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简介：目的：构建4E—BPl及其T37A、T46A、$65A、T70A突变体4E—BPl-4A基因表达的重组慢病毒载体，研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法：PCR扩增4E—BPl基因及其突变体aE—BPl-4A基因并克隆到pCDH载体，构建成pCDH-4E—BPl、pCDit一4E—BPl—4A，将其-9包装载体共转染293T细胞，包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞，Western印迹鉴定病毒载体介导的4E—BPl、4E～BPl—4A蛋白的表达，MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E—BPl、4E—BPl—4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果：包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞；MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E—BP!可抑制胃癌HGC27细胞的生长，过量表达4E—BP!一4A时抑制效果更明显。结论：构建了4E—BPl、4E—BPI-4A的重组慢病毒表达载体，在胃癌HGC27细胞中过量表达4E—BPl可抑制细胞生长，过量表达4E—BPl-4A的抑制效果更明显。

简介：白细胞介素4(IL-4)是一种由TH2细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,是机体免疫系统的重要成员,在参与机体免疫调节方面有重要作用。据文献报道,IL-4在临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关,美国Genzyme公司已研制开发ELISA试剂盒检测IL-4水平,但价格昂贵。本实验制备rhIL-4抗血清以应用于IL-4的生物学活性研究及临床检测IL-4水平等方面。

简介：为研究人血小板因子4(hPF4)的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应(RTPCR)从人红白血病细胞系HEL细胞总RNA中扩增出hPF4基因cDNA序列,将其克隆至pUC18载体中.序列分析证实克隆片段与文献报道的hPF4基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hPF4基因cDNA.

简介：CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白，可以与B7结合，通过阻断B7与CD28的结合，从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号，可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr，并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中，用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。

简介：细胞毒T淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）是激活的T细胞表达的一种膜蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，它通过与B7分子的结合来阻止共刺激信号的传递，抑制抗原特异性T淋巴细胞的增殖活化，起到抑制免疫反应及诱导免疫耐受的作用。CTLA-4在自身免疫病、过敏性疾病、感染、肿瘤及抗移植排斥等领域具有广阔的应用前景。简要综述了CTLA-4的基因、分子结构，及其与T细胞应答的关系。

简介：P16ink4是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`（ink4）基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16ink4cDNA。扩增得到556bp片段（包括引物两端酶切位点的16bp）克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16ink4cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16ink4cDNA已成功地得到克隆。

简介：以ＣＺＢ为基础培养液，培养小鼠２、４、８－细胞胚胎的卵裂球，研究葡萄糖、牛磺酸和胰岛素对１／２卵裂球体外发育的影响及１／４、１／８和２／８卵裂球的体外发育规律。２－细胞胚胎卵裂球在ＣＺＢ中和在添加牛磺酸的ＣＺＢ中培养，其囊胚发育率（分别为９２％、８９％）无显著差异（Ｐ＞０．０５）。胰岛素在少量葡萄糖存在的情况下，不影响卵裂球的囊胚发育率；在无葡萄糖时，卵裂球的囊胚发育率（３８％）显著降低。牛磺酸在

简介：目的：研究脂多糖（LPS）对人血清中补体系统的激活及在小鼠模型中诱导产生白三烯B4（LTB4）。方法：LPS包被ELISA板,利用血清中补体C4、C3沉积实验检测补体成分被LPS活化的情况,通过尾静脉注射小鼠LPS后不同时间点ELISA定量检测LTB4,评价补体系统的活化和炎症因子的产生。结果与结论：血清系统ELISA检测发现LPS可以激活补体系统,且以凝集素途径为主;动物实验中LTB4被LPS诱导后1～3h达到峰值,之后回落。C1INH对血清补体活化和动物模型中LTB4的产生均有显著抑制。

简介：目的：研究SOX4和p53蛋白之间的相互作用。方法：应用GSTpull-down、免疫共沉淀实验验证相互作用。结果：GSTpulldown实验证实SOX4能结合GST-p53融合蛋白,但不能结合GST蛋白;免疫共沉淀实验也证明,SOX4与p53能在细胞内发生相互作用。结论：SOX4能与p53发生相互作用,为p53信号通路的研究提供了新的线索。

简介：目的：合成新型蛋白转导域PTD4,研究其细胞内穿膜效应及在体组织分布。方法：设计并采用固相合成法合成新型蛋白转导域PTD4,用FAM（羧基荧光素）进行标记,采用高效液相色谱仪（HPLC）和质谱仪测定其纯度与相对分子质量;采用荧光倒置显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察其在细胞内的穿膜情况;采用裸鼠活体成像观察穿膜肽在体内的组织分布及代谢特性,并切片观察各组织器官的分布情况。结果：合成了新型蛋白转导域PTD4,纯度为95.76%,相对分子质量为1776.5;PTD4在体外的穿膜效应有时间与浓度依赖性,约24h代谢完毕,且共聚焦显微镜细胞层扫证实穿膜肽进入胞内;尾静脉注射的PTD4在裸鼠体内可迅速分布于各组织器官,但组织分布不均一,且有时间与浓度依赖性,6h后荧光强度下降了大半,且腹腔注射方法不如尾静脉注射的穿膜效率高。结论：采用Fmoc固相肽合成法可成功合成蛋白转导域PTD4;PTD4能高效穿透细胞膜,穿膜效应呈时间与浓度依赖性;PTD4在体内能迅速分布于各组织细胞。

简介：轮状病毒（rotavirus,RV）是在世界范围内造成婴幼儿和幼年动物病毒性腹泻的最主要病原.A组RV的NSP4蛋白被认为是病毒的肠毒素,近年来的研究发现,这个非结构蛋白NSP4在RV致病过程中起着重要的作用.本文简要综述了多功能肠毒素NSP4的研究进展.

