简介：摘要本文通过荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR，分别对191例临床粪便样本进行GⅠ、GⅡ型诺如病毒的快速检测，优化反应条件，筛选出最优反应体系，对两种方法的特异性、灵敏性进行检测分析。发现两种方法均可较好的检测出GⅠ、GⅡ型诺如病毒。其中常规RT-PCR阳性样本数为142，检出率为74.34%，最低检出限为103copies/μl，标准曲线均呈现出良好的线性关系，扩增效率分别为101.336%、103.558%；荧光定量RT-PCR的阳性样本为163，检出率为85.34%，最低检出限为102copies/μl，批内、批间重复试验的标准差范围为0.10～0.59，变异系数范围为0.43%～2.84%，重复性良好。两种方法检出率有显著差异（P＜0.05），且对星状病毒、腺病毒以及肠道病毒等均无交叉反应，GⅠ、GⅡ型诺如病毒之间也无交叉反应。荧光定量RT-PCR在灵敏度方面占优，建议在临床检测中应用。

简介：摘要目的探讨实时荧光（RT-PCR）法快速检测流感病毒在临床中的应用效果，为今后的流行病学监测提供思路。方法以我中心2014年1月至2014年12月期间采集的1355份流感样病例（ILI）及暴发疫点现患病例的咽拭子标本作为本组研究的观察对象，采用实时荧光RT-PCR方法对流感病毒核酸进行检测分型。结果本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，B型76份，季节性流感H1亚型21份，季节性流感H3亚型124份。结论实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。

简介：摘要目的开发一次试验即可明确是否有肺炎支原体感染及所感染的肺炎支原体是否耐药的检测试剂。材料与方法本试剂盒以PAGE纯化的引物、HPLC纯化的Taqman水解探针以及基因工程表达的热启动Taq酶作为主要扩增体系组分。结果初步的临床实验结果证明，该试剂组分对痰液样本内肺炎支原体的检测灵敏度是94.93%，特异度是97.17%。结论该试剂相关性能达到了国内临床诊断试剂所要求的主要性能指标。

简介：摘要目的通过对我院529例婴幼儿（RT-PCR）检测结果进行分析,了解广州市番禺区手足口病的流行状况，为手足口病预防和控制提供实验依据。方法收集2012年529例疑似手足口病症状的婴幼儿咽拭子标本，采用(RT-PCR)对手足口病病毒RNA，EV71,EV,CA16进行定性检测。应用卡方检验对不同年龄段婴幼儿CA16,EV71,其他EV结果进行比较。结果在529例患者咽拭子中，305例检测结果阳性,总阳性率为57.66%,其中EV71阳性88例,占总阳性率的28.85%,CoxA16阳性50例，占总阳性率的16.39%，其它肠道病毒阳性为167例，占总阳性率的54.75%。结论2012年广州市番禺区手足口病原以其他型肠道病毒感染为主。

简介：摘要目的探讨非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)患者胸水标本不同预处理方式对EML4_ALK融合基因RT-PCR法检测的影响，以提高肺癌患者EML4_ALK融合基因的阳性检出率。方法收集本院非小细胞肺癌恶性胸水标本20例，同时采用2种不同的标本预处理方法提取RNA后采用突变扩增系统PCR(ARMS-PCR)法检测EML4_ALK融合基因，一种为直接离心提取法，另一种为制备细胞蜡块后切片提取法，对比两种预处理方式对检测结果的影响。结果50例非小细胞肺癌标本中，细胞蜡块切片提取法检测到的阳性样本数也同样为3例且与石蜡包埋提取法的阳性样本一致，直接沉淀提取法检测到的阳性标本数为1例，占总数的2%。结论制备细胞蜡块后切片提取法无论在检测成功率还是阳性检出率方面均显著优于直接离心提取法。

简介：摘要目的探讨分析实时荧光定量PCR检测诊断结核病的应用价值。方法回顾性分析本院收治的80例结核病患者作为本次研究对象。对患者行实时荧光定量检查以及涂片抗酸染色法检查，对比分析两种不同检验诊断方法的结果。结果通过对患者行涂片抗酸染色法检测，发现最终的阳性检测共计为33例41.25％，对患者行实时荧光定量检验，发现最终的阳性检测共计为69例86.25％，实时荧光定量检验诊断方法检出率，相较涂片抗酸染色法检测明显较高，差异显著（P＜0.05）。结论通过对结核病患者行实时荧光定量检验方法诊断，可以取得较高的诊断率，且具有较高的灵敏性和特异度，可以及早为结核病患者的早期治疗提供临床依据，在一定程度上对患者的治疗预后起到直接影响，可以在临床中推广应用。

