简介:摘要目的研究转录调控因子OmpR在创伤弧菌中致病相关的生物学功能及分子机制。方法通过基因无痕敲除技术构建创伤弧菌ompR基因敲除株(ΔompR)。通过生长曲线测定法检测不同渗透压下菌株的耐受力,细菌泳动试验检测运动性,结晶紫染色试验检测细菌生物膜形成能力,菌落计数法测定创伤弧菌ΔompR株黏附细胞的变化,乳酸脱氢酶释放法测定创伤弧菌ΔompR株对细胞毒性的变化,以明确ΔompR株的致病性相关生物学表型;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测创伤弧菌ΔompR株和野生株中毒力相关靶基因ompN、ompU、ompA、hcp2的mRNA水平变化。结果成功构建创伤弧菌ΔompR株。与野生株相比,ΔompR株在高渗透压培养基中生长缓慢,生物膜形成能力减弱,细菌运动性未有明显差异,ΔompR株对细胞的黏附率和毒性显著低于野生株。ΔompR株中渗透压调节及生物膜形成相关ompN基因mRNA水平显著下调(P<0.05),其他靶基因mRNA水平无明显变化。结论OmpR参与调控创伤弧菌高渗透压环境下生长、生物膜形成、对细胞的黏附及毒性。
简介:环境胁迫严重影响作物的生长和发育,热激转录因子(heatshockfactor8,HSF)是一类在热应激反应中起重要作用的蛋白质,主要功能是在热休克基因的表达过程中与相应热激元件结合,启动基因的转录过程,最终促进热休克蛋白(HSP)基因的表达。本文将热激转录因子8(hsf8)基因构建在植物表达载体pCAMBIA3300中,以大豆子叶节作为受体,通过农杆菌介导法将hsf8基因导入品质性状优良的两个高产大豆新品系哈交5337和哈交5489中,最后获得转基因植株。在开展大豆遗传转化过程中,探讨了农杆菌介导大豆子叶节转化体系的影响因素,优化了转化条件。在共培养后,采用延迟筛选的方法来提高选择效率。并确定草胺磷筛选浓度为3.5mg/L。获得转化质粒pCAMBIA3300-HSF8的转基因植株,其中T1代PCR阳性植株17株。采用Real—timePCR的方法对T1代抗性植株进行hC8基因的转录水平的相对定量分析,确定9株较非转基因植株哈交5337表达量明显提高。有1株明显低于哈交5489的凤届基因表达量。
简介:NAC转录因子是近十年来新发现的具有多种生物功能的植物特异转录因子,在植物生长发育、激素调节和抵抗逆境等方面发挥着重要的作用。本研究基于Solexa技术对平榛花芽转录组文库进行分析,结合RACE—PCR扩增,从平榛中克隆了一个与NAC类基因同源的cDNA序列ChNACl,该序列长度为1154bp,具有长度为876bp的完整开放阅读框架,推测编码蛋白含有291个氨基酸,具有N-末端同源性较高且十分保守的NAC结构域和一个位于c.末端的高度可变区域。qRT—PCR分析表明,ChNACl可以在4℃低温胁迫条件下上调表达,在4h时出现表达峰值。组织表达分析结果表明,ChNACl在雄花序中表达最高,其次是花芽、树皮和种子。推测ChNAC1可能参与植物响应低温反应过程。ChNACl基因的克隆及表达分析为进一步阐明和探讨平榛NAC转录因子的功能奠定了基础。
简介:摘要目的探讨抑制转录共激活因子TAZ和M2型丙酮酸激酶(PKM2)在头颈鳞癌(SCCHN)组织的表达及临床意义。方法收集2014年3月至2020年5月吉林省肿瘤医院手术治疗92例SCCHN患者组织标本,包括25例口腔癌、33例喉癌、l4例下咽癌、6例面颊癌、7例颌面癌、5例舌癌、2例唇癌,另选择25例口腔和咽喉良性病变患者手术时留取的正常口腔、咽喉黏膜组织作为对照组;采用免疫组织化学法检测各组织中TAZ和PKM2的表达水平,并结合临床资料进行χ2检验。结果TAZ在SCCHN组织中的阳性表达率[83.75%(67/92)],明显高于正常对照组织阳性表达率[54.55%(12/25)],差异有统计学意义(χ2=10.495,P<0.01),TAZ表达水平与SCCHN组织学分化程度、美国癌症联合委员会分期(AJCC分期)、淋巴结转移明显相关(χ2=6.525、5.872、6.107,P<0.05)。PKM2在SCCHN组织中的阳性表达率[68.48%(63/92)],明显高于正常对照组织阳性表达率[16.00%(4/25)],差异有统计学意义(χ2=22.122,P<0.01),PKM2表达水平与SCCHN的AJCC分期、淋巴结转移明显相关(χ2=6.736、5.312,P<0.05)。结论TAZ和PKM2在SCCHN组织中的阳性表达率高于对照组织,TAZ和PKM2在SCCHN组织中高表达与肿瘤恶性进展明显相关。
