正交实验优化当归多糖的提取工艺研究

正交实验优化当归多糖的提取工艺研究

戴雅琴

戴雅琴（湖北省中山医院药学部430032）

【摘要】目的优选当归多糖的提取工艺，建立当归多糖的含量测定方法。方法以多糖提取率为指标，以浸提温度、浸提时间、加水量和浸提次数为考察因素，采用正交试验法，优选当归多糖的提取工艺，采用紫外分光光度法测定多糖的含量。结果优选出的当归多糖最佳提取工艺为：当归药材经乙醇热处理后，加药材10倍量水，80℃浸提1次，浸提时间2h，提取液经除蛋白，浓缩，乙醇沉淀。结论优选出的工艺合理可行，为当归多糖的提取分离纯化及含量测定提供了依据。

【关键词】当归正交试验多糖

【中图分类号】R284.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）22-0079-02

多糖又称多聚糖，其广泛存在于动物、植物及微生物中，具有复杂、多方面的生物活性和功能。20世纪60年代后，随着分子生物学的发展，多糖所具有的增强免疫力的功能被广泛认同，并被广泛应用于肿瘤化疗，对多糖的研究与开发已越来越引起人们的关注[1]。当归为伞形科植物当归（Angelicasinensis(Oliv.)Diels）的干燥根，主要成分含有挥发油、有机酸以及多糖类。现代研究表明，当归补血、活血的主要物质基础为当归多糖，并具有抗肿瘤、增强免疫力的功效[2]。但当前当归多糖的研究报道较少见，本实验对当归多糖的提取工艺进行正交优化验证。

1实验材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验药材药材购自安徽省亳州市药材市场，经鉴定为伞形科科植物当归（Angelicasinensis(Oliv.)Diels）的干燥根。

1.1.2实验仪器FW100型高速万能粉碎机（郑州市荥阳华盛仪器厂）；UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；电热恒温干燥箱202型（上海索谱仪器有限公司）；J-25型高效冷冻离心机（美国BECKMAN公司）；薄膜旋转蒸发仪（BUCHIRotavaporR114）；FA1104型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；其它常规仪器。

1.1.3实验试剂葡萄糖（国药集团化学试剂有限公司，批号：F20110215）；蒽酮（中国医药集团上海化学试剂公司，批号20110723），其余试剂均为分析纯。

1.2当归多糖的提取

1.2.1药材的预处理取当归原药材，粉碎，过2号筛；用6倍量乙醇溶液（80%）回流处理2次，每次1h，弃去药液，取药渣，真空干燥，得当归粉。

1.2.2多糖的提取取处理过的干燥当归粉9份，每份20g，采用L9（34）正交试验方案（因素水平见表1），用热水浸提，提取液离心(6000r/min×10min)，取上层清液，调节上清液pH=4.6，离心(6000r/min×10min)，除去不溶性蛋白，取上清液，浓缩，浓缩液缓缓加入5.3倍量95％乙醇，冷藏静置，过夜，抽滤，滤饼用无水乙醇、丙酮洗涤脱色，真空干燥得当归多糖提取物[3]。

表1因素水平表

按照上述条件，每份平行操作3次，取平均值，以标准曲线法测定多糖含量，计算多糖提取率。

1.2.3当归多糖提取率的计算

多糖提取率(％)=提取物中多糖质量（g）/原药材质量（g）×100

1.3当归多糖的含量测定

1.3.1对照品溶液的制备精密称定105℃烘干至恒重的葡萄糖对照品约100mg，加水溶解，定容至100mL，摇匀即得。

1.3.2样品液的制备精密称定多糖提取物各5mg，加水溶解，定容至100mL，摇匀即得。

1.3.3标准曲线的制定精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL对照品溶液，分别加水稀释，定容至100mL，摇匀，即得系列对照品溶液。分别精密吸取1.0mL系列对照品溶液置10mL具塞试管中，分别加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4.0mL，摇匀，立即浸入冰水浴中冷却，加毕，浸入沸水浴中，反应10分钟，取出浸入冰水中冷却，室温放置10分钟，照紫外分光光度计，测定580nm处吸光度A，以含量C（μg/mL）对应吸光度A回归。以空白溶液校零，空白溶液操作同上。

1.3.4样品含量测定精密移取样品溶液1mL，同标准曲线项下方法，测定吸光度值。

2实验结果

2.1标准曲线回归方程为y=7.276x+0.0264(r=0.9998)。

2.2正交试验结果采用L9（34）正交试验方案，用热水浸提，离心，沉淀，冷藏静置，抽滤，洗涤，干燥，得当归多糖提取物，多糖提取率结果平均值如下：

注：**——极显著性差异；*——显著性差异

正交试验以及方差分析结果表明，当归多糖提取率与浸提温度、浸提时间、浸提次数之间存在一定的显著性差异，结果表明当归多糖的最佳提取工艺条件为：A2B2C3D1，即加药材10倍量水，80℃浸提1次，浸提时间2h。

3讨论

当归中多糖的含量较高，然而目前采用的提取分离手段简单，所得粗多糖糖含量较低，质量较难控制，在传统制剂的制备过程中，有时作为杂质被丢弃，造成资源浪费，因此必须加强对当归多糖的提取、分离、纯化以及化学结构解析研究，这对于多糖的生物活性、作用机理、构效关系的研究具有重要意义。

本文中当归药材细粉经乙醇（80%）热处理后，可除去大部分的单糖、低聚糖以及其它一些小分子的物质，再用水提醇沉法分离纯化，经过除蛋白，得到较为纯净的多糖提取物。该法以水为提取溶剂，既能减少对多糖结构的破坏，又能有效提高多糖的提取率，为当归多糖的提取分离纯化研究提供了重要的依据，对于当归多糖的制剂研究具有重要的指导意义。同时，所得多糖纯度较好，对于当归多糖保健食品药品的研制奠定了一定的基础，对于中药材当归资源的综合利用以及保值增值带来重大的社会和经济效益。

参考文献

[1]章栋梁,郭向莹,余南静,等.多糖生物活性及应用研究新进展[J].湖北农业科学,2009,9:2282-2285.

[2]胡小平,李玉云,李先何,等.当归多糖的成分及药理学研究新进展[J].中药材,2004,27(1):70-72.

[3]盛小莉,王凯平.正交设计优化当归多糖提取工艺[J].中成药,2008,30(12):1862-1864.