简介：摘要目的分析并焦磷酸测序法与Sanger测序法检测在丙型肝炎病毒基因分型中的应用情况。方法选取2018年3月——2018年11月期间100例丙型肝炎患者，收集其血浆标本，分成相等的2份，其中1份采用焦磷酸测序法进行检测，另外1份采用Sanger测序法检测，对2种检测方法在丙型肝炎病毒基因分型结果进行对比。结果通过焦磷酸测序法和Sanger测序法对HCV-RNA进行基因分型，100例标本共有93例结果一致，其余7例结果不一致，一致率达到93.0%；焦磷酸测序法和Sanger测序法在高病毒载量检出率对比上无明显差异（P＞0.05）；焦磷酸测序法和Sanger测序法在低病毒载量检出率对比上存在明显差异性（P＜0.05）。结论焦磷酸测序法对丙型肝炎患者开展病毒基因分型，检测结果可靠、准确，与Sanger测序法相比，焦磷酸测序法敏感度更高。

简介：目的研究PLK1在结直肠癌细胞迁移和侵袭过程中的作用.方法常规培养9株结直肠癌细胞,采用PCR和Western-blot法筛选PLK1高表达细胞株.设计3种RNA干扰片段,转染高表达PLK1的结直肠癌细胞株,利用实时定量PCR和western-blot法验证并干扰效果.选择高干扰效果的干扰片段,通过Transwe1l实验来评估转染后结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的变化.结果SW1116细胞中PLK1mRNA及蛋白都呈现高表达3种干扰片段转染SW1116细胞后,PLK1表达量均有不同程度下降,以片段1干扰效果最为明显.在迁移实验中,PLK1干扰组穿膜细胞数为（44±14）个,低于阴性对照组[（242±40）个]和空白对照组[（240±38）个]在侵袭实验中,PLK1干扰组穿膜细胞数为（62±3）个,低于阴性对照组[（207±12）个]和空白对照组[（211±15）个]上述差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论干扰PLK1能显著抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭能力,提示PLK1可能在结直肠癌浸润和转移中具有一定作用.

简介：摘要目的研究Claudin-7的低表达对SW480细胞生长和侵袭性的影响。方法利用RNAi技术下调结肠癌细胞系中Claudin-7的表达，划痕实验和Transwell实验评价RNAi前后SW480细胞生长和侵袭能力的变化结果划痕实验显示细胞转移运动能力明显增强，Transwell体外侵袭实验结果显示穿过细胞数明显增多(P<0.001)。结论Claudin-7基因低表达可显著增强结肠癌细胞生长和侵袭性

简介：摘要

简介：目的探讨幽门螺杆菌（H.pylori）细胞毒素相关基因A（CagA）蛋白调控胃癌细胞上皮-间质转化（EMT）的作用机制。方法以“幽门螺杆菌”、“细胞毒素相关基因A蛋白”、“胃癌细胞”、“上皮-间质转化”为关键词，在中国知网、万方数据库、Pubmed、WebofScience检索1990年1月—2015年1月国内外关于CagA及EMT的文献，进行归纳总结。结果CagA蛋白通过Ⅳ型分泌系统（T4SS）进入宿主细胞后，除了既往认为的可能参与胃黏膜上皮早期癌变的发生，还可与多种信号分子结合，通过调控基因转录水平（如上调Twist、Snail等与EMT相关的信号通路分子）、上调相关miRNA（如miRNA-584、miRNA-1290等）来降解或阻遏目标mRNA等不同途径来调控细胞的生长和运动相关的信号通路，导致胃癌细胞EMT的发生。结论CagA可通过不同的途径调控胃黏膜上皮细胞发生EMT。对这些途径及其机制的全面且进一步的研究将有助于对胃癌浸润和转移的机理的了解。