简介:摘要目的观察人转录抑制共遏因子(BCOR)在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达和其对肝癌细胞增殖、迁移的影响。方法蛋白质印迹法(Western blot)检测BCOR在2019年8月至2020年10月在郑州大学人民医院接受手术切除的60例肝癌组织及对应癌旁组织中的表达水平;将构建的BCOR过表达载体及空病毒载体,经慢病毒包装后稳定转染至肝癌细胞中,构成实验组与对照组,免疫印迹法检测其表达变化;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测转染后肝癌细胞增殖能力;划痕实验检测转染后肝癌细胞迁移能力;Transwell实验检测转染后肝癌细胞侵袭能力。两组之间比较采用t检验。结果癌旁组织中BCOR表达高于肝癌组织(1.316±0.642)倍,差异有统计学意义(t=2.689,P<0.05)。Western blot结果表明BCOR在肝癌细胞中表达量低于人正常肝细胞(1.867±0.661)倍,差异有统计学意义(t=2.941,P<0.01)。转染后实验组肝癌细胞中BCOR表达水平高于对照组(3.038±1.007)倍,差异有统计学意义(t=7.246,P<0.01)。CCK-8实验结果显示0 h实验组吸光度(A)值(0.604±0.043)较对照组(0.619±0.014)差异无统计学意义(t=0.934,P>0.05)。24、48、72 h实验组A值(0.644±0.028、0.788±0.097、1.139±0.253)低于对照组(0.860±0.057、1.250±0.282、1.934±0.326),差异均有统计学意义(t=9.545、4.385、5.444,P<0.05)。划痕实验结果显示24、48、72 h实验组迁移细胞数目[(128.333±2.082)、(230.667±2.517)、(324.667±4.509)个]低于对照组[(161.333±4.933)、(415.667±1.528)、(686.667±8.505)个],差异均有统计学意义(t=10.675、108.844、65.134,P<0.05)。Transwell实验结果显示实验组穿孔细胞数目[(56.833±9.368)个]低于对照组[(207.333±27.267)个],差异有统计学意义(t=12.786,P<0.05)。结论BCOR在肝癌组织中表达下调,过表达BCOR后可抑制肝癌细胞的增殖、迁移能力。
简介:摘要调节性T细胞(Treg)是机体维持免疫耐受不可或缺的T细胞亚群。Treg数量和功能的异常可以导致机体发生自身免疫反应,从而对自身稳态产生破坏。活化T细胞核因子(NFAT)、B淋巴细胞诱导成熟蛋白(BLIMP)-1、干扰素调节因子(IRF)4等转录因子在T细胞的生长、发育中,发挥重要调控作用。NFAT、BLIMP-1、IRF4对Treg的发育和功能亦具有重要作用。笔者拟就NFAT、BLIMP-1、IRF4对Treg的调控及其可能的作用机制的最新研究进展进行阐述。
简介:摘要目的探究Yes相关蛋白(YAP)和转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)在甲状腺乳头癌发生发展过程中的作用。方法用特异性小干扰RNA(siRNA)转染人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)使其YAP或TAZ表达水平下调,转染NC为阴性对照组,YAP-si、TAZ-si和TAZ-si+YAP-si为实验组。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TPC-1中YAP和TAZ的表达水平,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞仪、β-半乳糖苷酶染色法、Transwell实验检测YAP或(和)TAZ低表达对TPC-1增殖、凋亡、衰老、迁移、侵袭的影响。将小鼠随机分成5组,每组6只,将转染后的上述TPC-1接种至裸鼠背部皮下组织(接种体积为0.1 ml/只,接种数量为1×106/裸鼠)。观察并分析在体内YAP或(和)TAZ低表达对肿瘤生长的影响。两样本比较采用t检验。