摘要目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2，对新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞自噬作用及其机制。方法选择80只新生10日龄SD大鼠(受试鼠)为研究对象。对其中60只建立HIBD模型，并根据这60只受试鼠缺氧缺血(HI)后的处死时间点，将其分别纳入HI后4、8、12、24、72 h组(除HI后24 h组为20只受试鼠外，其余均为10只)。对剩余的20只受试鼠仅分离右颈总动脉，既不结扎右颈总动脉，亦不进行缺氧处理，处死时间对应于HI后24 h组，纳入假手术组(n＝20)。①对HI后4、8、12、24、72 h组及假手术组(各组受试鼠均为10只)，获取海马组织标本后，采用蛋白质印迹法，检测Sestrin2、肝酶B1(LKB1)、磷酸化LKB1(p-LKB1)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链(LC)3及凋亡相关蛋白活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(CC)3在受试鼠海马组织中的相对表达量，并采用方差分析及最小显著性差异(LSD)-t法，对上述指标进行6组之间，或HI后4、8、12、24、72 h组分别与假手术组的组间比较。②对于HI后24 h组与假手术组各组剩余的10只受试鼠，获取大脑标本后，采用免疫组织化学SP法，检测海马组织中p-AMPK、LC3及CC3表达水平，包括积分吸光度(IA)值测定及染色结果，并采用t检验，对这3项指标的IA值进行2组比较。本研究通过四川大学动物实验伦理委员会批准[审批文号：SYXK(川)2013-185]。结果①蛋白质印迹法检测结果显示，HI后4、8 h组受试鼠海马组织中p-mTOR及CC3水平，均分别高于假手术组；HI后12、24 h组受试鼠海马组织中Sestrin2、p-LKB1、p-AMPK、p-mTOR、Beclin1、LC3及CC3水平，均分别高于假手术组；HI后72 h组受试鼠海马组织中Sestrin2及CC3水平，均高于假手术组；并且这些差异均有统计学意义(P<0.05)。其中，HI后8 h组受试鼠海马组织中p-mTOR水平最高，HI后24 h组受试鼠海马组织中Sestrin2、p-LKB1、p-AMPK、Beclin1、LC3及CC3水平均最高。6组受试鼠海马组织中LKB1、AMPK及mTOR水平比较，以及HI后4、8、12、24、72 h组受试鼠海马组织中LKB1、AMPK及mTOR水平分别与假手术组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。②免疫组织化学SP法IA值检测结果显示，HI后24 h组受试鼠海马组织中p-AMPK、LC3及CC3表达水平分别为(24 106±2 393)、(41 892±4 094)、(61 670±4 696)，均高于假手术组的(15 593±1 575)、(18 941±2 131)、(20 279±1 912)，并且差异有统计学意义(t＝9.398、P＝0.035，t＝15.723、P<0.001，t＝25.812、P<0.001)。免疫组织化学SP法染色结果显示，HI后24 h组受试鼠海马组织中p-AMPK、LC3及CC3呈阳性细胞的表达水平较高。结论10日龄新生SD大鼠发生HIBD时，其大脑海马组织中Sestrin2可能通过LKB1/AMPK/mTOR信号通路，参与调节神经细胞自噬及凋亡。
