简介:摘要语言表达是社会交往必须具备的一种能力,能否与人交流互动通畅、高效,对语言表达提出了高的要求。良好的语言表达能力是人际交往有效沟通的基本要求,在小学教育教学中,培养学生的口语表达是为了发展将来书面语言运用能力,所以口语表达能力的培养至关重要。
简介:摘要目的探讨甲胎蛋白(AFP)高表达和低表达肝细胞肝癌(HCC)中的差异表达基因表达谱,为HCC的分子机制研究及预后判断提供理论依据。方法从肿瘤基因图谱计划(TCGA)公共数据库获得368例包含完整临床信息的HCC转录组数据,根据组织AFP mRNA表达四分位数将样本分为AFP高表达组和AFP低表达组,每组各92例。应用R软件中的DEseq2包进行差异表达基因分析,应用ClusterProfiler包对差异表达基因进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,应用String数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络,筛选关键基因。采用单样本基因集富集分析方法,通过R软件GSVA包对特征基因进行富集评分,根据得分定义特征基因集表达情况。利用RNAseq数据和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行独立数据集验证和组织验证。结果TCGA数据分析显示,AFP高表达与HCC低分化、患者人种有关(均P<0.05)。生物信息学分析共获得1 382个差异表达基因,其中931个基因在AFP高表达组织中表达上调,451个基因表达下调。GO功能分析显示,AFP高表达组织中高表达的基因主要与附属肢体发育、肢体发育、骨架系统发育等过程有关,而低表达基因则与异源物代谢、类固醇代谢、细胞对异生物刺激反应等代谢相关过程有关。KEGG通路分析显示,AFP高表达组织中高表达的基因主要参与原发性免疫缺陷、神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路,而低表达基因主要与视黄醇代谢、化学致癌作用、类固醇激素的生物合成等通路相关。鉴定出1个预后相关特征基因集,该基因集包括AURKB、TTK、CENPA、UBE2C、HJURP、KIF15,其高表达与HCC患者的无复发生存和总生存有关,且特征基因集富集分数与AFP表达呈正相关(r=0.475,P<0.001)。RNAseq数据验证结果与TCGA数据分析结果基本一致。RT-qPCR检测结果显示,特征基因集中AURKB、KIF15和UBE2C在AFP高表达HCC组织中显著高表达,其表达虽然与HCC患者的无病生存、总生存无关,但AFP低表达组患者的无病生存曲线和总生存曲线均在AFP高表达组患者之上。结论AFP高表达和AFP低表达HCC在基因表达谱上存在较大差异。筛选出的特征基因集可能协同AFP共同促进HCC的发生发展,其对解释不同水平AFP HCC的作用机制有一定作用,并为HCC的预后判断提供了新的思路和依据。
简介:目的应用荧光定量RT—PCR榆测乳腺癌外周血中的表达情况.并评价其表达的临床意义。方法用荧光定量RT—PCR方法检测49例乳腺癌患者外周mCK19mRNA表达。结果49例乳腺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性28例,阳性率57.1%,统计结果显示乳腺癌患者外周血CK19mRNA的表达阳性牢在患者不同年龄、病理类别、临床分期、ER、PR状态的各组差异无显著性(P〉0.05),在淋巴结转移状态间有显著差异。结论CK19mRNA可作为RT-PCR法榆测乳腺煽患者外周血微转移的分子标志物,有助于早期预测乳腺癌发生血道微转移,指导临床治疗.
简介:摘要目的探讨PSA值增高患者前列腺按摩后尿液沉渣中DD3mRNA检测在前列腺癌诊断中的应用价值。方法在前列腺穿刺活检前或术前麻醉后收集患者前列腺按摩后患者的尿液,离心取细胞沉淀物,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应(RealtimeRT-PCR)方法检测DD3mRNA和PSAmRNA含量,以PSAmRNA作为管家基因校正沉渣中的前列腺细胞,以DD3mRNA/PSAmRNA比值表示DD3mRNA含量。SPSS13.0分析相关数据,以穿刺活检或术后病理检查结果为金标准,同时探讨了前列腺按摩后尿液中DD3Mrna含量与前列腺癌病理分级之间的关系。结果PSA值增高患者中前列腺癌患者前列腺液DD3mRNA表达量明显高于BPH,差异具有统计学意义。不同病理分级之间DD3mRNA的含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论PSA值增高的患者行前列腺按摩后尿液沉渣中DD3mRNA含量检测,较前列腺活检的损伤更小,作为前列腺癌的一种非损伤性诊断方法具有良好的应用前景。
简介:ObjectivesToexamineeffectofatorvastatinontheexpressionofCOX-2inperipheralbloodmonocytesfrompatientswithearlystageofacutemyocardialinfarction(AMI)invitro,andtheIL-6concentrationinsupernatantwasalsoexamined.MethodsPatientswithAMI(n=40)andwithstablecoronaryheartdisease(CHD)(n=18)wereregistered.Peripheralbloodmonocytesfromallparticipantswereisolatedandculturedfor24hrs,butthosefrompatientswithAMIwererandomlyexposedtovariousconcentrationofatorvastatin(0,0.1,1,10μmol/L)duringthecultivation.COX-2mRNAexpressioninmonocyteswasanalyzedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR).ConcentrationofIL-6insupernatantwasmeasuredbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).ResultsCOX-2expressionandIL-6secretionbyperipheralbloodmonocytesfrompatientswithAMI(0.92±0.13,205±46pg/ml)werehigherthanthatfromcontrols(0.19±0.08,41±8pg/ml)(bothP<0.05),andCOX-2expressionwasdramaticallyreducedupto52%byatorvastatin(P<0.05),inaconcentration-dependentmannerrespectively.TheexpressionofCOX-2frompatientswithAMIwasobviouslycorrelatedwiththesecretionofIL-6(r=0.636,P<0.05).COX-2expressioninthemonocytesafterinterventionofatorvastatinwasalsopositivelycorrelatedwithIL-6secretionbythesecells(r=0.783,P<0.05).ConclusionsCOX-2involvesinflammatoryrespondinearly-stageofAMI.AtorvastatinmaydecreaseCOX-2expressioninperipheralbloodmonocytesfrompatientswithAMIandcyclooxygenase-dependentpathwaymightbecorrelatedwiththeanti-inflammationmechanismofstatin.
简介:TA克隆构建含MOC1基因cDNA片段的重组质粒,作为TaqMan定量检测水稻分蘖基因MOC1mRNA的标准品,建立了检测方法。采用RT—PCR。的方法,从水稻分蘖芽总RNA中逆转录扩增总cDNA,PCR扩增MOC1基因中设计的目的片段,将纯化的目的片段与pMD19-TSimple载体连接,转化宿主菌JM-109,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验。建立了MOC1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达10^2拷贝,线性范围为10^2-10^7拷贝,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r=0.999),扩增效率高(E=92.8%)。成功建立了MOCI基因实时荧光PCR定量标准品,且TaqMan荧光定量RT—PCR的方法可对水稻分蘖基因MOC1mRNA的表达进行准确定量。