结果YAP-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于NC组(0.327±0.015比0.361±0.011、0.397±0.021比0.450±0.017、0.560±0.030比0.760±0.036,t=3.188、3.411、7.385,P<0.05;195.000±2.000比361.667±6.429,t=42.875,P<0.01;108.000±8.660比205.333±7.234,t=14.940,P<0.01),衰老阳性、总凋亡率高于NC组[0.185±0.002比0.094±0.001,t=-53.276,P<0.01;(26.367±3.250)%比(7.473±0.729)%,t=-9.824,P<0.01];TAZ-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于NC组(0.317±0.015比0.361±0.011、0.400±0.010比0.450±0.017、0.537±0.021比0.760±0.036,t=4.056、4.330、9.291,P<0.05;199.677±8.326比361.667±6.429,t=26.673,P<0.01;132.000±13.454比205.333±7.234,t=8.315,P<0.01),衰老阳性、总凋亡率高于NC组[0.183±0.002比0.094±0.001,t=-59.719,P<0.01;(23.367±3.156)%比(7.473±0.729)%,t=-8.479,P<0.01]。YAP-si组肿瘤的体积、重量小于NC组(0.566±0.056比1.021±0.125、2.778±0.257比5.324±0.362、19.877±1.660比31.171±1.962、48.583±3.668比86.441±4.158、80.619±1.243比194.014±9.460、137.865±3.430比331.738±10.514,t=8.127、14.052、10.758、16.726、29.112、42.952,P<0.01;0.730±0.009比1.232±0.015,t=69.917,P<0.01),TAZ-si组肿瘤的体积、重量小于NC组(0.688±0.056比1.079±0.145、2.778±0.392比5.871±0.644、20.135±1.378比31.095±1.088、46.115±4.565比86.680±4.479、80.177±2.468比193.102±8.575、142.736±3.975比344.824±23.604,t=6.178、10.048、15.295、15.536、30.402、20.681,P<0.01;0.743±0.014比1.220±0.008,t=73.873,P<0.01)。YAP-si+TAZ-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于YAP-si组(0.293±0.015比0.337±0.021、0.333±0.025比0.450±0.017、0.427±0.015比0.547±0.038,t=2.907、6.614、5.091,P<0.05;86.333±18.148比195.000±2.000,t=10.309,P<0.01;81.667±7.506比108.000±8.66,t=3.980,P<0.05),衰老阳性、总凋亡率高于YAP-si组[0.336±0.004比0.185±0.001,t=-61.707,P<0.01;(41.500±0.609)%比(26.500±0.755)%,t=-14.615,P<0.01];YAP-si+TAZ-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于TAZ-si组(0.293±0.015比0.340±0.01、0.333±0.025比0.416±0.017、0.427±0.015比0.537±0.021,t=4.427、4.702、7.379,P<0.05;86.333±18.148比199.667±8.327,t=9.831,P<0.01;81.667±7.506比132.000±13.453,t=5.659,P<0.01)。