简介：摘要新冠肺炎爆发，战“疫”是全世界面临的重要任务，而快速确诊是疫情防控的基础。根据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第六版）》以及《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南（第四版）》记载，利用实时荧光 PCR进行核酸检验是主要诊断手段。作为当下新冠肺炎确诊的“金标准”，实时荧光 PCR功不可没。但通过新闻报道，我们不难发现当前诊断依然存在确诊慢、假阴性等问题。何为实时荧光 PCR？为何还不能完全快速准确地诊断新冠？如何改进？今天我们就从专利的视角，聚焦实时荧光 PCR，为大家揭开其神秘面纱。

简介：【摘要】：新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒 (2019-nCoV)引起的一种急性的呼吸道传染疾病，可迅速发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍，严重威胁患者的生命健康安全。经相关学者对新型冠状病毒毒株的检验研究后，确认通过实时荧光 RT-PCR核酸检测可对新型冠状病毒进行临床诊断，可以早发现、早诊断、早治疗或尽早与其他病毒感染者进行鉴别诊断。

简介：摘要目的探讨实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸在疾病诊断中的应用。方法从中国疾病预防控制信息系统选取截至2020年3月5日录入的河南省COVID-19的实验室检测数据和病例基本信息。所有信息都由当地医院和疾控中心录入系统，医院或者区县疾控中心负责采样，河南省各省辖市疾控中心负责核酸检测。结果共纳入6 714份标本，SARS-CoV-2核酸检测阳性率为23.82%。标本来源于3种诊断类型，确诊病例1 200例，疑似病例2 178例，无症状感染者77例，SARS-CoV-2感染核酸确诊率为36.96%(1 277/3 455)。所有诊断类型标本中，鼻拭子、痰液和咽拭子的SARS-CoV-2核酸检测阳性率分别为19.38%、28.59%、23.53%，差异有统计学意义(χ2＝15.896，P<0.01)。确诊病例的呼吸道标本SARS-CoV-2核酸检测阳性率为63.10%。鼻拭子、痰液和咽拭子的核酸阳性率分别为50.80%、58.71%、65.21%，差异有统计学意义(χ2＝18.612，P<0.01)。所有诊断类型发病后当天、1周、2周、3周、4周和5周及5周以上呼吸道标本SARS-CoV-2核酸检测阳性率依次为43.51%、23.98%、22.82%、12.17%、14.46%、13.21%，在确诊病例中的阳性率依次为89.03%、86.57%、52.30%、17.53%、17.69%和24.14%。结论实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2核酸是最有效的早期病原学诊断方式，COVID-19发病后1周内核酸检出率最高，核酸检出时间最晚是发病后38 d。

简介：摘要目的建立一种人星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction)快速检测方法。方法根据人星状病毒ORF1b基因的保守序列设计扩增引物和特异性荧光探针，建立星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR快速检测方法，并对该方法的特异性、灵敏度和稳定性进行评价，同时应用该方法对实际临床样本中的星状病毒进行检测。结果所建立的人星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性和稳定性，灵敏度可达102拷贝/μl，对星状病毒临床样本检测后，检出率达100%。结论本文所建立的人星状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的特点，可应用于临床星状病毒的病原检测和流行病学调查。

简介：姚开虎副研究员非常高兴邀清到意大利佛罗伦萨大学附属AnnaMeyer儿童医院ChiaraAzzari教授来北京儿童医院做学术访问，在您的“侵袋性细菌感染的分子学诊断：一个有川的临床一具”的报告中谈到采用分子诊断方法评估意大利肺炎链球菌疾病负担的工作，这些经验对中国开展相关工作具有很好的借鉴意义。

简介：摘要本文通过荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR，分别对191例临床粪便样本进行GⅠ、GⅡ型诺如病毒的快速检测，优化反应条件，筛选出最优反应体系，对两种方法的特异性、灵敏性进行检测分析。发现两种方法均可较好的检测出GⅠ、GⅡ型诺如病毒。其中常规RT-PCR阳性样本数为142，检出率为74.34%，最低检出限为103copies/μl，标准曲线均呈现出良好的线性关系，扩增效率分别为101.336%、103.558%；荧光定量RT-PCR的阳性样本为163，检出率为85.34%，最低检出限为102copies/μl，批内、批间重复试验的标准差范围为0.10～0.59，变异系数范围为0.43%～2.84%，重复性良好。两种方法检出率有显著差异（P＜0.05），且对星状病毒、腺病毒以及肠道病毒等均无交叉反应，GⅠ、GⅡ型诺如病毒之间也无交叉反应。荧光定量RT-PCR在灵敏度方面占优，建议在临床检测中应用。