简介：目的验证smallinterferenceRNA(siRNA)片段稳定转入肾细胞癌细胞中抑制其癌细胞生长,同时试图解释其原因。方法将合成好的RNAi慢病毒颗粒稳定转入目的细胞中并达到稳定传代后,以CCK-8试剂盒检测目的细胞的生长情况,以Real-timePCR检测目的细胞中p53基因及survivin基因的表达变化。结果CCK-8法测得ACHN细胞在MDR1被干扰以后的生长水平,干扰组细胞明显低于两对照组,且干扰组细胞的细胞活力出现了明显的下降趋势。Real-timePCR检测得p53基因和survivin基因的mRNA表达水平明显降低,而无意义重组载体组(NC组)则和亲本细胞无明显差异。结论MDR1沉默可使肾细胞癌ACHN细胞增殖减慢,生长抑制。同时沉默后细胞内的mtp53及survivin基因的表达均明显减少,MDR1介导的对肿瘤细胞生长的抑制作用至少部分是通过p53和survivin基因来实现的。

简介：目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEF)增殖的影响.方法体外培养hEF.应用脂质体转染法将pIRES2-增强性绿色荧光蛋白(EGFP)-hTERT正义重组质粒及pIRES2-EGFP空载质粒分别导入hEF中,相应称为hEF-hTERT和hEF-EGFP.采用蛋白质印迹法(Westernblot)检测正常hEF、hEF-hTERT、hEF-EGFP中hTERT蛋白、分化抑制因子Id1、增殖细胞核抗原(PCNA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平.用噻唑蓝(MTT)法测定3种细胞的生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期并计算增殖指数(PI).结果(1)Westernblot:与hEF-EGFP和hEF比较,hEF-hTERT中的hTERT蛋白、Id1、PCNA和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平均较高.(2)MTT法:细胞接种后第4-6天,hEF-hTERT的吸光度(A)值明显高于hEF和hEF-EGFP(P<0.05),接种后1-6dhEF与hEF-EGFP的A值比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)细胞周期:与hEF-EGFP和hEF比较,hEF-hTERTG0/G1期细胞较少,S、G2/M期细胞较多;其PI为57.47%,高于hEF-EGFP(13.13%)和hEF(17.38%).结论外源性hTERT基因转染可使hEF增殖能力增强.

简介：目的研究乳腺癌易感基因1（BRCA1）在散发性乳腺癌中的表达与各病理学指标之间的相关性。方法应用SABC免疫组化染色法对30例乳腺纤维腺瘤和42例乳腺癌患者的病变组织中BRCA1的表达进行检测，并与腋窝淋巴结转移、肿瘤大小、组织学类型和组织学分级进行相关分析。结果BRCA1在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率为85.7％（36／42），在乳腺癌中的阳性表达率为52.4％（22／42），乳腺癌中腋窝有淋巴结转移的BRCA1阳性表达率明显低于无淋巴结转移的BRCA1阳性表达率（P〈0.05），BRCA1在乳腺癌中的阳性表达率随着组织学分级的升高有逐渐下降趋势，其中I级和Ⅲ级、Ⅱ级和Ⅲ级比较差异有统计学意义（P〈0.05），I级与Ⅱ级比较差异无统计学意义（P〉0.05），BRCA1的表达与肿瘤的组织学类型、肿块大小无关（P值均〉0.05）。结论BRCA1在乳腺癌的发生、发展过程中有重要的作用，它有可能成为临床对乳腺癌治疗和判断预后的一个生物学指标。

简介：

简介：本研究通过对急性白血病病人及体外肿瘤细胞株的DNA甲基化及基因表达的实验,探讨死亡相关蛋白激酶（death-associatedproteinkinase,DAPK）基因在急性白血病中的表达情况及其启动子区域甲基化的状态,并分析两者之间的相关程度.应用RT-PCR检测DAPK基因在白血病细胞及正常骨髓细胞中的表达;用巢式甲基化特异性PCR（n-MSP）法检测急性白血病患者及细胞株DAPK基因启动子甲基化状况;从第二轮巢式MSP扩增出的随机产物中挑选2个随机引物,交予专业机构克隆后进行序列分析.结果表明：DAPK基因在10例正常对照者骨髓标本中均有表达,DAPKmRNA在急性白血病病人骨髓标本中表达平均值为0.61±0.40,低于正常对照者,差异有显著性（P＜0.05）,其中52.94％（9/17例）的急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本DAPKmRNA表达降低或缺失,急性髓系白血病病人数据为41.18％（42/102）;细胞株U-937显示基因表达正常,HL-60表达缺失;102例急性髓系白血病病人骨髓标本中33例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为32.4％（33/102）;17例急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本中8例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为47％（8/17）;7例正常人骨髓标本DAPK启动子区均为非甲基化;细胞株U-937DAPK启动子区非甲基化,HL-60DAPK启动子区甲基化.ALL组与AML组患者骨髓细胞DAPKmRNA表达与其启动子甲基化均呈显著负相关（ALL组r=-0.855,P＜0.05;AML组r=-0.343,P＜0.05）,提示两者有密切的关联.结论：急性白血病患者中DAPK基因启动区甲基化与其mRNA的异常表达或失表达有关.