YAP-si+TAZ-si组肿瘤体积、重量低于YAP-si组(0.661±0.078比5.324±0.362、2.347±0.325比19.877±1.662、11.671±0.713比48.583±3.668、20.891±1.599比80.619±1.243、41.903±2.519比137.865±3.421,t=30.873、25.325、24.199、72.241、55.407,P<0.01;0.314±0.006比0.730±0.009,t=90.585,P<0.01),YAP-si+TAZ-si组肿瘤体积、重量低于低于TAZ-si组(0.661±0.078比5.871±0.644、2.347±0.325比20.135±1.378、11.671±0.713比46.115±4.565、20.891±1.599比80.177±2.468、141.903±2.519比42.736±3.975,t=19.666、30.733、18.260、49.358、52.546,P<0.01;0.314±0.006比0.743±0.014,t=69.818,P<0.01)。以上差异均有统计学意义。结论YAP和TAZ表达促进甲状腺乳头癌发生发展,且两者具有协同效应。
简介:摘要目的探讨转录因子12(TCF12)对前列腺癌进展及预后的影响。方法利用在线生信分析网站UALCAN、基因表达谱动态分析(GEPIA)、基因、蛋白质相互作用关系检索工具(STRING)及METASCAPE分析TCF12在前列腺组织中表达(高表达组和低表达组)及其与预后的关系,预测TCF12相关基因发挥作用的可能信号通路;构建TCF12沉默前列腺癌细胞株DU145,分为空载体组(si-NC)和TCF12沉默组(si-TCF12);分别利用细胞增殖-毒性检测试剂盒、划痕实验及细胞体外侵袭实验检测细胞的增殖、迁移及侵袭能力。组间分析采用独立样本t检验。结果TCF12低表达于前列腺癌(正常前列腺组织比前列腺癌为29.967±11.269比26.348±7.924,P<0.01),差异有统计学意义,TCF12低表达的前列腺癌启动子甲基化程度高于TCF12高表达(正常前列腺组织比前列腺癌为0.142±0.028比0.189±0.033,P<0.01),差异有统计学意义。低表达TCF12的前列腺癌患者无疾病生存期[风险比(HR)=0.014,P<0.05]及总生存期[HR=0.064,P<0.05)低于高表达TCF12的前列腺癌患者。TCF12可能通过激素刺激相关信号通路在前列腺癌发生发展中发挥作用。沉默TCF12后,DU145细胞的增殖(si-TCF12比si-NC为0.836±0.004比0.767±0.099,t=7.223,P<0.01)、迁移(si-TCF12比si-NC为74.8±11.2比42.8±9.6,t=7.269,P<0.01)及侵袭能力(si-TCF12比si-NC为121.8±21.0比94.0±12.5,t=3.426,P<0.01)高于对照组。结论TCF12在前列腺癌中低表达并提示预后欠佳。
简介:摘要血管生成是肿瘤发生中的一个复杂的病理过程,是指从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而形成新的血管,这个过程在肿瘤发生中至关重要。ETS-1是原癌基因ETS家族的重要成员,在胚胎发育,血管生成,炎症反应中都发挥了非常重要的作用。临床数据显示,ETS-1在多种肿瘤组织中的表达显著增加,并与肿瘤的发生密切相关。研究表明,ETS-1所参与调控的血管生成在肿瘤的发生和转移过程中扮演了非常重要的作用。随着研究技术的发展,近年来对ETS-1在肿瘤血管生成过程中所起的关键作用有了更透彻的了解,本综述将全面的总结ETS-1在肿瘤血管成中的分子机制及其最新研究进展,展望ETS-1在临床肿瘤治疗中的应用前景。
简介:DREB类转录因子是一类植物中特有的,在非生物逆境胁迫中起重要作用的调控因子。本研究以割手密为材料,采用同源基因克隆的方法克隆获得2个DREB2类转录因子基因SsDREB2-1和SsDREB2-2(GenBank登录号分别为KU963264和KU963265)。序列分析表明,这2个基因的长度分别为814bp和709bp,分别编码262和227个氨基酸;预测其蛋白质分子量分别为28.66kD和24.95kD,等电点(PI)分别为5.42和6.47。氨基酸亲水/疏水性分析表明,这2个转录因子属于亲水性蛋白。多序列比对分析表明,两基因序列的相似性为98.7%。原核表达分析表明,这2个基因编码区能正常表达出目的蛋白,说明得到的这2个基因为功能基因而非假基因。