPS调控了rCMECs中大量与炎性免疫细胞进入心肌组织相关基因的表达。

简介：摘要目的探讨问号钩端螺旋体(简称钩体)跨血管内皮细胞转运分子机制。方法采用Transwell法了解问号钩体赖株穿越人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)单层能力。采用透射电镜和激光共聚焦显微镜法检测HUVEC内吞问号钩体后形成内吞泡情况。采用细胞内吞抑制试验确定HUVEC内吞问号钩体方式。采用激光共聚焦显微镜法检测HUVEC胞内问号钩体与溶酶体标志分子LAMP1共定位情况。采用暗视野显微镜Petroff-Hausser计数法检测HUVEC胞内问号钩体出胞情况。结果问号钩体赖株能迅速穿越HUVEC细胞单层。问号钩体通过PI3K-微丝依赖的细胞内吞方式进入HUVEC并形成内吞泡。HUVEC胞内问号钩体不与LAMP1共定位，提示问号钩体内吞泡不与溶酶体融合。HUVEC胞内问号钩体通过FAK-微丝/微管途径出胞。结论问号钩体通过跨细胞转运方式穿越人血管内皮细胞导致体内播散并加重病情。