多重PCR在食源性微生物快速检验中的效果

多重PCR在食源性微生物快速检验中的效果

盛映月

重庆市石柱土家族自治县疾病预防控制中心  409100

【摘要】目的 分析多重PCR在食源性微生物快速检验中的效果。方法 于2021年06月-2023年01月期间，选取130例疑似食源性微生物致病患者为研究对象，接受多重PCR快速检验，以临床综合检验为金标准，对比检验结果。结果 多重PCR的阳性检出率、灵敏度、特异度及准确性均与金标准结果无统计学差异（P＞0.05）。结论 多重PCR在食源性微生物快速检验中具有显著效果，可以为临床提供准确的参考依据，用于病情严重程度判断，制定合理的治疗方案。

【关键词】 多重PCR；食源性微生物快速检验；检验效果

食源性微生物是包括细菌、病毒、寄生虫及真菌的总称，通过污染食物链入侵人体，从而引起不同程度的疾病症状，轻者表现为轻微腹泻，重者则会威胁生命安全。目前，在公共卫生领域，食源性微生物仍然是一大挑战，不仅会影响个人身体健康，还会引起较为严重且大规模的社会公共卫生事件，会对国家或全球经济造成巨大损失。由于食源性微生物的广泛存在会对人们健康造成潜在的威胁，因此快速、准确、高效的检验方法尤为重要。但是传统的培养方法虽然可以为临床提供较为准确的参考数据，但是检测过程中耗时较长，针对危急情况无法满足快速检验要求[1]。多重PCR是一种在单次反应中同时扩增多个特定DNA序列的技术，可以对多种病原体同时进行检测，不仅可以减少样本处理步骤和试剂的消耗，还可以缩短检测时间，比较适用于食源性微生物的快速筛查和鉴定。因此，本文将对多重PCR在食源性微生物快速检验中的效果展开讨论。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

于2021年06月-2023年01月期间，选取130例疑似食源性微生物致病患者进行研究，均接受多重PCR检验。其中男72例，年龄18-82岁，均值（50.05±4.23）岁。女58例，年龄18-80岁，均值（50.12±4.19）岁。一般资料对比无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：（1）疑似食源性微生物感染；（2）均接受多重PCR检验；（3）临床资料齐全；（4）检验依从性好。

排除标准：（1）患有其他传染病者；（2）存在严重精神疾病或沟通障碍者；（3）不能积极配合者。

1.2 方法

（1）准备工作：分别取蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺氏菌、阪崎肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌样本1ml，将其充分混合均匀，将处理好的样本进行接种培养，对各致病菌的数量进行计算。大肠埃希氏菌除外，各病菌均按照一定的比例将其均匀涂抹在奶油面包上进行污染处理，要求各病菌在奶油面包中的含量为 1 cfu/g，然后单独加入10 cfu/g的大肠埃希氏菌进行干扰。同时重新制作一份各致病菌混合污染的样本，用于备用检验。（2）多重PCR检验：取致病菌样本的混悬液25g，放置在提前准备好的两个225mL硫乙醇酸盐液体培养基中，放置到恒温36℃条件下分别培养4和6h。另外取增菌液1ml，提取DNA反应时间30s核酸，获取0.2uL的提取物，分别进行95°反应时间4min的一次循环、95°反应时间30s和72°反应时间30s的30次循环，72°反应时间4min，对PCR进行扩增产物电泳进行分析。致病菌样本培养后进行平板分离培养，然后进行生化鉴定和血清学鉴定。

1.3 观察指标

1.3.1分析多重PCR检验诊断结果；

1.3.2 分析多重PCR检验价值。

1.4 统计学分析

数据录入SPSS22.0统计学软件计算。符合正态分布的计量数据，以（±s）表示，以t检验；计数数据以n（%）表示，以X2检验。P＜0.05，对比有统计学意义。

2 结果

2.1分析多重PCR检验诊断结果

临床综合诊断在130例疑似食源性微生物感染患者中，确诊102例（78.46%），经多重PCR检验共检出阳性100例（76.92%），阴性30例（23.08%）。详见表1。

表 1 分析多重PCR检验诊断结果

2.2 分析多重PCR检验价值

多重PCR检验的灵敏度、特异度和准确性与金标准诊断结果对比，无统计学差异（P＞0.05）。详见表2。

表 2 分析多重PCR检验价值

3 讨论

食源性微生物感染是由于摄入被细菌、病毒、寄生虫等微生物污染的食物而引起的疾病，多存在于未经烹饪或烹饪未成熟的肉类、海鲜、蛋奶制品中。目前临床上常见的食源性微生物包括沙门氏菌病、霍乱、大肠杆菌O157:H7感染、李斯特菌病、诺如病毒感染等。由于感染的不同微生物种类不同，导致临床症状也各不相同，其中恶心、呕吐、腹泻等感染食源性微生物的典型症状表现

[2]。需要在出现不适以后及时就医，对食源性微生物的具体类型以及病情严重程度进行确定，予以对症治疗，从而缓解疾病症状，降低疾病危害。如果延误病情可能会危及人民生命安全。因此，快速的检验方法是发现疾病，明确微生物种类的关键[3]。

多重PCR检验是一种分子生物学技术，可以在同一反应管中同时扩增多种不同的DNA序列，通过一次的PCR检验可以检测出多个基因或病原体[4]。目前，多重PCR检验不仅适用于医学诊断，在食品安全、环境监测等多个领域有广泛应用。此外，多重PCR检验还可以用于遗传病诊断、传染病检测、药物残留分析等方面的检验，因此，多重PCR检验具有较为广泛的应用前景和实用价值。将多重PCR检验应用在食源性微生物快速检验中，具有显著的检验效果，进行一次多重PCR检验可以同时检测多种食源性微生物，可以节省更多的检验时间和资源，大大提高了检测效率。相比传统培养方法，多重PCR检验优势明显，不仅具有较高的检验效率，还可以通过同时检测多个基因或标记物来提高诊断的准确性。而且检验流程较为简单方便，无需进行多样本的处理，可以减少操作过程中相关因素对检验结果的干扰。另外，多重PCR检验适用于多种病原体检测，可以提高检测的覆盖面，整体提高食源性微生物诊断准确率。因此，多重PCR在食源性微生物快速检验中具有较高的应用价值[5]。

综上所述，采用多重PCR对食源性微生物进行快速检验，可以准确识别微生物种类以及病情严重程度，为疾病治疗提供准确的参考，提高疾病治疗效果。

参考文献

[1]张明明,肖剑,林秀敏,等. 多重微滴数字PCR同时定量检测三种食源性致病菌DNA拷贝数[J]. 农业生物技术学报,2022,30(3):606-618.

[2]张明娟,刘明明,余秋地,等.十种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法[J].食品与发酵工业, 2022, 48(17):11-11.

[3]崔洁,黄朱梁,严卓彦,等.散装即食食品中3种食源性致病菌多重荧光定量PCR检测方法的建立[J].食品科技, 2023, 48(4):312-319.

[4]胡金强,丁慧敏,詹丽娟,等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报,2022,37(1):12-19.

[5]周海波，沈宇飞，陆兆新，等.金黄色葡萄球菌及毒素多重实时荧光PCR检测技术及其试剂盒性能测试[J].南京农业大学学报, 2022, 45(6):1258-1265.