简介：摘要目的探讨不同灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测的影响。方法回顾性分析中山大学附属第一医院2020年1月两例冠状病毒实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）核酸检测阳性患者的咽拭子标本。56 ℃ 30 min和75%乙醇分别处理1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32比例稀释的咽拭子洗脱液，比较未灭活处理与灭活处理后样本的qPCR结果，并进行相关性及Bland-Altman分析。结果未灭活处理与56 ℃ 30 min和75%的乙醇灭活处理后样本循环阈值（Ct）的相关系数均在0.99以上，P<0.001。未灭活与56 ℃ 30 min和75%的乙醇灭活Ct值差异均在1以下。结果相关性明显并具有良好的一致性。结论使用56 ℃ 30 min和75%乙醇处理咽拭子标本，对后续2019新型冠状病毒核酸qPCR检测均无明显的影响。呼吁全国同行共同关注和参与2019新型冠状病毒的灭活后检测验证，推动2019新型冠状病毒的灭活检测，保护实验室检测人员的安全。

简介：根据转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9外源基因的旁侧序列,采用ABIPrimerExpress3.0设计引物和TaqMan探针,建立转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9品系特异实时荧光定量PCR检测方法。采用该检测方法对DAS-40278-9玉米含量为1%（质量分数）的标准样品进行检测,结果显示,采用建立的方法获得的标准曲线,通过斜率、相关系数、扩增效率判断是可靠的,待测样品的定量检测结果为1.024%,非常接近真实值。本试验表明建立的转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9品系特异定量PCR检测方法的特异性好,灵敏度和准确度高,值得推广应用。

简介：【摘要】目的 探讨实时定量PCR与传统微生物培养法诊断呼吸机相关性肺炎病原体的效果。方法 研究对象为我院2020年4月－2022年4月期间64例呼吸机相关性肺炎确诊病例，所有病例均接受实时定量PCR与传统微生物培养法检验，并对比两种检验方式的临床诊断应用价值。结果 实时定量PCR共确诊62例呼吸机相关性肺炎，诊断准确性、特异性、敏感性分别为96.87%、95.65%及97.56%，与传统微生物培养法确诊率差异较小，对比无统计学意义（P＞0.05）。且呼吸机相关性肺炎病原体检出情况实时定量PCR与传统微生物培养法结果高度接近，对比无统计学意义（P＞0.05）。但是在呼吸机相关性肺炎病原体检验时间及成本对比上实时定量PCR分别为（2.91±0.57）h与（40.68±12.51）元，均低于传统微生物培养法的（24.62±4.04）h与（60.44±17.07）元，对比有统计学意义（P＞0.05）。结论 在呼吸机及相关性肺炎疾病检测中实时定量PCR及传统细菌培养法中均具有较高精度，但是检验用时及成本来说，前者更具临床优势，值得被进一步推广及应用。

简介：摘要：目的：在研究中基于多重实时荧光定量PCR的方法以及相关的技术，来建立一个能够同时对14中高危型人乳头瘤病毒进行检测与分析，来有效地建立一个对癌基因E6/E7mRNA的检测方法。方法：在此次研究中选取我院223例临床样本进行检测与分析，来探究14种高危型人乳头瘤病毒中，不同病毒的E6/E7基因序列，来探究这些基因序列中存在的区域设计特异性，并且结合相对应的反应体系来构建一个高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA的检测方法与系统。在实验中需要结合这些临床样本来利用温核算扩增技术进行高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测，最终来探究其检测结果与宫颈组织病理学检测结果之间是否存在着一致性。结果：在实验中所建立的检测方法，能够在试验检测中将检测限提升更高的程度，并且对于一些常见低危型HPV中也并没有出现交叉检出的情况，使用多重实时荧光定量PCR方法所检测出的结果与Aptima HPV检测结果是具有较好的一致性，并且多重实时荧光定量PCR法中的敏感性为84.0%，特异性更是高达94.4%阴性预测值比阳性预测值高出更多，高达97.9%，而阳性预测值仅为65.6%。结论：使用多重实时荧光定量PCR法进行检测有着特异性好、稳定性好以及灵敏性高等等优势，能够在为高危型人乳头瘤病毒的患者提供一个更好的诊断方案以及技术平台。

