简介：【摘要】目的：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）实时荧光定量PCR核酸检测的性能验证与比对分析。方法：使用实时荧光定量PCR检测新型冠状病毒核酸参考品、室间质控品及临床样本。结果：试剂检测符合率为100％，试剂检出下限为200copies/mL。L1参考品的ORF-1ab和N基因的Ct值批间CV分别为2.45％和4.11％，L2参考品的ORF-1ab和N基因的Ct值批间CV分别为3.5％和3.43％，精密度CV≤5％。试剂无交叉反应、抗干扰实验阳性。同品牌扩增试剂在不同扩增系统的比对一致性为100％。结论：SARS-CoV-2实时荧光定量PCR核酸检测性能较好，可用以临床推广。

简介：目的：分析荧光定量聚合酶链反应（(PCR）)检测乙型肝炎病毒（(HBV）)-核酸（(DNA）)及酶联免疫吸附试验（(ELISA）)法乙肝免疫学检测结果。方法：选择2022年1月至2023年1月肇庆市高要区人民医院271例检查乙肝病毒的患者，采集患者血清标本，分别通过荧光定量PCR检测HBV-DNA及ELISA法检测乙肝免疫学指标检测，分析比较检测结果。结果：乙肝病毒标志物ELISA检验乙肝五项的检验阳性率比较差异有统计学意义（(χ2=823.511，P=0.000）)。结论：ELISA法乙肝免疫学检测结果不同的患者HBV-DNA病毒载量不同，ELISA法乙肝免疫学检测结果能提示乙肝患者病毒复制、感染等情况。

简介：1985年Cetus公司的Mullis发明的聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）是现代分子生物学研究中的一项非常重要的技术，它可在短时间内在试管中获得数百万特异DNA序列的拷贝，从而很容易地对目的基因进行分析、鉴定以及其它操作。这一技术现已广泛应用于生物学的各研究领域。PCR的定量实质是核酸的体外扩增，当人们利用技术扩增出大量的特异DNA序列后，还必须对这些PCR产物进行定性或定量检测，特别是临床检验中，定量分析PCR产物可以为临床诊断、疗效观察等提供更为准确的信息。另外，在研究基因的表达调控研究中，经常利用RT-PCR定量检测某一特定的转录mRNA，因此，建立灵敏、准确、重复性好的PCR产物定量检测法是目前PCR及其相关技术研究的特点，电是定量PCR技术的基础。本文将对这一技术近年来的研究进展状况作一简要综述。

简介：摘要：目的：分析和研究荧光定量PCR检测血清HBV-DNA含量在乙型肝炎诊断中的应用价值。方法：对2021年1月到2022年9月前来我院就诊的乙型肝炎患者122例的血清标本进行监测，应用荧光定量PCR检测HBV-DNA的数量予以对比，并且应用ELISA法监测乙型肝炎标志物，分析检测结果。结果：不同病型乙型肝炎和其HBV－DNA含量没有显著的相关性；49例HBsAg（＋）／HBeAg（＋）／HBcAb（＋）患者，HBV－DNA检出率100%（49／49）；48例HBsAg（＋）／HBeAb（＋）／HBcAb（＋）患者，HBV－DNA检出率是66.67%（32／48）；6例HBsAg（＋）／HBcAb（＋）患者，HBV－DNA检出率是66.67%（4／6）。结论：乙肝病型和血清HBV－DNA水平没有相关性，和HBV－M表现模式有一定的关联；通过荧光定量PCR能够将HBV实际感染及复制状况检测出来，为诊断及治疗乙型肝炎提高参考依据。

简介：

简介：

简介：摘要目的了解胃窦胃体联合培养和荧光定量PCR（qPCR）法在临床幽门螺杆菌（Hp）诊断和耐药检测中的应用价值。方法收集湖州市中心医院2018年7月至2019年3月接受胃镜检查的384例患者胃窦胃体黏膜组织，进行Hp分离培养及常用抗菌药物的药敏试验，并提取患者胃窦处样本的DNA，采用qPCR法进行Hp核酸检测及其对左氧氟沙星和克拉霉素耐药性的检测。结果胃窦胃体联合培养Hp阳性检出率（147例，38.28%），与qPCR对Hp阳性检出率（164例，42.71%）比较差异无统计意义（P>0.05）。qPCR对左氧氟沙星和克拉霉素耐药菌的检出率（56.10%和57.93%）均高于联合培养（42.18%和36.73%）（χ2=6.009和13.950，P均<0.05）。qPCR与胃窦胃体联合培养对左氧氟沙星耐药菌检出不一致率为43.48%，对敏感菌检出的不一致率为36.11%；对克拉霉素耐药菌检出不一致率为52.63%，对敏感菌检出的不一致率为30.43%。结论临床采用胃窦胃体联合培养的方法将极大地提高Hp的检出率；胃窦单部位qPCR在临床Hp感染的诊断中有一定优越性。qPCR和分离培养法对于Hp左氧氟沙星、克拉霉素耐药菌的检出率的不一致性高，Hp耐药性检测仍应以分离培养方法为准。

