简介：【目的】原核表达纯化人锌指蛋白（zincfingerprotein580,ZNF580）并制备抗人ZNF580单克隆抗体。【方法】将构建的重组质粒pET30a-ZNF580转化大肠杆菌BL21（DE3）,由异丙基-β-D-半乳糖苷（Isopropylbeta-D-galactosidase,IPTG）诱导表达并纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备针对ZNF580的特异性单克隆抗体并通过ELISA和Westernblotting方法鉴定。【结果】含有该质粒的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19kDa,通过将Sp2/0细胞与免疫鼠的脾细胞融合获得了1株能稳定表达ZNF580抗体的杂交瘤细胞株（H4E4C5）,其分泌的单克隆抗体的IgG亚类IgG2b,ELISA检测腹水抗体效价为1：1.28×10~5,Westernblotting结果显示抗ZNF580单克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本实验成功表达并纯化了ZNF580蛋白并制备了抗ZNF580蛋白的单克隆抗体,为进一步研究锌指蛋白ZNF580的功能奠定了基础。

简介：摘要研究者发现，在临床抢救新型冠状病毒肺炎(COVID-19)危重患者中，中和活性的单克隆抗体具有靶点明确、纯度高以及可大规模制备等优势，有望成为治疗COVID-19的有力武器。本文就2019新型冠状病毒(2019-nCoV)侵入宿主细胞的途径、病毒新的主要变异体以及国内外抗2019-nCoV单克隆抗体研发进展进行介绍，以供临床工作者或研究者参考。

简介：摘要针对登革病毒的中和性单克隆抗体因黄病毒属之间的序列同源性而产生交叉反应，如靶向包膜蛋白和非结构蛋白1的抗体等。这些交叉性中和抗体可与黄病毒属的其他病毒结合，发挥对感染动物的保护作用，但也可能在体内引起抗体依赖增强(antibody-dependent enhancement, ADE)效应。本综述就近年来抗登革病毒中和抗体交叉反应性的研究进展进行简要阐述。

简介：摘要研究者发现，在临床抢救新型冠状病毒肺炎(COVID-19)危重患者中，中和活性的单克隆抗体具有靶点明确、纯度高以及可大规模制备等优势，有望成为治疗COVID-19的有力武器。本文就2019新型冠状病毒(2019-nCoV)侵入宿主细胞的途径、病毒新的主要变异体以及国内外抗2019-nCoV单克隆抗体研发进展进行介绍，以供临床工作者或研究者参考。

简介：摘要视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）是一类自身免疫介导的，以视神经和脊髓受累为主的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病，具有高复发率和高致残率的特点。目前NMOSD急性期多首选大剂量激素冲击治疗，血浆置换或静脉注射免疫球蛋白可作为其替代治疗。缓解期免疫治疗则包括传统免疫抑制剂和新型免疫药物。其中，单克隆抗体治疗是近年来新兴并快速发展的治疗领域，受到越来越多的关注。文中就单克隆抗体在NMOSD中应用的有效性和安全性作一综述，希望能够为临床诊疗提供一些新的思路。

简介：摘要目的制备针对严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)的单克隆抗体，用于抗原诊断。方法收集分泌抗SARS-CoV单克隆抗体的杂交瘤细胞上清液，并用Western blot和间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测单克隆抗体与SARS-CoV-2 N蛋白之间的反应。通过免疫荧光，检测单克隆抗体与Vero细胞培养物中SARS-CoV-2的反应性。结果从杂交瘤细胞中获得了两种单克隆抗体，分别称为A1和A2。它们都可以与SARS-CoV-2 N蛋白发生反应，而A2也可以识别SARS-CoV N蛋白。这些单克隆抗体可用于ELISA和免疫荧光实验。结论获得了2种针对SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体，为发展SARS-CoV-2抗原检测方法提供了基础。

简介：目的：制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法：采用杂交瘤技术，获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶（rUOX）的杂交瘤细胞McAb17和McAb3；采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果：McAb17和McAb3的腹水效价达到1：512000，纯化后获得纯度大于95％的单抗，抗体亚类（型）分别为IgG1／k型和IgG2a／k型；ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase（商品化rUOX）可发生特异反应。结论：制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3，为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。

