简介：摘要目的原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。

简介：摘要由于计算机技术的飞速发展，数字化技术广泛应用于口腔临床诊疗，也为口腔诊疗的未来发展提供了新的方向。近年来，计算机辅助设计与制作（CAD/CAM）饰瓷作为一种新的饰瓷工艺的出现，不仅可以提高全瓷修复体的加工效率，也使整个制作过程更加客观可控。本文就CAD/CAM饰瓷的加工技术、力学性能、美学性能的研究现状作一综述，并通过与传统饰瓷工艺的对比，为临床工作提供参考。

简介：摘要目的制备靶向甲型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)蛋白的广谱抗体FHA3，并对其进行鉴定。方法依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，PCR扩增FHA3重链和轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FHA3。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FHA3。ELISA检测FHA3与甲型流感病毒HA的结合。假病毒感染宿主细胞试验检测抗体FHA3的体外中和活性。结果蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FHA3。FHA3与甲型流感病毒H1N1 HA、H2N2 HA、H3N2 HA、H5N1 HA、H7N9 HA以及H9N2 HA均识别结合，且呈浓度依赖效应。FHA3具有较好的体外中和活性，在低浓度下(5 μg/ml)能有效阻断H5N1以及H7N9假病毒入侵靶细胞，在0.012 5 μg/ml浓度下能有效阻断H1N1假病毒入侵靶细胞。结论获得1株具有体外中和活性的靶向甲型流感病毒HA蛋白的广谱抗体。

简介：摘要目的为了更好地促进我国的卫生健康标准化工作，为建立完善我国卫生健康领域标准化的发展战略、管理体制提供依据。方法本文收集了公共卫生领域标准化相关国际组织标准管理机制方面的资料，并将收集到的信息进行汇总分析。结果公共卫生领域的各种标准在各国际组织的管理体制不同，在组织性质、标准种类、应用、发布、组织结构、标准制定原则、优点、转化、宣贯、评估等方面均有较大不同。结论针对我国卫生健康标准化具体工作，国际标准化相关机构的工作机制提供了许多可供我国借鉴的经验。

简介：摘要目的原核表达GII.6型诺如病毒(norovirus, NoV)P蛋白和制备多克隆抗体。方法扩增NoV GII.6型P区基因并克隆至pET28a载体，转化感受态E. coli BL21(DE3)，IPTG诱导进行原核表达。使用Ni－NTA亲和柱层析进行纯化，重组蛋白进行寡糖结合分析，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清，ELISA测定该抗体的效价，western blot (WB)检测抗体的特异性，并进行有效性评估。结果成功构建了原核表达载体GII.6P-pET28a并表达相对分子质量约40×103的GII.6型P蛋白；Ni柱亲和层析纯化后纯度达90%以上；寡糖结合显示GII.6型P蛋白与B、leb、H2型结合，与A、H1、lea型不结合；ELISA测得抗体的效价为1∶160 000；WB显示抗体具有较高特异性；交叉实验未显示出对GII.4的亲和力。结论成功表达了GII.6型P蛋白并获得高效价的抗体，为GII.6的检测和疫苗研发提供有效工具。

简介：摘要目的制备抗柯萨奇病毒A组2型(coxsackievirus A2，CV-A2)单克隆抗体(单抗)，建立CV-A2抗原检测方法。方法用纯化后的CV-A2全病毒颗粒免疫小鼠，筛选获得抗CV-A2单抗。建立CV-A2抗原检测方法，确定线性范围，对其准确度、精密度、稳定性、专属性进行验证。用ELISA检测病毒颗粒纯化过程中样品的抗原含量。结果制备了高效价的抗CV-A2单抗并建立ELISA抗原检测方法，检测范围为5.00~320.00 ng/ml。高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在89.58%~104.78%之间。重复性验证变异系数分别为2.10%、2.47%、6.18%。中间精密度验证变异系数分别为2.89%、2.69%、1.94%。耐用性验证回收率在84.26%~114.21%之间。包被微孔板于37 ℃放置3 d，样品回收率在90.31%~103.11%之间。专属性验证结果显示该方法只识别CV-A2抗原，与其他抗原均无交叉反应。结论建立并验证了CV-A2 ELISA抗原检测方法，可应用于病毒纯化过程中样品的抗原检测，还可应用于含CV-A2的手足口病多价疫苗的CV-A2抗原含量检测。