简介：

简介：目的定量研究细胞间粘附分子基因（ICAM-1mRNA）在不同病理类型颅咽管瘤的表达差异及意义。方法收集30例经手术治疗的颅咽管瘤标本，采用SYBR荧光实时定量PCR法检测ICAM-1mRNA在肿瘤组织的表达，并对表达结果行统计学分析。结果造釉细胞型颅咽管瘤ICAM-1mRNA表达量为（62．18±6．43）×10^3copies／μg，鳞状乳头型颅咽管瘤ICAM-1mRNA表达量为（1．13±0．17）×10^3copies／μg，造釉细胞型颅咽管瘤ICAM-1mRNA表达量显著性高于鳞状乳头型颅咽管瘤（P〈0．01）。结论两种病理类型颅咽管瘤ICAM-1mRNA表达存在显著性差异，此差异性可能与两种病理类型颅咽管瘤不同的肿瘤炎症有关。

简介：摘要目的分析探讨荧光定量PCR技术在α地中海贫血基因筛查与诊断中的实际应用。方法选择2014年1月-2014年12月之间来我院进行α地中海贫血基因筛查诊断的800例孕妇作为观察对象，使用荧光定量PCR技术进行筛查。对其中得到的阳性标本使用传统基因诊断方式测定；同时通过血红蛋白电泳法筛查800例孕妇是否存在α地中海贫血。结果800例孕妇中有13例为α地中海贫血基因携带者，检出率为1.63%；这13例的基因分型分别为13例为缺失型、0例为突变型；应用传统经检测方法对孕妇进行筛查，得到与荧光定量PCR技术相同的结果；应用血红蛋白毛细管电泳技术得到的α地中海贫血孕妇有4例，检出率为0.5%。结论应用荧光定量PCR技术对育龄期的孕妇进行α地中海贫血筛查的结果可靠，对于预防缺陷新生儿的出生具有非常重要的意义。

简介：摘要目的探讨建立荧光定量PCR法直接检测临床标本的肺炎链球菌并对其进行血清学分型的可行性。方法针对肺炎链球菌种属特异性基因lytA及该菌常见的21种血清型设计荧光探针及引物，构建Taqman荧光定量PCR法。使用荚膜肿胀试验作为金标准检测PCR方法的灵敏度及特异度，选择1209份临床样本同时做培养及PCR方法，比较两种方法的肺炎链球菌检出率及血清分型情况。结果构建Taqman荧光定量PCR法灵敏度及特异度分别为94.2%及70%。Taqman荧光探针PCR法鉴定的主要血清型别为19F（43.7%）、6A/B（17.2%）、23F（13.8%）、19A（6.8%），未能分型的肺炎链球菌为17.2%。荚膜肿胀试验鉴定的主要血清型别为19F（39.1%）、6A/B（17.2%）、23F（9.2%）、19A（5.7%），未能分型的肺炎链球菌为28.7%。1209份临床样本仅培养出16份肺炎链球菌，Taqman荧光定量PCR法检出44例肺炎链球菌，其对临床样本肺炎链球菌阳性检出率更高，其差异有显著统计学意义（χ2=13.39，P<0.001）。结论Taqman荧光探针PCR法灵敏度高、特异度好，能直接对临床样本进行血清学分型，可大幅度缩短肺炎链球菌检测的报告时间。

简介：摘要目的比较荧光定量PCR检测HBV(乙肝病毒)-DNA与ELISA(酶联免疫吸附法)检测HBsAg(乙肝表面抗原)诊断乙型肝炎的价值。方法分别纳入198份HBsAg有反应性标本(s/co≥1)，作为A组，105份HBsAg灰区可疑标本(0.8≤s/co＜1)，作为B组，990份HBsAg无反应性标本(s/co＜0.8)，做为C组；对三组标本进行FQ-PCR(荧光定量聚合酶链反应)检测，将A组阴性标本和B、C组阳性标本再进行HBV-M(乙肝病毒标志物检测)5项检测。对比两种方法检测结果。结果A、B、C三组经FQ-PCR检测HBV-DNA有反应性标本分别为108例（54.55%）、34例（32.38%）、5例（0.51%）。结论为提高输血安全，应首先采用ELISA法检测HBsAg对样本进行筛查，去除有反应性血液标本后再对无反应性血液标本进行FQ-PCRHBV-DNA核酸检测，最终排除有反应性血液。

