简介:目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan~R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan~R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果:构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论:建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。
简介:目的复习肥胖的定义、危害、诊断及治疗原则,回顾近年来有关代谢综合征的新进展,并根据作者1996年全国糖尿病流行病学资料,对我国南、北方体重、腰臀比、血压及糖耐量损害(IGT)和糖尿病发生率进行比较。方法利用自然人群,采取分层随机抽样方法,直接测口服葡萄糖耐量实验(OGTT)服糖后2小时血糖。结果北方受试者的平均体质指数(BMI)、腰臀比、收缩压/舒张压略高于南方,糖尿病患病率有较高的趋势,但缺乏统计学意义,然而南方受试者腰围随年龄增加的趋势较为明显,IGT的发生率高于北方受试者。结论我国肥胖、糖耐量损害及糖尿病患者较1980年及1990年显著增多。阳性家族史、年龄、受教育程度、体力活动量、体质指数、腰臀比及吸烟指数是糖尿病及糖耐量损害的危险因子。其中年龄40岁、具有糖尿病家族史、体质指数25以上及腰臀比0.9以上人群糖尿病及糖耐量损害患病率剧增。