简介：摘要目的评价组蛋白去乙酰化酶3 (HDAC3)在原代大鼠心肌细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用及其与自噬的关系。方法将1~3 d左右的新生SD乳鼠提取原代心肌细胞，铺板。按随机数字表法分为5组(n＝24)：对照组(C组，糖浓度5.5 mmol/L)、缺氧复氧组(H/R组)、高糖组(H组，糖浓度30 mmol/L)、高糖缺氧复氧组(HH/R组)和高糖缺氧复氧+HDAC3抑制剂RGFP966组(HH/R+RG组)。采用50%葡萄糖注射液制备高糖培养基(终浓度为30 mmol/L)。H/R组细胞置于低氧环境(5%CO2-0.9%O2-94.1%N2)中培养6 h，再置于常氧环境中复氧2 h制备心肌细胞缺氧复氧模型。HH/R+RG组于缺氧复氧前24 h加入RGFP966，终浓度10 μmol/L。于细胞复氧2 h时，采用CCK-8法检测细胞活力；ELISA法检测细胞上清LDH活性；自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染下共聚焦显微镜检测细胞自噬水平；Western blot法检测心肌细胞HDAC3、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达，计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与C组比较，H/R组和H组心肌细胞活力降低，上清液LDH活性升高，H/R组自噬小体数增加，心肌细胞HDAC3表达上调，p62表达下调，LC3 Ⅱ/I比值升高，H组自噬小体数减少，心肌细胞HDAC3和p62表达上调，LC3 Ⅱ/I比值降低(P<0.05)；与H/R组比较，HH/R组心肌细胞活力降低，上清液LDH活性升高，自噬小体数量降低，HDAC3和p62表达上调，LC3 Ⅱ/I比值降低(P<0.05)；与H组比较，HH/R组心肌细胞活力降低，上清液LDH活性升高，自噬小体数量增加，HDAC3和p62表达上调，LC3 Ⅱ/I比值升高(P<0.05)；与HH/R组比较，HH/R+RG组心肌细胞活力升高，上清液LDH活性降低，自噬小体数量增加，HDAC3和p62表达下调，LC3 Ⅱ/Ⅰ比值升高(P<0.05)。结论HDAC3表达上调参与了原代心肌细胞高糖缺氧复氧损伤的过程，与降低细胞自噬水平有关。

简介：摘要目的评价Nr1D1核受体亚家族1，组D，成员1(Rev-erbα)/芳香烃受体核转位蛋白样1受体(Bmal1)信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系。方法SPF级成年雄性SD大鼠，6～8周龄，体重200～220 g，腹腔注射链脲佐菌霉素60 mg/kg建立1型糖尿病模型，糖尿病造模成功后继续饲养8周。取糖尿病大鼠30只，采用随机数字表法分为3组：糖尿病假手术组(DS组，n＝6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组，n＝12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα拮抗剂SR-8278组(DI/R+SR组，n＝12)。另取非糖尿病大鼠18只，采用随机数字表法分为2组：非糖尿病假手术组(NS组，n＝6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NI/R组，n＝12)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR-8278 2 mg/kg。再灌注结束即刻采集颈动脉血标本，采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB和LDH水平；然后处死大鼠，取心肌组织，采用TTC法测定心肌梗死面积百分比，透射电镜下计数自噬小体，采用RT-PCR检测Rev-erbα和Bmal1的mRNA表达水平，Western blot法检测Rev-erbα、Bmal1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和LC3 Ⅰ的表达水平，并计算LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与NS组比较，NI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，DS组血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)；与NI/R组比较，DI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)；与DS组比较，DI/R组心肌梗死体积百分、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)；与DI/R组比较，DI/R+SR组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平降低，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达下调，Bmal1及其mRNA表达上调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)。结论Rev-erbα/BMAL1信号通路可通过调节细胞自噬水平，参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程。