简介：目的：研究SARS冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法：应用免疫共沉淀、GST—pulldown、BIACORE实验验证SARS—CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用，BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS—CoVN蛋白的亲和常数为Ko=4．3×10^-11。结论：SARS—CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物，这为进一步探讨SARS—CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。

简介：ＳＭＡＤ４蛋白在嗜甲醇酵母中表达后，纯化鉴定。将纯化产生与两株胰腺癌细胞株共同孵育，用ＤＮＡ序列梯图谱和ＴｄＴ末端标记两种方法考察了此蛋白对体外培育的胰腺癌细胞生长的作用。结果显示ＳＭＡＤ４对胰腺癌细胞株ＳＷ１９９０有明显的促调亡作用，而对胰腺癌细胞株ＣａｐａｎⅡ未见这种作用。

简介：人白细胞介素4(hIL-4)是由Th2分泌的细胞因子,具有多种生物学功能,在人体免疫网络中具有重要的作用。它具有对T细胞、B细胞、胸腺细胞、造血干细胞等多种细胞的增殖效应,促进B细胞的分化,强化抗原表达,提高机体免疫功能;能与IL-2、GM-CSF、IL-10等多种细胞因子产生正协同效应,因而对免疫缺陷、肿瘤、造血障碍、感染性炎症等可产生积极的疗效。国外正进行Ⅱ期临床试验。

简介：目的：参照美国国家实验室标准委员会（NCCLS）的EP9-A2文件，对测定血清中甲胎蛋白（AFP）含量的电化学发光免疫法和光激化学发光法进行方法学比对试验，比较二者结果的-致性。方法：收集40例患者血清标本，以罗氏Cobas601电化学发光免疫分析仪为比较仪器（Ⅳ），博阳LICA光激化学发光免疫分析仪为实验仪器（Y），同时检测血清中AFP的含量；分析2种生化仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的-致性。结果：2种仪器测定的结果相关性良好（r=O．9925），预期偏倚可以接受。结论：在严格按操作规程进行检测的前提下，2种方法测定结果基本-致，其偏差可为临床所接受。当同-实验室同-检验项目存在2种以上检测方法时，应进行方法比对，判断其临床可接受性，以保证检验结果的可比性。

简介：目的：探究和评价粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及白细胞介素4（IL-4）作为β淀粉样蛋白（Aβ）表位DNA疫苗的分子佐剂,增强DNA疫苗体液和细胞免疫反应的水平。方法：阿尔茨海默病DNA表位疫苗pVAX1-6Aβ15-T分别与重组DNA分子佐剂pVAX1-S-IL-4和pVAX1-S-GM-CSF联合免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。结果：分子佐剂IL-4组相比单独的DNA表位疫苗pVAX1-6Aβ15-T组抗体水平具有一定程度的提高;GM-CSF能明显提高DNA疫苗Aβ特异的抗体水平和泛DR辅助T细胞表位（PADRE）特异的细胞免疫反应,4次免疫后其抗体滴度提高了4倍。结论：GM-CSF佐剂能够有效地用于今后阿尔茨海默病DNA表位疫苗的研究中。

简介：利用酵母双杂交试验,鉴定了细胞内信号传导蛋白SMAD3和SMAD4的相互作用。通过SMAD3和SMAD4各突变体的同源和异源相互作用的双杂交反应,确定SMAD4介导信号传递的功能区在中间连接区,SMAD3的功能区在C末端。

简介：目的：建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法：提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒，以梯度稀释质粒为标准模板，选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物，进行SYBRGreenI荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结果：标准曲线为y=-4．284x＋53．468，由全基因组质粒所构建的标准曲线线性关系良好，扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系（R2=0．999609），检出敏感度可达1×10^2拷贝/μL，且与其他几种腺病毒无交叉反应。用该方法检测4型腺病毒感染细胞2、12和24h后的病毒拷贝数，其病毒拷贝数随时间增加，与细胞病变（CPE）变化保持一致，且荧光定量PCR的测量结果稳定（变异系数〈6％）。结论：建立了检测人4型腺病毒基因拷贝数的荧光定量RT—PCR方法，该方法灵敏度高、特异性强。

简介：黄芪属于豆科草本植物,在中医领域内黄芪有着十分广泛的应用以及重要的临床价值,对于很多疾病的治疗都具有很好的作用。了解黄芪的化学成份,并对其药理活性进行研究,对于正确使用黄芪治疗各种临床疾病有着重要的意义。本文就黄芪化学成份与药理活性这一问题进行研究。