简介：目的建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法。方法依据梅毒螺旋体（Treponemapallidum，TV）DNA多聚酶I（polA）基因序列，设计MGB—Taqman探针和PCR引物，对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测，验证该PCR方法的灵敏度和特异性，以及2种检测方法的一致性。结果PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200bp长DNA片段。该方法特异性强、灵敏度高，可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA。在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中，有21例为PCR阳性。证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染，可能不具有传染性。统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异。结论新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好，可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者，是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法。

简介：摘要目的探讨荧光定量PCR检测乙肝DNA分析前质量控制措施。方法选取本院收治的25例乙肝两对半检测确诊为乙肝大三阳患者的血液,每个患者的血液平均分为A、B、C、D组，A组即刻测定，B组室温放置2天测定，C组4℃放置7天测定，D组溶血即刻测定，比较不同的储存时间、温度以及标本是否溶血对乙肝病毒DNA进行荧光定量测量结果的影响。结果未溶血标本与溶血标本相比以及不同储存时间和温度相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论标本溶血、储存时间以及温度对荧光定量PCR检测乙肝大三阳血清标本DNA的结果无影响。

简介：目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物，建立染料法（SYBRgreenI）实时荧光定量PCR，评估其灵敏性及特异性；并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r2=0．99），灵敏性评估显示20¨l体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测，最低检出浓度为2拷贝／¨l，比普通PCR检测方法提高1～2个数量级，并且具有较好的重复性；建立的SYBRI染料法具有良好的特异性，与立氏立克次体R株等其他5种立克次体，以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增；用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器，以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测，其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本，结果脾脏中东方体检出量最多，肝脏和肾脏次之，血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性，适合各种样本中东方体的快速检测，可用于实验室的快速诊断。

简介：目的：用荧光定量RT－PCR（FQ－RT－PCR）法检测消化系统肿瘤患者mdr-1基因的表达，以了解该基因的表达水平。方法：用荧光定量RT－PCR（FQ－RT－PCR）方法。结果：75例本中mdr-1基因表达阳性率为37．3％（28／75），mdr-1基因平均表达量为10^4.88±1.15拷贝／ml。结论：FQ－PCR方法检测mdr-1基因表达具有简便，准确，特异性强，可定量等优点，对化疗方法的制定，疗效的预测及考察有重要指导作用。

简介：摘要目的探讨应用荧光定量PCR检测痰结核杆菌DNA的临床意义。方法随机抽取2008年2月～2013年10月间我院收治肺结核（经初步诊断）患者80例，同时抽取其他肺病患者60例，分别直接涂片痰浓集进行结核杆菌培养和FQ-PCR检测TB-DNA。结果痰标本采用FQ-PCR法检测检查结核杆菌灵敏度最高，比直接涂片、培养、浓集涂片检测方法明显灵敏，且差异显著(P<0.05)，具有统计学意义。结论FQ-PCR法检测痰结核杆菌TB-DNA方法更加精准，值得临床广泛应用。

简介：摘要：荧光定量聚合酶链式反应属于一种基于聚合酶链式反应（PCR）扩增和实时检测的结合性技术，同时也是近年来食品快速检测技术的热点技术之一。和传统的PCR技术相比，其有着耗时更短、操作更简单、灵感度与特异性更高等优势。为了更好的了解和深入研究荧光定量PCR技术，本文简要分析荧光定量PCR技术在食品快速检测中的应用，希望可以为相关工作者提供帮助。

简介：摘要目的探讨和研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应在流感病毒检测中的应用效果。方法采用实时荧光PCR对617例流感样病例患者的咽拭子标本进行流感病毒核酸的测定，对检测出的阳性标本采用MDCK进行培养并分离，对两种方法的检测结果进行分析，对比特异性及灵敏度。结果本组617例标本中实时荧光PCR共检测出阳性标本152例，阳性率24.6%；细胞培养法在此152例阳性标本中共分离出流感病毒79例，阳性率12.8%，实时荧光PCR检测阳性率显著高于细胞培养法，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论实时荧光PCR能够快速有效的检测出流感病毒核酸，是实验室快速诊断的有效手段。