简介：摘要目的比较荧光定量PCR法与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎病毒(HBV)的效果。方法抽取2018年1月至2019年1月于阳泉市第一人民医院就诊中发现的HBV携带者200例，于空腹8～10 h状态下清晨采取肘静脉血，均行ELISA法、荧光定量PCR法检测，将乙型肝炎标志物结果分为7个模式，其中模式1为HBsAg HBeAg HBcAb阳性(大三阳)，模式2为HBsAg HBeAb HBcAb阳性(小三阳)。比较两种方法检测结果。结果200例检测结果中乙型肝炎血清学标志物阳性模式1(大三阳)50例，HBV-DNA阳性率为98.00%(49/50)、HBV-DNA含量为(8.13±1.01)copy/ml，高于2、3、4、5、6、7模式相应值(P<0.05)；模式2(小三阳)患者60例，HBV-DNA阳性率为86.67%(52/60)，高于3、4、5、6、7模式的阳性率(P<0.05)。其余模式HBV-DNA含量、HBV-DNA阳性率比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论相较于ELISA法，荧光定量PCR法能定量反映HBV感染、复制情况，可为早期诊断乙型肝炎、传染性质判断及监测病情归转提供重要依据。

简介：目的建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列，设计特异引物和TaqMan—MGB探针，建立和优化反应体系，用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性，用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线，对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验，并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR比较，配对t检验分析两种方法对Ct值和荧光强度的差异。结果采用TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因仅需40min，与25种非目标菌无交叉反应，仅对克罗诺杆菌有特异性扩增；所构建方法线性关系良好，相关系数r2=0．999，扩增效率为99．972％，对重组质粒、纯菌、人工模拟污染样品标本的灵敏度分别达10拷贝／反应、3．8和38cfu／ml；与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR相比，TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR的Q值更小、△Rn值更高，灵敏度和分辨率差异均有统计学意义（Ct：t=-14．406，P〈0．01；△Rn：t：14．230，P〈0．01）。结论本研究建立的TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR反应体系能够快速、特异、灵敏地检测克罗诺杆菌MMS基因，可用于婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌的快速筛查和鉴定，具有较大的的应用价值和推广价值。

简介：

简介：【摘要】

简介：【摘要】目的：分析呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测对诊断效能的影响。方法：选取本院2021年11月—2022年4月发热门诊就诊的30例呼吸道感染者为研究对象，将其设为实验组，本组采取多重实时荧光定量PCR的检测。以本院2020年11月—2021年4月就诊的30例患者为对照组。比较两组的某抗菌药物使用频度、复诊率、检测周转时间。结果：某抗菌药物使用频度比较显示，实验组显低（P＜0.05）。复诊率比较显示，实验组显低（P＜0.05）。检测周转时间比较显示，实验组显短（P＜0.05）。结论： 呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测的效果较好，能够减少某抗菌药物使用频度，降低复诊率，及缩短检测周转时间。

简介：【摘要】 目的：研究分析检验人类疱疹（EB）病毒采用酶联免疫吸附法、实时荧光定量的检验效果。方法：50例疑似EB病毒感染儿童，自2023年1月至12月就诊，以酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法做EB病毒检验，做检验效果分析。结果：检出率统计，实时荧光定量PCR法EB病毒检出率略高（P＜0.05），EB病毒特异性抗体检测结果为诊断金标准，做诊断效能计算，以实时荧光定量PCR法诊断效能良好（P＜0.05）。结论：检验EB病毒，实时荧光定量PCR法检测的实施，相比酶联免疫吸附法检出率、诊断效能良好。

简介：

简介：摘要目的建立一种快速检测新型冠状病毒N亚基因组（SgN）的方法，探讨其在新型冠状病毒肺炎病例及环境样本中的应用价值。方法根据全球共享流感数据库（GISAID）公布的新型冠状病毒全基因组序列设计SgN特异性引物和探针，优化退火温度、引物与探针浓度等反应条件，建立新型冠状病毒SgN荧光定量PCR检测方法，绘制标准曲线，评价该方法的灵敏性、重复性和特异性。采用建立的病毒SgN荧光定量PCR检测方法检测21份环境和351份临床样本，并选取25份SgN阳性样本进行病毒分离以评估该检测方法的应用效果。结果SgN的引物和探针对新型冠状病毒具有良好特异性。初步建立的病毒SgN荧光定量PCR检测方法最低检测限为1.5×102copies/ml，变异系数小于1%。372份样本的gRNA阳性率为97.04%（361/372），gRNA阳性样本中阳性环境样本和阳性临床样本的SgN阳性率分别为36.84%（7/19）和49.42%（169/342）。其中野生型毒株样本的SgN阳性率及拷贝数均比德尔塔（Delta）毒株低。在25份SgN阳性样本中，采样时间在5 d内的12份样本均分离到病毒；13份采样时间在12 d以上的样本未发生细胞病变。结论成功建立了一种检测新型冠状病毒SgN的荧光定量PCR方法，该方法的灵敏度、特异性和重复性均较好。