简介：摘要目的通过观察我院收治的对宫颈病变患者的临床诊断资料，探讨分析采用实时荧光PCR检测高危型HPV的价值。方法对我院收治的158例宫颈病变患者患者，进行实时荧光PCR检测，分析检测结果，并与第2代杂交捕获法(HC-Ⅱ)的检测结果对比。结果HPV在宫颈癌患者阳性表达率达90%以上,与HC-Ⅱ相比，差异无统计学意义；PCR检测宫颈病变与HC-Ⅱ的检测结果的阳性率分别为74.7%与70.9%，差异无统计学意义（P>0.05）；但两种方法检测HSIL的HPV阳性率明显高于宫颈炎症、湿疣（P<0.01），除LSIL外，其他病变中的PCR检出率均略高于HC-Ⅱ。结论采用实时荧光PCR检测高危型HPV，可用于确诊患者是否患有宫颈癌，提示高危型HPV感染与宫颈病变、宫颈癌发生有一定的相关性，值得进一步推广与应用分析。

简介：

简介：摘要目的探讨实时荧光定量PCR对蕲蛇样品真伪鉴别的准确性。方法采用实时荧光定量PCR法从蕲蛇正品、混伪品中提取DNA,进行引物扩增，并通过Cq值和扩增曲线对样品真伪进行判断。结果3批蕲蛇正品的Cq值均低于30，曲线有明显的指数增长期；2批混伪品无Cq值，曲线为一直线。结论本方法鉴别蕲蛇操作简单，准确率高，重现性好，可行有效。

简介：摘要目的对杭州安杰思医学科技有限公司的AFD9600实时荧光定量PCR仪的主要性能指标进行验证，为其检测结果的可靠性提供依据。方法依据《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》（CNAS-CL36）和美国临床实验室标准化协会（CLSI）制定的验证标准，验证该仪器精密度、正确度、线性以及灵敏度指标。结果AFD9600定量检测HBV-DNA低值和高值的批内精密度CV分别为1.6%和1.3%，其总精密度CV分别为2.1%和1.6%。正确度3个标准物质检测结果的偏倚为-1.05%～3.49%，均在可接受范围内。线性线性相关系数为0.9992，直线回归方程为Y=0.9937X-0.0697。灵敏度对HBV-DNA浓度5×102IU/mL的检出率均为100%，CV分别为5.97%。结论AFD9600的主要性能指标符合实验要求，可满足临床实验室需求。

简介：摘要目的建立TaqManTM实时荧光pcr检测副溶血性弧菌的快速检测方法，为食物中毒快速准确的定性检测及食品中副溶血性弧菌染菌率的调查提供手段。方法通过分析，最终选择tlh基因作为目的基因，在Genebank进行中查找多条TLH基因序列，并利用DNAssist软件进行同源性分析，选取相对保守区段，用BeaconDesigner软件自行设计引物和TaqManTM探针，并利用核酸提取试剂盒煮沸法制备基因组DNA，通过对TaqManTM实时荧光PCR缓冲液浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、引物浓度和探针浓度等反应条件的优化，初步建立副溶血性弧菌的TaqManTM实时荧光PCR快速检测方法。结果选取的tlh基因同源性达到98.9%以上（13/1234），同源性好。通过对各实验条件的优化，得到副溶血性弧菌TaqManTM实时荧光PCR的最佳反应条件，初步建立TaqManTM实时荧光PCR检测副溶血性弧菌的快速检验方法。结论TaqManTM实时荧光PCR检测灵敏度高、特异性好，而且检测周期短，能提高副溶血性弧菌的检出率和检测准确性。

简介：

简介：摘要目的探究荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果。方法选取自2009年1月至2009年12月在我省流感病例900例，采用实时荧光定量PCR对流感病毒核酸进行检测，观察检测阳性率和阳性样本的类型。结果2009年1～12月流行期采集流感样病例900例，流感病毒核酸检测呈阳性247例，阳性率为27.44%；其中，甲型H1N1共215例，甲型H3流感12例，甲通20例。结论荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸科学有效，能够满足临床对流感病毒核酸快速、准确检测的需要，对其结果进行质量控制，能够最大限度保证结果的准确性，可临床进一步推广。

简介：摘要目的探讨建立荧光定量PCR法直接检测临床标本的肺炎链球菌并对其进行血清学分型的可行性。方法针对肺炎链球菌种属特异性基因lytA及该菌常见的21种血清型设计荧光探针及引物，构建Taqman荧光定量PCR法。使用荚膜肿胀试验作为金标准检测PCR方法的灵敏度及特异度，选择1209份临床样本同时做培养及PCR方法，比较两种方法的肺炎链球菌检出率及血清分型情况。结果构建Taqman荧光定量PCR法灵敏度及特异度分别为94.2%及70%。Taqman荧光探针PCR法鉴定的主要血清型别为19F（43.7%）、6A/B（17.2%）、23F（13.8%）、19A（6.8%），未能分型的肺炎链球菌为17.2%。荚膜肿胀试验鉴定的主要血清型别为19F（39.1%）、6A/B（17.2%）、23F（9.2%）、19A（5.7%），未能分型的肺炎链球菌为28.7%。1209份临床样本仅培养出16份肺炎链球菌，Taqman荧光定量PCR法检出44例肺炎链球菌，其对临床样本肺炎链球菌阳性检出率更高，其差异有显著统计学意义（χ2=13.39，P<0.001）。结论Taqman荧光探针PCR法灵敏度高、特异度好，能直接对临床样本进行血清学分型，可大幅度缩短肺炎链球菌检测的报告时间。