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简介：摘要目的探讨实时荧光（RT-PCR）法快速检测流感病毒在临床中的应用效果，为今后的流行病学监测提供思路。方法以我中心2014年1月至2014年12月期间采集的1355份流感样病例（ILI）及暴发疫点现患病例的咽拭子标本作为本组研究的观察对象，采用实时荧光RT-PCR方法对流感病毒核酸进行检测分型。结果本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，B型76份，季节性流感H1亚型21份，季节性流感H3亚型124份。结论实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。

简介：TA克隆构建含MOC1基因cDNA片段的重组质粒，作为TaqMan定量检测水稻分蘖基因MOC1mRNA的标准品，建立了检测方法。采用RT—PCR。的方法，从水稻分蘖芽总RNA中逆转录扩增总cDNA，PCR扩增MOC1基因中设计的目的片段，将纯化的目的片段与pMD19-TSimple载体连接，转化宿主菌JM-109，提取重组质粒DNA，PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值，确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验。建立了MOC1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法，特异性好，检测灵敏度达10^2拷贝，线性范围为10^2-10^7拷贝，阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（r=0．999），扩增效率高（E=92．8％）。成功建立了MOCI基因实时荧光PCR定量标准品，且TaqMan荧光定量RT—PCR的方法可对水稻分蘖基因MOC1mRNA的表达进行准确定量。

简介：摘要目的建立可以检测阿瓦朗病毒(Avalon virus，AVAV)和休斯病毒(Hughes virus，HUGV)两种内罗病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法，并进行初步的评价。方法收集、整理、比对、分析在公共数据库发布的两种病毒基因组核苷酸序列，确定检测靶标，设计特异性引物、探针，优化检测程序，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果所建实时荧光定量RT-PCR检测方法可有效扩增检测AVAV和HUGA靶标RNA，检测限分别约为20拷贝/μl和70拷贝/μl，检测科萨努尔森林病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、发热伴血小板减少综合征、内罗毕羊病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增，两种内罗病毒相互间无交叉反应，重复性比较分析显示变异系数小于2%。结论本研究建立的检测AVAV和HUGV的实时荧光定量RT-PCR方法，可用于临床样本检测和媒介生物、宿主动物标本筛查，便于病原的快速识别和疾病诊断。

简介：摘要目的建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV的全部基因序列，使用MEGA-X完成多序列比对分析，选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针，分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立的方法可以特异性地检测WUXV，并且与多种虫媒病毒无交叉反应；反应的灵敏度较高，最低检测下限为1 pfu/ml；同一样品重复检测循环阈值(Ct)的批间变异系数均小于1.00%；用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本，其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

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简介：【摘要】 目的　探讨实时荧光定量PCR( RT-PCR)法与抗酸涂片染色法在支气管肺泡灌洗液中查结核分枝杆菌，辅助诊断肺结核的作用。方法　回顾性分析2022年1月至2023年12月在大理市第一人民医院住院的疑似肺结核患者279例，采用集菌涂片法、PCR实时荧光探针法同时检测病人肺泡灌洗液标本，对检测结果进行分析和比较。比较两种方法在肺泡灌洗液标本中检测结核分枝杆菌的准确率、敏感性及特异性。结果　RT-PCR法检测肺结核患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌的检出准确率、敏感性和特异性均高于抗酸涂片染色法(P<0.05)。结论 RT-PCR法检测肺泡灌洗液标本中的MTB，具有快速、诊断准确率、灵敏度和特异性较高的优点，可提高肺泡灌洗液标本中MTB的检出率并能减少误诊和漏诊的发生。

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简介：摘要目的分析实时荧光定量RT-PCR法对手足口病病原体的定量检测。

简介：摘要目的对桂林市一起旅游团体腹泻疫情进行诺瓦克病毒Ⅰ型(NVGⅠ型)和Ⅱ型（NVGⅡ型）检测分型，为疫情处理及时做出准确的判断。方法用实时荧光探针（RT-PCR）方法对腹泻病人样本的特异引物进行核酸扩增检测。结果通过用实时荧光PCR法对28份样品进行快速检测，NVGⅠ型阳性6份（21.4﹪），NVGⅡ型阳性3份（10.7﹪），NVGⅠ型和NVGⅡ型同时阳性1份（3.6﹪），阴性19份（67.9﹪）。结论实时荧光PCR在诺瓦克病毒检测中能起到快速、准确和高灵敏的效果，对病人病情的及时诊断治疗和对突发疫情的快速控制和处理起到了积极的作用。

