黑龙江省疾病预防 控制中心, 黑龙江 哈尔滨 150030
【摘要】目的:探讨不同剂量虫草菌丝体胶囊免疫调节功能。方法:应用经口灌胃方式给予小鼠不同剂量虫草菌丝体胶囊30天,进行淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、抗体生成细胞检测实验、血清溶血素实验(半数溶血值HC50测定)、碳粒廓清实验、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性实验。结果:虫草菌丝体胶囊细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性三个方面结果为阳性。结论:虫草菌丝体胶囊具有增强小鼠免疫力功能。
【关键词】虫草菌丝体;免疫功能
冬虫夏草是一类菌虫复合体,是我国传统名贵中药材,与人参、鹿茸并称“中药三大宝”[1]。冬虫夏草生长环境独特,过度采挖,资源衰竭。随之,人工培养、液体发酵获得的虫草菌丝体已成为研究重点。本研究以虫草菌丝体为研究对象,对其免疫功能进行研究。
1材料和方法
1.1材料 受试物由西藏某公司提供。主要试剂包括:刀豆蛋白A(ConA)、补体(豚鼠血清)、鸡红细胞和YAC-1细胞等。
1.2动物 160只SPF级、雌性、体重18-22g的ICR小鼠由辽宁长生生物技术有限公司提供。
1.3 剂量选择与受试物给予方法
将160只小鼠分为4个实验组,每个实验组设三个剂量组(1.60g/kg·BW、1.07g/kg·BW、0.53g/kg·BW)和一个阴性对照组。免疫一组进行ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定;免疫二组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和迟发型变态反应实验(耳肿胀法);免疫三组进行血清溶血素测定(半数溶血值HC50测定)和抗体生成细胞(PFC)检测实验;免疫四组进行进行脏器/体重比值测定和碳粒廓清实验。三个剂量组动物分别给予不同浓度受试物,阴性对照组给予相应体积0.7%羧甲基纤维素钠溶液。各组动物均采用经口灌胃方法、按20mL/kg·BW体积连续灌胃30天后,进行免疫学实验。
1.4实验方法和数据统计
按 《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)进行各实验,应用Stata统计软件对各实验数据结果进行统计分析。
2结果
2.1虫草菌丝体胶囊对小鼠体重的影响
经口给予小鼠不同剂量虫草菌丝体胶囊30天后,各剂量组小鼠体重、脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与阴性对照组比较,均无显著差异(P>0.05),虫草菌丝体胶囊对小鼠体重和脏器/体重比值无影响。
2.2 虫草菌丝体胶囊对小鼠细胞免疫功能的影响
表 1 虫草菌丝体胶囊小鼠细胞免疫实验结果( )
组 别 (g/kg·BW) | 动物数 (只) | 淋巴细胞增殖能力 | 右、左耳重之差 (g×10-3) |
1.60 | 10 | 0.089±0.0246 | 9.52±1.775* |
1.07 | 10 | 0.093±0.0208 | 12.32±3.492** |
0.53 | 10 | 0.079±0.0069 | 9.51±2.057 |
阴性对照组 | 10 | 0.095±0.0217 | 8.09±1.368 |
注:*与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05),** 与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)。
由表1可见,1.60g/kg·BW、1.07g/kg·BW剂量组与阴性对照组比较,均有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。虫草菌丝体胶囊能够增强小鼠迟发型变态反应。
2.2 虫草菌丝体胶囊对小鼠体液免疫功能的影响
表 2 虫草菌丝体胶囊对小鼠体液免疫实验结果 ( )
组 别 (g/kg·BW) | 动物数 (只) | 空斑数 (/106脾细胞) | HC50 |
1.60 | 10 | 234.5±63.53** | 92.6±15.85** |
1.07 | 10 | 270.5±78.69** | 88.5±13.26* |
0.53 | 10 | 167.0±64.39 | 76.0±20.76 |
阴性对照组 | 10 | 126.5±78.35 | 71.4±13.30 |
注:*与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05),** 与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)。
由表2可见,小鼠抗体生成细胞检测实验1.60g/kg·BW、1.07g/kg·BW剂量组与阴性对照组比较,均有显著性差异(P<0.01,P<0.01)。血清溶血素实验1.60g/kg·BW、1.07g/kg·BW剂量组与阴性对照组比较,均有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。虫草菌丝体胶囊能够增强小鼠抗体生成细胞功能,能够增强小鼠血清溶血素含量。
2.3 虫草菌丝体胶囊对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响
表 3 虫草菌丝体胶囊对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响 ( )
组 别 (g/kg·BW) | 动物数 (只) | 吞噬指数 | 吞噬百分率 (%) | 吞噬指数 |
1.60 | 10 | 5.89±1.921 | 32.7±5.96 | 0.55±0.100 |
1.07 | 10 | 5.32±1.003 | 35.6±5.92 | 0.63±0.141 |
0.53 | 10 | 5.82±1.064 | 34.9±8.37 | 0.63±0.111 |
阴性对照组 | 10 | 5.01±0.791 | 36.1±7.86 | 0.63±0.144 |
注:各实验组与阴性对照组比较,均无显著性差异P>0.05。
由表3可见,小鼠抗单核-巨噬细胞实验,各剂量组与阴性对照组比较,均无显著性差异(P>0.05),即虫草菌丝体胶囊对小鼠单核-巨噬细胞功能无影响。
2.4 虫草菌丝体胶囊对小鼠NK细胞活性的影响
表 4 虫草菌丝体胶囊对小鼠NK细胞活性的影响 ( )
组 别 (g/kg·BW) | 动物数 (只) | NK细胞活性 (%) |
1.60 | 10 | 29.80±2.205** |
1.07 | 10 | 26.78±5.180** |
0.53 | 10 | 22.74±1.416** |
阴性对照组 | 10 | 15.23±0.807 |
注: **与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)。
由表4可见,虫草菌丝体胶囊各剂量组NK细胞活性与阴性对照组比较,均有显著性差异(P<0.01)。虫草菌丝体胶囊对NK细胞活性有增强作用。
3 讨论
随着冬虫夏草资源的不断减少,其替代品虫草菌丝体的研究越来越受到关注。已有研究表明,虫草菌丝体化学成分[2]和菌丝体多糖生物活性存在差异[3],本研究以虫草菌丝体为研究对象,对其免疫调节功能进行研究。
本研究结果显示1.07g/kg·BW剂量虫草菌丝体胶囊小鼠迟发型变态反应实验、抗体生成细胞检测实验、血清溶血素实验和NK细胞活性实验均为阳性,即1.07g/kg·BW剂量虫草菌丝体胶囊能够通过增强细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性三种途径增强小鼠免疫力,具有增强小鼠免疫力功能。
参考文献
[1]付宝慧,王颖.虫草菌丝体与天然虫草化学成分比较研究[J].中国社师,2018,34(30):7-9.
[2]夏元初,杨敏,陈生茂.冬虫夏草和虫草头孢菌丝体中微量元素的测定[J].中成药,1985,(10):29-30.
[3]袁源,戚梦,张凤培,等.4种虫草相关真菌菌丝体粗多糖的生物活性评价[J].菌物学报,2021,40(06):1446-1457.
作者介绍:王明秋(1978-),女,硕士研究生学历,副主任医师,主要从事卫生毒理工作。