简介：原发性肝癌是目前常见的消化系统恶性肿瘤之一,其中90%为肝细胞癌（HCC）。多数HCC患者确诊时已属中晚期,而手术、放化疗、介入治疗等临床常用治疗手段对中晚期HCC的疗效不甚理想。放射免疫治疗（RIT）是近几年发展起来的治疗HCC的新方法,以具有靶向结合能力的单克隆抗体（McAb）为载体,通过耦联放射性核素来特异性杀伤目标肿瘤细胞。其中^131I标记的McAb因其物理特性优良且具有高度靶向特异性,在HCC综合治疗中具有良好的应用前景。本文对近年来^131I标记的McAb介导的肝癌RIT取得的新进展作一综述。

简介：摘要慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)常使用干扰素、核苷(酸)或核苷(酸)类似物等药物进行治疗，虽然可以有效抑制病毒复制，但存在无法彻底清除病毒、长期使用副作用大以及产生耐药性等问题。针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)、尤其是针对乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)的单克隆抗体具有良好的病毒中和能力，在相关动物模型上能有效抑制HBV的复制，展现出了治疗或辅助治疗CHB的潜力。本文就处于临床研发阶段或临床前研发阶段的治疗性抗HBV单克隆抗体药物研发进行综述，旨在为CHB的治疗提供新的参考。

简介：目的：克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法：从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA，根据恒定区序列设计基因特异性引物，通过5’RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因，测定并分析可变区基因序列，并克隆入pMD18-T载体。结果：重链可变区基因序列全长450bp，编码150个氨基酸残基；轻链可变区基因序列全长429bp，编码143个氨基酸残基。在GeneBank中对氨基酸序列进行比对分析，二者均符合小鼠IgG可变区基因的特征。根据Kabat法则对A8抗体轻链和重链可变区氨基酸序列基因进行分析并确定了3个抗原互补决定区（CDR）、4个框架区（FR）和信号肽。结论：通过5’RACE法得到了抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因，为进一步研究抗体三维结构，以及对该抗体进行人源化改造奠定了基础。

简介：摘要目的评价从噬菌体库筛选获得的1株抗狂犬病病毒单克隆抗体的基本特征。方法从抗狂犬病病毒噬菌体库中筛选获得1个阳性克隆，扩增获得其抗体轻重链可变区，构建全分子抗体的表达质粒后在HEK293 EBNA1细胞中瞬时表达，亲和纯化后对该抗体进行体外抗狂犬病病毒中和活性、中和指数、逃逸株测序、差示扫描荧光法热稳定性分析，并与数据库中街毒株糖蛋白比对关键氨基酸位点。结果该抗体体外抗狂犬病病毒中和活性为691IU/mg；该抗体对狂犬病病毒CVS-11和CTN株的中和指数分别为8.52和7.05；CVS-11逃逸株糖蛋白测序分析表明，该抗体针对的关键氨基酸主要为N37 K、N194 K和K205 N。与1 338株狂犬病病毒街毒株糖蛋白基因比对表明，37、194和205位上仅有1个街毒株在194位上与突变逃逸株氨基酸类型相同。该抗体Tm值为70.58±0.31 ℃。结论获得1株高中和指数的全分子人源抗狂犬病病毒中和抗体，该抗体具有较好的热稳定性。

简介：目的：制备稳定分泌抗人生长分化因子15（GDF15）单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法：根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的mAb,用间接ELISA检测mAb腹水效价。结果：获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水mAb效价可达1×104~1×109。结论：获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性mAb,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。

简介：摘要目的从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。方法采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞，通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后，采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位，通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。结果从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系，突变率为10.76%～21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系，突变率为6.03%～18.64%。7个抗体均可以结合gp140，其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区；508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2)，IC50值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。结论本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体，其中5个为识别gp41区的单克隆抗体，2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。