简介：摘要目的通过观察我院收治的对宫颈病变患者的临床诊断资料，探讨分析采用实时荧光PCR检测高危型HPV的价值。方法对我院收治的158例宫颈病变患者患者，进行实时荧光PCR检测，分析检测结果，并与第2代杂交捕获法(HC-Ⅱ)的检测结果对比。结果HPV在宫颈癌患者阳性表达率达90%以上,与HC-Ⅱ相比，差异无统计学意义；PCR检测宫颈病变与HC-Ⅱ的检测结果的阳性率分别为74.7%与70.9%，差异无统计学意义（P>0.05）；但两种方法检测HSIL的HPV阳性率明显高于宫颈炎症、湿疣（P<0.01），除LSIL外，其他病变中的PCR检出率均略高于HC-Ⅱ。结论采用实时荧光PCR检测高危型HPV，可用于确诊患者是否患有宫颈癌，提示高危型HPV感染与宫颈病变、宫颈癌发生有一定的相关性，值得进一步推广与应用分析。

简介：目的建立登革病毒分子信标实时荧光PCR检测方法。方法针对登革病毒3’-UTR保守区设计引物和分子信标探针,构建阳性参考质粒,建立登革病毒分子信标实时荧光PCR检测方法。应用建立方法对血清标本进行检测,检测结果与TaqMan探针法进行比较。结果所建立的分子信标荧光PCR检测方法灵敏度达102copies/μL,与其它病毒无交叉反应;对70份血清标本检测结果与TaqMan探针法一致。结论所建立的分子信标荧光探针法具有较高的灵敏度和特异度。

简介：目的：利用荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测产气荚膜梭菌的方法。方法：以产气荚膜梭菌基因为靶序列设计引物和探针,以自产气荚膜梭菌菌株中提取的DNA为模板,优化引物和探针的浓度比,同时验证方法的特异性、敏感性。结果：建立的反应体系在上游引物浓度为0.45μmol/L、下游引物浓度为0.15μmol/L、探针浓度为0.3μmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与创伤弧菌等12种相关细菌均无交叉反应;对纯菌检测的灵敏度低于10CFU/反应体系。结论：建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对战时气性坏疽做出快速准确的报告,实现对这种战时高发疾病的安全、快速和定量检测。

简介：从小体鲟线粒体基因筛选出位于COI（细胞色素氧化酶）基因中的一段保守序列，针对其设计引物，优化SYBRGreen实时荧光PCR反应体系，建立了一种鉴定小体鲟的实时荧光PCR定性检测方法．该方法检测小体鲟DNA灵敏度为0．04mg／L．通过对采集和市售小体鲟鱼样品检测，该方法可检测出样品中的小体鲟成分．实验证明该方法可对血液样品和组织样品中的小体鲟进行种源鉴别．

简介：摘要：目的：实时荧光PCR法与PCR-反向点杂交法在HPV检测中的对比研究。方法：选取我院2023年5月至2024年5月宫颈癌筛查的162例患者为研究对象，分别行实时荧光PCR法与PCR-反向点杂交法对样本进行HPV检测，以病理组织学检查结果为金标准，对比两种方法在HPV检测中的阳性检出率、一致性以及性能评估。结果：病理组织学检查结果为阳性122例，阴性40例；实时荧光PCR法和PCR-反向点杂交法在HPV检测中阳性检出率分别为70.99%和66.67%，差异无统计学意义（P＞0.05），两种方法检测符合率为90.74%，kappa值为0.78；实时荧光PCR法在HPV检测中灵敏度、特异性和准确度均高于PCR-反向点杂交法（P＜0.05）。结论：两种检测方法具有较高度的一致性，均可广泛用于宫颈癌筛查；实时荧光PCR法在HPV检测中临床诊断价值更高，具有更高的灵敏度、特异性和准确度，操作更方便，检测用时更短，更适合临床实验室推广应用。