简介：摘要目的分析利用实时定量PCR检测的方法检测胰岛素和高糖对巨噬细胞ACAT-1表达的影响。方法将胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1，但是每次的时间不相同，分别为0小时、6小时、12小时、24小时及48小时，然后用实时定量PCR的方法进行检测，观察其产生的影响。结果胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1不同的时间，12小时后的表达量要显著高于0、6、24及48小时的表达量（P＜0.05）；而48小时的表达量和0小时的表达量相比，无显著差异（P＞0.05）。结论胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1将在12小时达到高峰，然后再逐渐下降，在48小时下降到0小时的水平。

简介：摘要目的建立快速检测非小细胞肺癌患者PTEN、VEGF和RRM1mRNA表达水平的体系，并对表达水平进行评价。方法以正常人外周血构建PTEN、VEGF、RRM1和管家基因actin的定量标准曲线，利用实时荧光定量PCR法中的“双标准曲线”模型对80例肺癌患者和200例正常人的上述基因表达水平进行检测。结果标准曲线呈良好的线性关系。PTEN和VEGF基因在非小细胞肺癌组织中表达分别显著高于和低于正常组织，PTEN、VEGF基因表达与患者的性别、组织学类型无关，而与P-TNM分期存在显著相关性。两者的基因表达呈负相关。RRM1基因表达与患者的性别、组织学类型以及P-TNM分期均不存在显著相关性。结论Taqman实时荧光定量PCR法能够较好的对非小细胞肺癌患者体内PTEN、VEGF和RRM1mRNA表达水平进行定量检测并给予客观评价，为后期的治疗和用药提供可靠的依据。

简介：摘要目的针对实时定量PCR法分析2型糖尿病患者肠道乳酸杆菌军中数量的改变进行观察研究。方法选择我院收治的糖尿病患者68例，健康志愿者66例，对糖尿病患者的血糖、血脂代谢指标、炎症指标进行检测，并分别收集所有研究对象的粪便提取细菌总DNA，通过实时定量PCR方法测定目标细菌的拷贝数。结果通过对68例糖尿病患者进行实时定量PCR方法进行目标细菌数量的测定，其糖尿病足患者的各项菌种指标含量显著高于对照组，结论2型糖尿病患者肠道总乳酸杆菌及其某些具体菌种数量增多及乳酸杆菌数量的改变对血脂造成一定影响。

简介：摘要目的评价基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析（PMCA）技术作为耳聋基因基因诊断的可行性。方法选取2017年1－4月在珠海市妇幼保健院出生的经MALDI-TOF-MS诊断为耳聋基因携带者的婴儿的脐带血标本92份和正常的脐带血标本4份，采用PMCA技术对上述96份标本进行耳聋基因检测，检测结果不一致的样本，以DNA测序技术作为金标准，对上述两种方法检测耳聋基因突变的检测性能进行评估。结果探针熔解曲线分析法除了2例不在检测范围外，其余的94份标本均能正确检出。经测序鉴定，该两例未能检测出，是由于基因检测位点的不同所导致。结论PMCA技术可作为MALDI-TOF-MS技术检测耳聋基因基因突变的替代或验证方法。

简介：摘要目的分析和对比针对急性肺栓塞患者给予不同剂量rt-PA后的治疗效果。方法选取2014年10月～2015年12月来我院治疗的急性肺栓塞患者30例均分成两组，每组各15例。对照组急性肺栓塞患者给予大剂量的rt-PA进行治疗，而试验组急性肺栓塞患者采用小剂量的rt-PA进行干预。结果试验组患者在治疗后出现脑出血、梗死、上消化道出血等不良状况人数均少有对照组患者（P＜0.05）。两组急性肺栓塞患者的神经功能评分，试验组患者在治疗后的各个阶段均优于对照组患者（P＜0.05）。结论不同剂量的rt-PA在临床治疗急性肺栓塞疾病上都有一定的作用价值，但是小剂量的rt-PA可以明显的改善患者治疗期间的各项指标，减少了不良状况的发生。

简介：摘要近年来数字PCR技术发展迅速，与传统PCR技术相比数字PCR可以对核酸分子进行绝对定量检测，并且具有高准确、高灵敏的优点。广泛应用于分子生物学领域和临床检测上，在癌症早期诊断、产前诊断、感染性疾病的早期检测、器官移植后监测等方面都有着重要的作用。