简介:上海天士力药业有限公司地处中国药谷——上海市张江高科技园区,是一家蓬勃兴起的生物制药企业。上海市张江高科技园区是中央政府批准设立的国家级高新技术产业开发区,是浦东重点功能开发区,园区特设的张江生物医药产业园区是我国国家级生物医药产业园区,迄今为止,已有9个国家级医药科研机构和多家跨国制药公司入驻张江。
简介:目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法。方法:将23SrRNA基因芯片用的针对12种细菌的25~30mer探针加长到30~38mer,2对通用引物序列不变。用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交。结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100fgDNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因。结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力。
简介:选取了辖区内150名成人作为观察组,选择同一个区域里在性别比例、健康状况以及年龄等与观察组成人具有可比性的150名成人作为对照组。对观察组的成人接种流感疫苗的同时配合使用卡介菌多糖核酸注射液,对对照组的成人仅接种流感疫苗,分别进行观察其对流感的预防效果。观察组成人在接种流感疫苗和卡介菌多糖核酸注射液后3个月、6个月、9个月,与对照组注射流感疫苗的在流感样疾病的发病情况和治疗费用方面来进行分析比较,评价卡介菌多糖核酸注射液配合流感疫苗对成人的保护效果。结果观察组与对照组的成人进行对比分析,3、6、9个月内观察组发生流感样疾病的人数较少,而且由流感样疾病发生而导致的直接医疗费用以及因家人陪伴和误工而造成的间接费用也较少,观察组与对照组之间的差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组成人接种卡介菌多糖核酸注射液配合流感疫苗后,仅少数成人出现发热和局部硬结等症状,且症状轻微,均可以自行缓解。成人接种卡介菌多糖核酸注射液配合流感疫苗后,其流感样疾病发病率有明显下降、治疗费用也显著减少,且疫苗接种副反应少、症状轻微,可自行缓解。因此,卡介菌多糖核酸注射液能够提高机体的免疫力,能够抵御流感病毒。
简介:目的:通过弱化筛选基因二氢叶酸还原酶基因(dhfr),构建双顺反子全抗体表达载体,实现全抗体在CHO细胞中的高效表达。方法:将dhfr基因分为分别编码1-105和106~187氨基酸残基的2部分,分别通过linker与亮氨酸拉链GCN4融合,分别通过内部起始位点序列与抗体轻重链基因偶联,构建成2个双顺反子表达载体pIRESLZdhfr—H和pIRESLZdhfrL。用脂质体2000转染CHO-dhfr-细胞,用无次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷的IMDM筛选培养基筛选阳性克隆。结果:筛选到的阳性克隆表达水平为1.47-3.5μg/(106细胞·d),经氨甲蝶呤(MTX)梯度加压,在MTX浓度为5×10^-8mol/L时,表达水平达到11.5μg/(10^6细胞·d)。结论:构建了基于亮氨酸拉链二聚化基础的dhfr弱化方式的双顺反子表达载体,实现了全抗体在CHO—dhfr-细胞中的高效表达。
简介:测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3"LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3"LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3’端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3"LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3’LTR,将有利于PERV全基因的克隆。