简介：摘要目的制备抗柯萨奇病毒A组2型(coxsackievirus A2，CV-A2)单克隆抗体(单抗)，建立CV-A2抗原检测方法。方法用纯化后的CV-A2全病毒颗粒免疫小鼠，筛选获得抗CV-A2单抗。建立CV-A2抗原检测方法，确定线性范围，对其准确度、精密度、稳定性、专属性进行验证。用ELISA检测病毒颗粒纯化过程中样品的抗原含量。结果制备了高效价的抗CV-A2单抗并建立ELISA抗原检测方法，检测范围为5.00~320.00 ng/ml。高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在89.58%~104.78%之间。重复性验证变异系数分别为2.10%、2.47%、6.18%。中间精密度验证变异系数分别为2.89%、2.69%、1.94%。耐用性验证回收率在84.26%~114.21%之间。包被微孔板于37 ℃放置3 d，样品回收率在90.31%~103.11%之间。专属性验证结果显示该方法只识别CV-A2抗原，与其他抗原均无交叉反应。结论建立并验证了CV-A2 ELISA抗原检测方法，可应用于病毒纯化过程中样品的抗原检测，还可应用于含CV-A2的手足口病多价疫苗的CV-A2抗原含量检测。

简介：目的对结核分枝杆菌的蛋白抗原进行初步分析，制备抗结核分枝杆菌的特异单克隆抗体，探讨特异性免疫荧光法在痰标本结核分枝杆菌检查上应用的可行性。方法采用丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹技术对结核分枝杆菌的蛋白抗原进行初步分析，确定特异、免疫原性强的蛋白抗原，制备抗特异蛋白抗原的高效价单克隆抗体，采用饱和硫酸铵粗提，SephadexG-50层析纯化；同时制备高效价的抗结核分枝杆菌免疫血清。用异硫氰酸荧光素（FITC）标记，初步应用于临床痰涂片的检测。结果获得4株针对结核分枝杆菌38×10^3蛋白抗原的单克隆抗体，ELISA检测小鼠腹水单克隆抗体效价达到1：6400～1：12800。建立了直接荧光抗体染色方法，60份临床疑似肺结核病人痰标本，用抗酸染色法、结核分枝杆菌免疫血清和单克隆抗体免疫荧光法三种方法检测，阳性率分别为：36．7％（22／60）、58．3％（35／60）和56．7％（34／60），其中，抗酸染色阳性22份标本，两种免疫荧光法检查均为阳性，符合率100％。结论成功制备出抗结核分枝杆菌38×10^3蛋白的单克隆抗体。免疫荧光法检查痰标本结核分枝杆菌阳性率大大高于抗酸染色，具有良好的应用前景。

简介：本文报告了McAb-RIHA法检测30例急性血吸虫病患者粪便虫源性抗原的结果。首次证实,急血患者粪便中存在日本血吸虫肠相关趋阴级抗原。McAb-RIHA法检测敏感性为90％,特异性为92.5％,与肝吸虫患者粪便的交叉反应率为10％。推测急血患者粪便中虫源性抗原可能是通过胆汁分泌途径排入肠道。文中对粪便中虫源性抗原检测在血吸虫免疫诊断上的意义进行了讨论。

简介：

简介：摘要鼻息肉是鼻腔和鼻窦黏膜最常见的慢性变态反应相关疾病之一，难治性鼻窦炎伴鼻息肉常合并哮喘，手术和药物治疗都很难控制病情。奥马珠单克隆抗体是人源性IgE单克隆抗体，国外已有应用IgE单克隆抗体治疗鼻息肉，特别是哮喘合并鼻息肉的报道。本研究对3例哮喘合并慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）的患者采用奥马珠单克隆抗体治疗，随访16周，观察报道治疗效果。

简介：近年来,国内外诸多企业正在积极地进行单克隆抗体药物的研发和申报。作为一种大分子蛋白药物,单克隆抗体因其特殊的结构和生理性质,在体内的吸收、分布、代谢及排泄与小分子药物相比均存在较大差异。单抗具有的靶点介导的药物处置、非线性药动-代谢、时间依赖性、较长的半衰期等独特的药代动力学特征,使得其在药物研发过程中存在了一系列的挑战。合理的应用模型和仿真技术可帮助研究者充分发掘数据信息、预测临床试验结果、指导临床试验设计以及优化给药方案等,其中靶点介导的药物处置模型在单抗药物研发中的应用目前已有一些探索。本文将通过对单抗药物药动学特征的介绍,探讨靶点介导的药物处置模型在单抗药物研发中应用的可行性和必要性,以期帮助研究者科学、高效地进行单抗类药物的研发。