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简介：为比较斑点热黑龙江立克次体054株与从病人血液分离的H-5株，采用微量免疫荧光方法和聚合酶链反应／限制性片段长度多态性分析技术。结果表明，二者间的血清反应模式一致，表明有相同的抗原结构。同时，用立克次体190kD抗原基因设计的一对引物扩增两株立克次体DNA后，用PstⅠ消化经PAGE，其电泳图谱的酶切带的数量和迁移完全一致，说明基因组相同。结论：从抗原性和基因型两方面证实斑点热054株与H-5株二者一致。

简介：目的探讨hVEGF165基因修饰的BMSCs在SD大鼠急性牙周缺损模型中对牙周组织再生的作用.方法人工构建SD大鼠急性牙周缺损模型.设以下6组（36只SD大鼠,n=6）：空白对照（A组）;单纯e-PTFE膜（B组）;BME＋e-PTFE膜（C组）;BMSCs＋BME＋e-PTFE膜（D组）;空转BMSCs＋BME＋e-PTFE膜（E组）;hVEGF165基因修饰的BMSCs＋BME＋e-PTFE膜（F组）.分别将转染hVEGF165基因的BMSCs与未转染的BMSCs接种于胶原膜BME-10X后,按各分组植入人工牙周缺损内,并以空白胶原膜和空载体为对照.4周后取材作病理切片,HE染色观察牙周组织再生情况,测量新生牙槽骨面积、新生牙骨质面积以及新生牙周膜宽度,结果进行统计学分析.结果各组均可见不同程度的牙周组织再生,A组、B组和C组三组新生牙槽骨面积（NB）、新生牙骨质面积（NC）和新生牙周膜宽度（NP）均无明显差别（P＞0.05）;与A组相比,D组、E组、F组的NB、NC均有显著增加（P＜0.05）;与E组相比,转染有hVEGF165基因组（F组）的NB、NC和NP均有显著增加（P＜0.05）.结论hVEGF165基因转染BMSCs与胶原膜复合物可促进大鼠牙周组织再生.

简介：本研究旨在探索bag3基因在慢性淋巴细胞白血病（chroniclymphocyticleukemia，CLL）中的表达及与患者预后的关系。通过实时定量PCR技术，采用SYBRGreen荧光染料法对46例CLL患者外周血标本bag3mRNA表达水平进行相对定量检测，并分析CLL患者bag3基因异常表达和临床预后指标的相关性。结果表明，46例CLL患者bag3表达水平中位数为0．021（0．0007—1．124），明显高于正常人群[0．0025（0．0005—0．014）]；耐药CLL患者的bag3表达水平明显高于治疗有效患者的bag3表达水平；bag3的表达与性别、年龄、淋巴细胞数、临床分期、IgVH基因突变、染色体异常、CD38、ZAF70无明显相关。结论：bag3基因在CLL中的表达水平明显高于正常人群，可能与白血病细胞耐药相关，而与CLL患者-临床分期及临床常规预后因素无明显相关。

简介：目的探究甲状腺乳头癌组织中促甲状腺激素受体（TSHR）及TSHR-mRNA的表达与BRAF^V600E基因突变的关系。方法收集甲状腺乳头状癌患者组织及正常组织标本122例,利用PCR法检测甲状腺癌组织中BRAF^V600E基因突变情况,并将其分为BRAF^V600E基因突变组和BRAF^V600E基因野生组;应用免疫组织化学法检测甲状腺乳头状癌组织中TSHR的表达情况,并应用Westernblot和RT-PCR法进行验证。应用SPSS17.0统计学软件对数据进行分析。采用χ2检验和独立样本t检验分析TSHR及TSHR-mRNA的表达与BRAF^V600E基因突变的关系,P〈0.05认为差异有统计学意义。结果TSHR及TSHR-mRNA在甲状腺乳头状癌组织中表达量明显降低（P〈0.05）。BRAF^V600E基因突变组的甲状腺乳头状癌组织中TSHR及TSHR-mRNA表达水平较BRAF^V600E基因野生型组明显降低。结论甲状腺乳头状癌组织中BRAF^V600E基因突变与TSHR表达下调有关。

