简介:神经细胞原代培养是研究神经细胞形态及功能的重要手段之一.传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,无法满足在单一神经细胞培养基础上进行实验研究的需要.本实验在传统培养方法的基础上加以改良,对原混合培养方法在胎龄、取材、温度、消化、换液、抑制剂、机械操作等方面进行了控制和改进.本培养方法具体改进如下:1.运动神经细胞取自E14大鼠胚胎的脊髓.因为胚胎运动神经元形态分化和化学分化程度较低,体外存活能力强,E14胎鼠脊髓易剥离.而传统方法是取E12~E16.E12胎鼠组织太嫩,不易分离;E16胎鼠脊柱已部分骨化,血液太多,挑离脊髓时易形成撕裂损伤.2.取材时将脊髓沿冠状面切开,取脊髓腹侧半,改变传统的整个脊髓培养,以达到培养单一运动神经元的目的.3.整个取材过程在冰袋上进行,更好的保持细胞活力.4.严格控制胰酶的浓度和消化时间.胰酶浓度是0.125%,37℃二氧化碳孵育箱内消化0.5hr较好,采用4℃含血清的DMEM液适时终止反应.为避免组织丢失,改吸弃胰酶为吸组织于另一试管中,且迅速终止消化反应.5.减少传统方法中的吹打次数,用弯头吸管代替直头吸管吹打;取消离心或细胞筛过目等步骤,降低细胞损害程度.6.细胞种植后改传统换全液为换半液,改传统培养2d换液为定时观察,按需换液.这样不仅保证了细胞在已适应了的环境中生长,并且减少了污染的机率.7.本方法不使用抑制剂,减少药物对运动神经元的损伤,使神经细胞在更接近于体内自然环境中生长.种植细胞1~2hr即可观察到细胞贴壁,胞体呈圆形,饱满、透亮,有短的突起出现.因此,本方法的优点是:不仅能够大大缩短从取材到种植的时间,提高运动神经元的活性,而且成功的获得了相对单一的运动神经元培养物(纯度达90%以上),为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体
简介:关于人类死亡的定义和机理,是一个十分复杂的问题,人们不仅要从生理、医学等方面研究和探讨什么是死亡,还要从社会学、哲学的角度研究探讨什么是死亡,给予死亡一个多视角的概念和定义。近代医学与生物学认为:人是具有意识和感觉的有机统一体,人的躯体是各种意识、行为活动的物质载体,而驾驭这个统一体的是人脑。从纯生物学的角度讲,人的死亡是人的意识、行为活动及各种生理功能的丧失。唯物主义认为:生命是整个肉体的各种运动的总和,而感觉和思维只是作为这些运动的一个部分,因此,在死人那里,感觉和思维也像所有的其他运动一样都是停止的,精神灵魂不过是物质的一种“变形”,身体死亡之时,灵魂就象蒸气一样消散了。因此,世界上根本不存在灵魂或者死者的鬼神之类。唯物主义还认为死亡是生命的终结,是对生命的否定,是对人生的盖棺定论,是对人生价值的最终评定,一个人的生命虽然结束了,但其生前所创造的价值依然存在,并对社会产生或多或少的影响,因此,后人应尊重其人格,其遗体作为其人的物质的代表也应得以妥善的处置和尊重。