简介：摘要目的实时荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤患者WT1和MDR1基因的表达水平，并探讨其临床意义。方法构建实时荧光定量PCR检测WT1和MDR1基因表达水平技术，检测30例不同分期多发性骨髓瘤患者血清WT1和MDR1表达水平，并对其表达量进行统计学分析。结果多发性骨髓瘤患者WT1和MDR1表达显著高于对照组（P<0.05），且两者与患者分期显著相关，其中，WT1基因在Ⅲ期与Ⅰ期、Ⅱ期比较中具有显著性差异（P<0.05），MDR1基因在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期两两比较中均具有显著性差异（P<0.05）。另外，WT1和MDR1基因表达水平呈现相关性（P=0.008），且两者均与β2-微球蛋白水平呈正相关，P值分别为0.006和0.034。结论WT1和MDR1基因表达水平可以作为多发性骨髓瘤患者疾病进程的检测指标。

简介：目的：建立一种灵敏度高、特异性好、精密度高、操作简便的荧光实时定量PCR技术，对临床标本中的TTVDNA进行定量检测。方法：设计针对TTV基因保守序列非转录区(UTR)的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段与PUCm—T载体连接并进行克隆，提取重组质粒以极限稀释法进行定量，作为定量检测的标准品。通过对重组质粒的测序来验证方法的特异性。通过与套式PCR—ELISA方法阳性检出率的比较，显示本方法学的高灵敏度。在临床研究中，通过对36例丙肝患者及123例不同血清标志物阳性的乙肝患者，166例健康体检者血清中TTVDNA的定量检测，评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。此外还观察了乙肝患者不同血清ALT水平组别TTVDNA阳性检出率的差别。结果：本方法检测TTV—DNA的灵敏度高于基于ORFl的普通套式PCR—ELISA方法，重组质粒测序结果显示方法有很好的特异性；通过重组质粒标本梯度稀释检测显示该方法的线性范围为10^2-7拷贝／ml；批间CV为13．2—16．0％，批内CV为6．5．0—11．3％。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群的血清TTVDNA定量结果分别为10^4.11±0.97、10^3.91±1.07、10^3.89±0.99拷贝／ml；三组人群TTVDNA阳性检出率无差异显著性；且乙肝患者(TTVDNA+)血清ALT水平与TTVDNA载量无相关显著性(P>0．1)；乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无差异显著性(P>0．1)。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化，适合于临床实验室进行临床标本的TTV—DNA定量检测。

简介：目的建立基于TaqMan探针技术的皮炎外瓶霉荧光定量PCR检测方法.方法通过对皮炎外瓶霉ITS区域基因组序列（GenBank：JN675373.1）进行分析,设计合成特异性引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR反应条件.以临床标本中分离的皮炎外瓶霉为阳性菌株,及其他种类真菌和细菌作为阴性对照菌株,从特异性、敏感性及重复性方面对该方法检测效果进行评价.结果该研究设计的引物和探针能扩增皮炎外瓶霉特异性序列.临床分离得到的皮炎外瓶霉在反应中有明显扩增曲线,而甄氏外瓶霉、棘状外瓶霉、烟曲霉、白色念珠菌、新生隐球菌、马内菲青霉等20株菌在CT值≤38范围内均未有扩增;利用基因重组构建的标准品完成了标准曲线的绘制,在1.0×103～1.0×107拷贝数（Cp）内具有良好的线性关系（R2=1.000）,最低可检出量为10Cp/μL.结论成功建立了荧光定量PCR检测皮炎外瓶霉方法,该法特异度强、敏感度高、重复性好,将有助于临床皮炎外瓶霉感染的早期诊断和针对性治疗.

简介：【摘要】目的：分析荧光定量PCR检测解脲脲原体,沙眼衣原体效果。方法：选择我院2021年1月-2022年1月疑似解脲脲原体80例和沙眼衣原体感染患者80例，进行荧光定量PCR检测，并用传统检测技术作为对照，比较两种方法差异。结果：用荧光定量 PCR法测定解脲脲原体、沙眼衣原体的时间比传统方法短，阳性检出率与传统方法相比，差异有显著性（P<0.05）。结论：与传统的检测方法相比，荧光 PCR检测时间短，检出率高，可以满足临床快速、准确、简便的检测需求。