简介:目的对中国实验小型猪中内源性反转录病毒的存在与mRNA的表达进行检测,摸清中国实验小型猪中内源性反转录病毒的携带情况.方法根据已发表的PERV的序列设计并合成了三对引物,分别用于检测PERV核心蛋白基因(gag)、多聚酶基因(pol)及囊膜基因(env)的存在与表达;同时,根据目前通用的env基因分型方法合成了三对用于分型检测的引物env-A、env-B、env-C.应用PCR、RT-PCR扩增的方法,对来自于中国实验小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行了检测.结果在6个被检DNA样品中均检出了PERV特异性DNA的存在;同样,在被检RNA样品中均有PERV特异性RNA的表达,且所表达的PERV均为A型和B型,在所有样品中均未检出C型PERV的表达.结论初步表明中国实验小型猪中存在内源性反转录病毒序列,且能以mRNA的形式表达,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础.
简介:测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3"LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3"LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3’端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3"LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3’LTR,将有利于PERV全基因的克隆。
简介:摘要目的观察人内源性反转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)在胆管癌组织中的表达,并探讨其表达水平与胆管癌患者临床病理特征及预后的关系。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学染色法分别检测88例胆管癌组织和部分正常组织中HHLA2的表达,以H-score值进行评估,应用Wilcoxon秩和检验比较胆管癌及正常组织中HHLA2表达水平的差异,采用χ2检验分析胆管癌组织中HHLA2表达水平与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析HHLA2表达水平与患者总生存期(OS)的关系,拟合Cox模型评价不同指标的预后价值。结果免疫组织化学法研究结果表明,胆管癌组织中HHLA2的染色强度(169.200±7.903)显著高于正常组织(121.900±12.950,P<0.01),但HHLA2高表达的胆管癌患者总生存期与HHLA2低表达的患者之间差异无统计学意义[风险比(HR)=0.622 5,95%置信区间(CI):0.305 8~1.267 0,P>0.05];HHLA2的表达水平与病理分级呈正相关(χ2=4.306,P<0.05);多因素Cox风险比例模型显示,年龄(HR=0.154 8,95%CI:0.059 3~0.403 7,P<0.01)可作为胆管癌患者预后评判的独立风险因素。结论HHLA2在胆管癌组织中高表达,提示其在胆管癌发生发展中具有重要作用。
简介:摘要目的探讨人内源性反转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)在人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549、H1975和SK-MES-1中的表达及其生物学功能。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库采用Log-rank检验分析HHLA2 mRNA在NSCLC组织中的表达水平对患者预后的预测价值。利用RNA干扰(RNAi)技术构建HHLA2表达稳定下调的人NSCLC细胞株,通过细胞增殖实验、划痕实验及Transwell侵袭实验观察HHLA2表达下调对人NSCLC细胞株生物学功能的影响,组间比较采用t检验。结果TCGA数据库结果显示,HHLA2 mRNA表达水平低的肺癌患者的总生存期(OS)显著高于HHLA2 mRNA表达水平高的患者(肺腺癌:Log-rank P=0.082,肺鳞癌:Log-rank P=0.021)。富集分析结果显示HHLA2可能与NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力相关。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)结果显示,3种细胞株中LV-shHHLA2组HHLA2 mRNA和蛋白表达水平均显著低于LV-NC组。细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验显示,下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的增殖能力(A549:48 h:0.475±0.014比0.600±0.030,t=3.813,P<0.05;72 h:0.658±0.044比0.911±0.039,t=4.336 P<0.05;H1975:48 h:0.414±0.026比0.550±0.026,t=3.669,P<0.05;72 h:0.645±0.049比0.926±0.026,t=5.076,P<0.01;SK-MES-1:48 h:0.387±0.043比0.606±0.037,t=3.870,P<0.05;72 h:0.675±0.044比0.971±0.045,t=4.717,P<0.01);划痕实验显示,下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的迁移能力(A549:0.489±0.046比1.000±0.033,t=8.975,P<0.001;H1975:0.242±0.060比1.000±0.028,t=11.390,P<0.001;SK-MES-1:0.403±0.071比1.000±0.092,t=5.150,P<0.001);Transwell侵袭实验显示,下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的侵袭能力[A549:(150.333±7.881)个比(226.000±6.429)个,t=7.440 P<0.01;H1975:(92.000±11.790)个比(203.333±7.839)个,t=7.864,P<0.01;SK-MES-1:(95.333±14.881)个比(201.000±16.643)个,t=4.733,P<0.01]。结论干扰NSCLC细胞中HHLA2的表达可降低其增殖、迁移和侵袭能力。
简介:摘要目的分析内源性眼内炎的发病原因,探讨针对性的治疗办法。方法选取我院2013年9月~2015年4月期间收治的32例内源性眼内炎患者作为研究对象,分析实验结果,比较治疗前后患者的视力情况。结果在32例内源性眼内炎患者当中,出现高热症状17例(53.1%),具有明确内源性病因14例(43.8%),玻璃体培养阳性11例(34.3%)。治疗后内源性眼内炎患者的临床症状得以明显改善,视力水平明显提升。结论糖尿病、结核病、创伤性操作史以及骨髓移植术患者是内源性眼内炎的主要病因,给予针对性的治疗措施,根据患者的实际病情,行玻璃体切割术或眼内容摘出术,有效改善患者的临床症状,恢复其视功能,保障其生活质量。