简介：摘要：目的：分析一例极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCADD）患者临床特征、生化指标与基因特征。方法：通过酰基肉碱、基因突变确诊1例VLCADD患儿，并对临床特征与基因特征进行讨论分析。结果：1例VLCADD患儿无明显临床表现，新生儿通过代谢疾病筛查得以确诊与治疗；酰基肉碱分析可知C12、C14、C14:1、C16:1、C18均出现一定程度得上升，其中C14:1肉碱水平升最高为3.77，为正常参考（0.02～0.3 umol/L）上限的10倍左右；基因测序结果表明患者：p.G188S:c.562G>A和p.D466Y:c.1396G>T位点杂合突变；父亲p.D466Y:c.1396G>T位点杂合突变，母亲p.G188S:c.562G>A位点杂合突变，患儿致病基因突变位点来自父母。结论：新生儿遗传代谢疾病筛查联合基因测序有助于VLCADD早发现，并实施及时有效干预，对于提升新生儿生活质量与健康具有着重要意义。

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简介：目的验证包载反雄激素受体基因三螺旋形成寡核苷酸（TFO）的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PEGPLGA）纳米粒子（TFO—NPs）对前列腺癌细胞的生长抑制作用。方法采用改良自乳化溶剂挥发法制备TFO—NPs并进行体外物化表征。将TFO—NPs、脂质体包载的TFO（TFO—Lip）和裸TFO分别转染体外培养的LNCaP细胞，倒置荧光显微镜观察转染效率，MTT法检测细胞增殖活性，RT—PCR和Westernblot方法检测AR基因表达。结果TFO-NPs平均粒径128nm，载药量为1．02％，包封率为72．28％，在体外具有缓释作用。LNCaP细胞对TFO—NPs和TFO-Lip的摄取率显著高于裸TFO。TFO—NPs和TFO—Lip对LNCaP细胞的抑制率分别为（54．5％±6．2％）和（50．6％±6．1％）显著高于裸TFO，（7．8％±0．8％）（均P〈0．05）。TFO—NPs和TFO—Lip处理组LNCaP细胞的雄激素受体表达水平显著低于裸TFO处理组。TFO—NPs和TFO—Lip处理组的转染效率、细胞抑制率和雄激素受体表达水平差异均无显著性。结论成功制备了TFO—NPs，为反基因治疗前列腺癌的研究提供了有效基因载体。

简介：目的探讨粪便中T淋巴细胞成熟相关蛋白（MAL）、细胞周期依赖性激酶抑制因子2A（CDKN2A）和6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其在结直肠癌和癌前病变筛查中的价值.方法收集69例结直肠癌、24例腺瘤、19例增生性息肉患者及26名健康人群的清晨粪便标本,提取其DNA并进行亚硫酸氢盐修饰处理,采用甲基化特异性PCR技术分析MAL、CDKN2A及MGMT甲基化状态,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,并比较3个基因甲基化联合检测与粪隐血试验（FOBT）的诊断敏感性.结果结直肠癌患者粪便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化率分别为78.3%、52.5%、55.1%,腺瘤患者分别为58.3%、41.7%、37.5%,增生性息肉患者分别为26.3%、15.8%、10.5%,正常对照人群分别为3.8%、0、3.8%结直肠癌和腺瘤患者3个基因甲基化水平均显著高于增生性息肉患者和正常对照人群（均P＜0.05）.3个基因甲基化联合检测诊断结直肠癌和腺瘤敏感度分别为92.8%和70.8%,明显高于FOBT的29.0%和25.0%（均P＜0.05）.3个基因甲基化状态与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关（均P＞0.05）.结论粪便中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化水平在结直肠癌和腺瘤患者中明显升高,其联合检测可望成为结直肠癌及其癌前病变筛查的非侵入性检测方法.