简介：摘要目的原核表达糖尿病创面来源大肠杆菌谷氧还蛋白(Grx)GrxB，制备GrxB多克隆抗体。方法根据美国国家生物技术信息中心(NCBI)公布的大肠杆菌K12标准株grxB基因序列(Gene ID：946926)设计扩增引物，以本科室前期分离到的一株糖尿病创面大肠杆菌基因组(煮沸裂解法获得)为模板，通过聚合酶链反应(PCR)扩增出grxB全长663 bp，使用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接至表达载体pET-30a。将重组质粒pET-30a-grxB转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GrxB蛋白，使用N2+镍离子层析柱对蛋白进行纯化。纯化后的重组GrxB蛋白免疫BALB/c小鼠，完成免疫程序后使用蛋白质印迹法(Western blot)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对多克隆抗体的特异性和效价进行测定。两组间比较采用t检验。结果经测序，扩增出的grxB序列与K12标准株的完全一致，并成功表达出可溶性重组GrxB蛋白，大小为31.2 kDa，与预测大小一致。血清51 200倍稀释后，免疫组效价显著高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(1.146±0.066比0.12±0.011，t＝15.000，P<0.05)，免疫组血清与重组GrxB蛋白和大肠杆菌全菌均具有良好的特异性反应。结论成功表达可溶性重组GrxB蛋白，并获得高滴度多克隆抗体。

简介：摘要人事制度改革作为医学院校改革的重要组成部分，对于重构适应现代大学组织的新型教师群体具有重要意义。本研究基于北京大学医学人文学院新体制教师视角，采用质性研究方法，以半结构访谈方式了解新体制人文社会科学教师专业发展的外部动力因素状况。研究结果表明，新体制人文社会科学教师对专业发展的环境、制度、培训等外在因素总体上基本满意，提出了学院整体学术研究方向聚焦不足，部分学科团队建设薄弱，社会各层面对医学人文学科重视程度有待提升，以及新体制评价体系有待改善等问题。建议学校从提高医学人文学科的重视程度，破解制约学科发展的瓶颈问题，完善相关制度，搭建教师专业发展平台等方面，为新体制人文社会科学教师的专业发展提供支持。

简介：摘要目的原核表达GII.4基因型人诺如病毒(human norovirus, HuNoV)次要衣壳蛋白VP2并制备多克隆抗体。方法设计特异性引物扩增GII.4 HuNoV的VP2全基因，酶切连接至原核表达载体pGEX-6P-1，将鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。挑取单克隆摇菌，加入IPTG诱导重组GST-VP2融合蛋白的表达，经GST亲和层析纯化和酶切，获得GII.4 HuNoV VP2蛋白。通过SDS-PAGE分析纯化后HuNoV VP2蛋白相对分子质量。将纯化的GII.4 HuNoV VP2蛋白(0.5 mg/ml)免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体。结果GII.4 HuNoV VP2蛋白被成功表达和纯化，相对分子质量(Mr.×103)约29。将GII.4 HuNoV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体滴度高达1∶1 280 000。Western blot与间接ELISA分析显示该多克隆抗体能和GII.4 HuNoV VP2抗原特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GII.4 HuNoV VP2蛋白，并成功制备出高效价GII.4 HuNoV VP2多克隆抗体。

简介：摘要目的针对猫对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的高度易感性，筛选猫主要组织相容性复合物I类（major histocompatibility complex class I，MHC I）分子FLA-K*00701呈递SARS-CoV-2来源的多肽，并探索复合物制备方法，为研究猫感染SARS-CoV-2的T细胞免疫特征打下基础。方法对可能与FLA-K*00701具有亲和力的SARS-CoV-2来源多肽进行预测并合成。采用稀释复性法，使猫白细胞抗原（feline leukocyte antigen，FLA）I类多肽复合物在体外合适环境下复性，纯化复合物后，用坐滴蒸汽扩散技术筛选晶体的生长条件，X射线衍射区分收集的蛋白结晶是否为晶体。结果成功筛选到一条与FLA-K*00701具有高度结合能力的SARS-CoV-2来源多肽，并得到高纯度FLA-K*00701蛋白，初步筛选得到FLA多肽复合物晶体，X射线衍射分辨率为2.7Å。结论首次在SARS-CoV-2易感动物猫中筛选到与其FLA I具有高度亲和力的多肽，并得到高分辨率的复合物蛋白晶体，本研究为进一步探索猫抵抗SARS-CoV-2的细胞免疫机制及SARS-CoV-2多肽疫苗的研发提供有价值的参考。

简介：摘要人事制度改革作为医学院校改革的重要组成部分，对于重构适应现代大学组织的新型教师群体具有重要意义。医学院校人事制度改革面向全体教师，而制定改革方案是新老体制融合的重要一步。本研究从某大学医学人文学院老体制教师视角，基于访谈法搜集数据，了解老体制教师对改革的认识、态度和需求，为人事制度改革方案的制订提供依据。调查结果表明，大部分教师赞同改革，提出学科定位、评审规则、学科建设、新老体制融合政策引导、老体制积极性保护等方面的需求。因此，管理者应当从完善制度设计、明确学科定位、加强团队建设、学科差异化调整、引导新老接轨、尊重历史贡献等方面，制订合理的人事制度改革方案，跟进相应的配套措施，确保改革取得实效。