简介：ObjectiveToinvestigatetheoccurrenceandpossiblemechanismsofapoptosisincochlearepitheliumandspiralganglionneuronsaftermefloquinetreatment.MethodsWeusedquantitativeRT-PCRapoptosis-focusedgenearrays(96-well,84apoptosisrelatedgenes)toassesschangesofgeneexpressioninthecochlearbasilarmembrane(haircells-supportingcells)andspiralganglionneuronsofratcochlearorganotypicculturestreatedwith100μMmefloquinefor3h.ResultsSignificantup-ordown-regulationingeneexpressionwasdetectedin23genesinthecochlearbasilarmembrane,andin32genesinthespiralganglionneuronscomparedwithtime-matchedcontrols.Therespondinggenescouldbeclassifiedaspro-oranti-apoptotic,andweremainlyimplicatedintheBcl-2,Caspase,Card,IAP,TNFligand/TNFreceptor,Deathdomain/Deatheffectordomain,DNAdamage/p53,andNF-kappaBfamilies.Syntheticanalysissuggestedthatthesefamiliescouldberevisedtotwomajorpathwaysmainlyinvolvedinthedeathreceptor-mediatedsignalingpathwayandapoptoticmitochondrialpathway.Inaddition,itwasfoundthatnumerousanti-apoptoticgenessuchasBcl2a1,Birc1b,Birc3,Birc4,Bnip1,Cflar,Il10,Lhx4,Mcl1,Nfkb1,Prlr,Prok2,andTNFweregreatlyup-regulatedinthecochleartissue,whichmightimplytheco-existenceofprotectiveresponseinthecellsattheearlystageofmefloquine-induceddamage.

简介：摘要随着时代的进步，社会的发展，大多数疾病已经可以得到很好的治愈，但是大规模的流感病毒的爆发，仍然困扰着我们，特别是甲型H1N1流感。流感病毒传染性强，变异性强传播速度快，爆发后难以控制，极大的危害了社会的安定和谐，，影响了人们的生活质量。所以及早点了检测发现流感病毒是抑制病毒传播，控制流感病毒爆发程度的最为关键的步骤。现在国内外常用的检测流感病毒的方法主要有血清学检测、核酸扩增法检测、细胞培养法、流感病毒抗原检测法等。但是这些常用的方法耗费大量时间和精力，不适用于流感病毒的快速检查。相反，荧光定量RT-PCR是各种检测方法中最灵敏、最有效、最准确的。所以对于荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用的研究是有很大医学价值。

简介：随着现代分子生物学技术的发展,反转录聚合酶链式反应技术在甘薯病毒检测上的应用越来越广泛。采用该技术可检测出甘薯组织中含量极低的病毒RNA,具有灵敏度高、特异性强等优点。在本研究中根据NCBIGenBank中收录的SPCSV病毒外壳蛋白（CP）基因核苷酸序列的保守区域设计了3对特异性引物,使用天根生化科技（北京）有限公司生产的QuantOneStepRT-PCRkit试剂盒,针对影响扩增产物的影响因素退火温度进行优化,建立了甘薯退绿矮化病毒的RT-PCR检测方法。该方法使RT-PCR在一管内完成,大大降低了外源物质的污染及RNA降解的几率,可作为甘薯SPCSV病毒的快速检测方法。

简介：Abstract:TheP24antigentest,HIVRNAPCRtest,HIVisolation/cultureandfourth-generationHIVuniformAg/AbassayarebeingutilizedindiagnosingacuteHIVinfectionindifferentlabs.ManyfactorslimittheuseofscreeningforacuteHIVinhigh-riskpopulations,inblooddonorsandduringvoluntaryHIVtesting,including,cost,technique,sensitivityandspecificity.InthisreviewweexploreanewNAATmethodwhichinvolvesHIVRNART-PCRonpooledsamples.Thistechniqueisabletoscreenforacuteinfectionsinalargetestingvolumeandmayheusedasascreeningmethodinhigh-riskpopulationsandblooddonors.