RP-HPLC法测定大七厘散中三七的含量

RP-HPLC法测定大七厘散中三七的含量

湛建峰

岳阳市食品药品检验所湖南岳阳414000

【摘要】目的建立大七厘散中三七主要成分的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量，色谱柱为HypersilC18（BDS）柱（250×4.6mm×5μm），流动相为乙腈-水，梯度洗脱，流速为0.8ml?min-1，检测波长为203nm，柱温为35℃。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1均得到良好分离，线性关系良好（r≥0.9990）。加样回收率均在95%～100%，RSD＜3%。结论本法简便、可靠、准确，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】大七厘散；高效液相色谱法；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1

SimultaneousdeterminationofNotoginsenosideR1，GinsenosideRg1andGinsenosideRb1inDaqiliPowderbyRP-HPLC

ZHANJian-feng（HunanYueyangInstituteforFoodandDrugControl，hunanYueyang414000，China）

Abstract：ObjectiveToestablishamethodofRP-HPLCforthesimultaneousdeterminationofNotoginsenosideR1，GinsenosideRg1andGinsenosideRb1inDaqiliPowder.Methods：TheHypersilC18（BDS）（250mm×4.6mm，5μm）columnwaselutedwithmobilephaseconsistedofacetonitrile-wateratthecolumntemperature35℃，gradientelution.Theflowratewas0.8ml?min-1anddetectivewavelengthwas203nm.ResultsNotoginsenosideR1，GinsenosideRg1andGinsenosideRb1werewellseparatedwithgoodlinearity（r≥0.9990）.Therecoveryrateswere95%—100%（RSD<3%）.ConclusionThemethedsissimple，reliableandaccurate.ItcanbeappliedtothequalitycontrolofDaqiliPowder.

Keywords：DaqiliPowder；HPLC；NotoginsenosideR1；GinsenosideRg1；GinsenosideRb1

大七厘散为《中国药典》2015年版一部[1]收载品种，由煅自然铜、土鳖虫（炒）、酒大黄、骨碎补、当归尾（酒制）、乳香（制）、没药（制）、硼砂（煅）、血竭、三七、冰片等十一味药组成，具有化瘀消肿，止痛止血的功效，多用于跌打损伤、瘀血疼痛、外伤止血等。方中三七具有散瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛，为处方中的重要功效组分之一。现行质量标准及文献[2]中对三七仅进行薄层鉴别，有必要对其进行含量测定研究。

1仪器与试药

1.1仪器

LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），，VWD紫外检测器；AE240电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）。

1.2试药

三七皂苷Ｒ1对照品（批号110745-201318）、人参皂苷Ｒg1对照品（批号110703-201529）、人参皂苷Ｒb1对照品（批号110704-201424），均购自中国食品药品检定研究院；大七厘散样品：A企业批号1～2，B企业批号3～6；乙腈为色谱试剂，重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性

色谱柱为HypersilC18（BDS）（250×4.6mm，5μm）；流动相：以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速0.8ml/min，柱温35℃。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。

2.2溶液的制备：

2.2.1对照品溶液的制备分别取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1各适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R10.1mg、人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg的混合溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取本品粉末，研细混匀，取约2.0g，精密称定，加甲醇80ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次（30ml、25ml、20ml），合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15ml，弃去氨洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备取处方中除三七外的其它药材，按制备工艺制成缺三七的阴性对照样品，按“2.2.2”项方法操作，制备阴性对照溶液。

2.3专属性试验

分别精密吸取2.2项下对照品溶液、供试品溶液及缺三七的阴性对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液能基线分离，理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。供试品色谱图中，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1色谱峰与相应的对照品色谱峰保留时间一致，缺三七的阴性对照样品无干扰（见图1）。

A—对照品；B—样品；C—阴性对照样品

a.三七皂苷R1；b.人参皂苷Rg1；c.人参皂苷Rb1

图1HPLC色谱图

2.4线性关系考察

分别精密吸取2.2.1项下的的对照品溶液1、2、5、10、20μl，进样，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标（C），峰面积积分值为纵坐标（A），绘制标准曲线。

2.5精密度

取同一供试品溶液（批号1），重复进样6次，记录色谱图，计算各组分峰面积RSD值。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1峰面积的RSD值分别为0.18%、0.25%、0.49%，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性

取同一供试品溶液（批号1），分别于溶液配制后的0、4、8、12、18、24小时进样，记录色谱图，计算各组分峰面积RSD值。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1峰面积的RSD值分别为0.98%、1.32%、1.13%，表明供试品溶液在24小时内稳定。

2.7重复性

取同一批（批号1）供试品，按“2.2.2”项下制备方法，平行制备6份，在“2.1”项色谱条件下检测，记录色谱图，计算三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1峰面积的RSD值分别为0.98%、1.32%、1.13%。表明方法重复性良好。

2.8加样回收率

精密称取已知含量的样品（批号1，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1含量分别为0.53mg/g、3.02mg/g、1.87mg/g）供试品6份，研细，取细粉1.0g，置200mL具塞锥形瓶中，分别加入新配制对照品溶液（含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1分别为0.514mg/ml、2.960mg/ml和1.850mg/ml）1mL，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.2”项色谱条件分析，记录色谱图，按标准曲线法计算各组分含量。结果各组分平均加样回收率分别为99.1%、97.1%、96.7%，RSD分别为2.6%、1.4%、0.9%，表明该方法准确度高。结果见表3。

2.9样品测定

取大七厘散供试品6批，按“2.2.2”项下方法制备，以“2.1”项色谱条件进行分析，记录色谱峰峰面积，计算各成分的含量，结果见表4。

3讨论

大七厘散由11味药材制得，且为全生粉入药，所含成分尤其复杂，参考文献[3-4]及《中国药典》中相关品种方法进行供试品溶液的制备考察，最后确定了制备方法。

本研究先后考察了甲醇-0.1%乙酸溶液系统、乙腈-0.1%乙酸溶液系统和乙腈-水系统作为流动相，实验过程中发现仅在采用乙腈-水系统时，基线较平稳，可能因末端吸收时乙酸酸性溶剂产生强烈吸收，严重干扰组分的吸收测量。故最终选择了乙腈-水系统。

参考文献：

[1]中国药典[S].一部.2015：495

[2]陈惠玲，胡珊梅，陈洁，等.大七厘散的质量标准研究[J].中国药物评价.2015，32（2）：83-86.

[3]郭冲，郜玉钢，臧埔，等.HPLC法同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷[J].中草药.2014，45（14）：2009-2013.

[4]杨亚丽，杨瑞瑞，杨燕子.HPLC法测定消栓通络胶囊中人参皂苷Rg1的含量[J].陕西中医.2009，30（7）：891-892