简介：摘要目的观察英夫利西单克隆抗体对自身免疫性肝炎(AIH)的预防效果并探讨其作用机制。方法经鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Con-A)建立小鼠AIH模型。将40只小鼠随机分为预防组和对照组，每组20只。预防组Con-A注射前1 h经鼠尾静脉注射途径给予20 mg/kg英夫利西单克隆抗体，对照组注射200 μL PBS。分别于Con-A或PBS注射后3、8、12和24 h取血清，通过比色法检测血清AST、ALT水平。通过ELISA法检测血清细胞因子IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10和趋化因子配体10(CXCL10)水平。于Con-A或PBS注射后12 h取肝组织标本进行H-E染色，通过流式细胞术检测浸润至肝脏的淋巴细胞，通过实时荧光定量PCR检测T盒子转录因子(TBX21)、GATA结合蛋白3(GATA3)、RAR相关孤儿受体C(RORC)和CXCL10基因mRNA的表达水平。通过蛋白质印迹法检测肝脏CXCL10表达水平。统计学方法采用单因素方差分析和配对t检验。结果预防组Con-A注射后8、12和24 h的血清ALT、AST、IL-1β、IFN-γ水平均低于对照组[(545.8±190.3) U/L比(865.8±237.7) U/L、(947.6±267.9) U/L比(1 448.0±403.5) U/L和(508.6±131.1) U/L比(976.6±207.6) U/L；(620.7±132.0) U/L比(952.9±106.8) U/L、(801.6±212.0) U/L比(1 424.8±236.0) U/L和(632.1±117.8) U/L比(1 008.3±187.5) U/L；(31.38±10.12) ng/L比(48.12±11.53) ng/L、(39.34±11.40) ng/L比(60.00±14.17) ng/L和(29.49±8.22) ng/L比(46.89±5.50) ng/L；(432.93±66.82) ng/L比(674.66±97.88) ng/L、(655.09±169.17) ng/L比(937.90±166.36) ng/L和(263.40±54.97) ng/L比(410.74±86.64) ng/L]，差异均有统计学意义(t＝2.350、2.308、4.263，4.374、4.860、3.806，2.440、2.541、3.939，4.560、2.660、3.210；P均<0.05)。预防组Con-A注射后3、8、12和24 h的血清IL-6水平均低于对照组[(1 075.79±303.77) ng/L比(1 914.48±317.80) ng/L、(1 945.97±271.85) ng/L比(2 100.80±378.42) ng/L、(1 578.60±504.54) ng/L比(2 525.40±406.55) ng/L和(1 020.64±280.03) ng/L比(1 582.00±311.96) ng/L]，差异均有统计学意义(t＝4.266、2.903、3.267、2.994，P均<0.05)。预防组Con-A注射后3 h的血清CXCL10水平和肝脏组织CXCL10 mRNA相对表达量，以及Con-A注射后3和8 h肝脏组织中T-bet mRNA相对表达量均低于对照组[(1 755.8±148.1) ng/L比(2 102.0±334.0) ng/L，7.20±3.00比27.60±1.90，6.94±2.29比15.20±3.48和9.38±3.48比18.17±4.48]，差异均有统计学意义(t＝2.356、2.623、4.427、3.673，P均<0.05)。预防组与对照组Con-A注射后3、8、12和24 h的血清IL-4、IL-17A和IL-10水平，以及GATA3和RORC mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论英夫利西单克隆抗体在小鼠AIH模型中具有一定预防效果，其可能通过拮抗TNF-α减少肝脏CXCL10表达，使Th1和CD8＋T淋巴细胞向肝脏浸润减少，同时通过减少炎性因子对T淋巴细胞的活化来降低T淋巴细胞对肝细胞的损伤而发挥预防作用。