浅谈疟原虫镜检及鉴定方法

浅谈疟原虫镜检及鉴定方法

韩秀丽

韩秀丽

（河南省新乡市传染病医院453000）

【摘要】疟疾是我国五大寄生虫病之一，也是世界六大热带病之一，主要分布在热带、亚热带各国。我国经过积极开展疟疾防治工作，现基本已无当地病例，但近年来四种疟疾均有输入病例。2013年3月、2014年7月在我院发热门诊分别检出一例输入性恶性疟原虫。通过镜检能够及时发现疟原虫。本文简要讲述了薄血膜和厚血膜的制作方法，并陈述了疟原虫类型及疟原虫临床分期，最后疟原虫镜检及鉴定需要注意的事项，旨在提高疟原虫镜检及鉴定水平。

【关键词】疟原虫镜检鉴定方法

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）21-0258-02

我国积极开展疟疾防治工作，虽然取得了很好的成果，但是由于我国的流动人口较多，随着出国务工人员的增多，使得许多地方仍存在疟疾病例。诊断疟疾和早期治疗疟疾的意义重大，现结合工作经验简述疟原虫镜检检测及鉴定的方法。详细内容如下：

一、血片的制作方法

将载玻片从右向左分成6等分，在第1格和第2格贴上编号和标签，在第3格的正中央涂圆形厚血膜，第4格前缘至第6格的中部涂舌状薄血膜。血片如果作为标本，则需要将薄血膜和厚血膜涂在同张玻片上。发热病人和门诊的血片每片一个人，涂一个薄血膜和两个厚血膜，避免血膜脱落对检查结果造成影响[2]。

1、厚血膜的制作方法

用推片的一角刮取约4-5μl的血量，确保载玻片和血滴充分接触，由里到外一个方法旋转多圈，最后回到中心，涂成直径0.8-1cm的圆形厚血膜。厚血厚血膜不能出现划痕，而且薄厚均匀。因为，厚血膜太厚极易脱落，厚血膜太薄则不能达到检查要求[3]。

2、薄血膜的制作方法

用推片的一端边缘的中点刮取约1-1.5μl的血量，确保载玻片和血滴充分接触，形成25-30°的夹角，待血液向两侧扩展到2厘米左右时，均匀而迅速地轻轻向左推出舌状的薄血膜，需要注意的是，推制的速度不能太快，也不能太慢，要均匀适中。

3、注意的事项

血片制作时，一定要用清洁的载玻片，手持载玻片的两侧，避免沾上油污，否则将会影响镜检的结果。固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜。干燥厚血膜时坚决不能加热，否则原虫会变形，在很大程度上影响镜检结果。冲洗染液时，用盆接满水后漂洗，切勿水龙头下冲洗，以免冲走厚血膜，不要将染液倒掉后再漂洗，以免染料渣沉着在血膜上。

4、制作血片的质量要求

吉氏染色后，薄血膜要平整，无皱折和空泡，没有划痕，厚血膜不能有脱落，呈现的颜色是紫兰色[1]。

二、正确的采血时间，提高镜检鉴定质量

在人体内寄生的疟原虫总共有四种，恶性疟和间日疟可以混合感染，卵形疟和三日疟比较少见。恶性疟和间日疟可以分为间歇期、出汗期、发热期、发冷期。疟原虫在发热期和发冷期比较容易检出。发热期的疟原虫主要是小滋养体，这个时期的原虫刚刚分裂不久，有很多虫体，引起极易检出。发冷期的疟原虫基本都是环状体，极易检出。

在间歇期进行血检有利于鉴定和分类疟原虫，这个期间的虫子数量虽然少，但是虫子的体积较大，极易识别，因此有利于虫子种类的鉴别。

临床认为恶性疟在间歇期不宜进行血检，主要原因是在这个时期，很多原虫进到内脏毛细血管，而外周血虫体比较少，这个时候尚未出现配子体，因此血检的结果可能是阴性。

三、镜检分析

疟原虫镜检的顺序是先厚血膜后薄血膜

厚血膜的红细胞重叠，血量较多，而且干燥比较慢，导致疟原虫皱缩，虫体变形，相对薄血膜来说，虫体和虫种的鉴别难度较大，但是由于原虫相对集中，因此极易发现。鉴别薄血膜的要素是疟色素，疟色素能够区分其他生物和疟原虫的不同。

薄血膜的原虫形态较清晰，而且结构完整，能够辨别原虫的形态特征和种类，但是虫数较少，极易出现漏检现象，因此需要注意的问题有很多。首先要查看寄生的红细胞的具体变化。恶性疟在发育期红细胞中寄存，红细胞的体积不会变大，但是滋养体期开始出现红色的、粗大的茂氏小点。间日疟大多在网织红细胞中寄存，导致红细胞的体积变大，滋养体期开始出现红色的、细微的薛氏小点。其次要查看环状体的数目和大小。恶性疟环状体比较小，有一个或两者或两个以上的核，体积大概是红细胞直径的五分之一，虫体一般在红细胞的边缘寄存，呈现一种鸟飞状。间日疟的环状体比较大，有一个或者两个核，体积大概是红细胞直径的三分之一。接着要查看配子体的形态和疟色素的着色情况和分布情况。恶性疟配子体呈现的是腊肠形，疟色素在核周围分布，或疏松或密布，呈现棕褐色或者是黑褐色。间日疟配子体体积较大，呈现的是圆形，疟色素的分布较均匀，呈现的黄绿色或者黄褐色。最后要查看相同血片上各期虫体的具体分布。恶性疟在的配子体和环状体出现在外周血片，不容易看到裂殖体和滋养体。间日疟各期形态出现在外周血片。假如看见裂殖体和滋养体出现在外周血片，则可以判定为间日疟[4]。

四、讨论

病原学诊断和传统的镜检都是诊断疟疾的重要方法，优点的价格低廉，并且对设备没有很高的要求，便于在基层展开。及时、准确的诊断有利于治疗和预防疟疾，降低疟疾的发病率，提高国民的身体素质。

参考文献

[1]王伟明,金小林,曹俊,杨国静,周华云,李菊林,顾亚萍,梁幼生,高琪.江苏省疟疾流行地理信息系统数据库的建立[J].中国热带医学,2014,1(30):214-215.

[2]刘英杰,李莹,潘艳艳,朱晓彤,刘军,单风平,曹雅明.不同毒力疟原虫感染早期根治性治疗对免疫记忆形成影响的研究[J].微生物学杂志,2013,8(10):321-321.

[3]张小萍.ICT恶性疟/间日疟免疫层析分离测试法对卵形疟的检测[J].国外医学.寄生虫病分册,2012,9(25):720-721.

[4]陈勤,张国庆,郑彬,沈玉娟,田桢干,曹建平,徐馀信,冯晓平,何宇平,汤林华.环介导等温扩增检测恶性疟原虫的应用研究[J].中国病原生物学杂志,2012,4(14):366-367.