简介：目的构建含有人髓细胞白血病基因-1（myeloidcellleukemia-1,MCL1）和绿色荧光蛋白基因（pEGFP）的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR）检测MCL1mRNA的表达,WesternBlot（蛋白质印迹）方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,WesternBlot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达。

简介：目的探讨MCL1蛋白在乳腺癌发生、发展中的作用.方法采用免疫组化方法检测78例乳腺癌及40例癌旁正常乳腺组织中MCL1蛋白的表达,并结合临床资料进行分析.结果MCL1蛋白表达定位于乳腺癌细胞的胞浆及胞核,阳性率为49.11%,在癌旁正常乳腺组织中几乎不表达.MCL1蛋白在乳腺癌中的表达显著高于癌旁正常乳腺组织（P〈0.01）.此外,MCL1蛋白阳性表达率在临床病理Ⅲ期组织中明显高于Ⅰ期和Ⅱ期（P=0.001）,伴淋巴结转移者的表达显著高于无淋巴结转移者（P=0.018）,其表达与年龄和肿瘤大小无关.结论MCL1蛋白表达与乳腺癌发生、分化程度和淋巴结转移相关.MCL1基因可作为乳腺癌治疗的有效靶点.

简介：摘要维奈克拉是一种高选择性、B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）的小分子抑制剂，无论是作为单一疗法，还是与去甲基化药物、低剂量阿糖胞苷联合使用均对急性髓细胞白血病（AML）治疗有效，但仍有部分患者对该治疗无反应或缓解后复发，维奈克拉耐药是其主要原因之一。抗凋亡蛋白髓细胞白血病-1（MCL-1）是BCL-2家族中一种重要的抗凋亡蛋白，对于许多细胞的存活是必需的，但其过表达在各种类型白血病的发病机制和介导维奈克拉耐药的机制中发挥重要作用。本文对MCL-1过表达在维奈克拉耐药中的作用、MCL-1过表达发生机制及克服MCL-1过表达对维奈克拉耐药的策略等方面进行综述，为提高维奈克拉在AML治疗中的效果提供临床思路。

简介：摘要目的研究LKB1蛋白和Bmi-1蛋白在肺癌患者中表达特点，为临床诊断及治疗提供依据。方法应用免疫组化方法（S-P法）检测34份肺癌患者组织中LKB1、Bmi-1蛋白阳性表达情况。结果34份肺癌组织标本中发现Bmi-1阳性表达有26例，阳性率为76.47%；LKB1阳性表达有23例，阳性率为67.65%。结论LKB1蛋白、Bmi-1蛋白表达水平，对诊断肺患具有重要判断依据，可作为临床肺癌患者的诊断和治疗的重要靶点。

简介：摘要目的研究抗凋亡基因Mcl-1在人肝细胞癌、癌旁及正常肝组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测51例人肝细胞癌组织、49例癌旁组织和25例正常肝组织中髓样细胞白血病-1（Mcl-1）基因的表达情况，并加以分析。结果Mcl-1在肝细胞癌组织中阳性率为68.63%，与正常肝组织（8.00%）相比，差异有显著性（p＜0.01）；Mcl-1表达强度与性别、年龄、HBV感染、肿瘤大小、病理分级和组织分化无相关性(p＞0.05)。结论抗凋亡基因Mcl-1在肝细胞癌组织中过表达，其异常表达与肝癌的发生有关，是肝癌治疗的一个新的细胞因子靶点.

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA PCNAP1(Lnc PCNAP1)对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响及其分子机制。方法采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Lnc PCNAP1和微小RNA(miR)-29a-3p的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测乳腺癌细胞紫杉醇半数抑制率(IC50)变化。生物信息学分析和荧光素酶报告基因用于确定Lnc PCNAP1和miR-29a-3p调控关系。组间差异的显著性采用Student’s t检验分析。结果RT-PCR分析结果显示Lnc PCNAP1在乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、BT549、T47D和BT474)较乳腺正常细胞系(MCF-10A)高表达(3.273±0.335、2.963±0.930、4.683±0.347、3.003±0.672比1.157±0.229，t＝7.382，P<0.05)，在乳腺癌组织中高于癌旁组织(5.115±1.549比3.053±1.427，t＝5.476，P<0.01)，差异有统计学意义；下调Lnc PCNAP1的表达，紫杉醇的细胞抑制率值明显高于阴性对照组，24 h紫杉醇细胞IC50值明显低于对照组(MDA-MB-231，12.904 nmol/L比31.160 nmol/L；BT549，22.987 nmol/L比52.284 nmol/L)。在293T细胞中荧光素酶报告分析显示，miR-29a-3p可以明显抑制Lnc PCNAP1-wt的荧光素酶活性(0.383±0.062比1.000±0.147，t＝5.455，P<0.01)。miR-29a-3p抑制MCL1 wt-3’端非编码区(3’UTR)的荧光素酶活性(0.350±0.051比1.000±0.102，t＝7.036，P<0.01)，差异有统计学意义。随后在共转染si-PCNAP1+si-miR-29a-3p/MCL1后，乳腺癌细胞的IC50值明显高于si-PCNAP1组。结论Lnc PCNAP1通过miR-29a-3p/MCL1信号通路促进乳腺癌细胞紫杉醇耐药性。

简介：LTR位于HIV前病毒同DNA基因组的两末端,Gag基因位于5′端LTR的下游。LTR对转录的调控作用主要是由5′端LTR进行的。LTR具有启动子的作用,在结构上具有真核启动子的典型特征。另外,HIV-1Gag蛋白还有能够自我装配成病毒样粒子(viruslikeparticle,VLP)并从细胞中释放出来的重要特性。我们利用痘苗病毒表达系统,探索了在细胞质环境中LTR中的多种功能结构对Gag蛋

简介：目的：构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α（EF-1α）,测定其对体外蛋白翻译的影响。方法：通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果：测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论：从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。

简介：目的：构建含人重组牙骨质蛋白1（recombinationhumancementumprotein1，rhCEMPl）基因的真核表达载体，观察其在酿酒酵母细胞中的表达。方法：采用PCR方法扩增rhCEMPl基因，利用定向克隆技术将rhCEMPl基因插入到中间载体pTeasy中，再进一步转插入载体pWX530。重组的pWX530-rhCEMPl在大肠杆菌DH5a中扩增后，通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定所构建的质粒。经鉴定正确的表达载体pWX530-rhCEMPl转入酵母感受态细胞中，酵母经氨基酸营养缺陷型筛选后培养表达。利用聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）电泳和酶联免疫吸附测定（ELISA）分析蛋白表达情况，离子交换层析提纯蛋白。结果：构建的重组质粒成功转入酵母细胞，通过SDS—PAGE和ELISA检测rhCEMPl表达成功。结论：成功构建的含m—CEMPl基因的真核表达载体pWX530-rhCEMPl，并能转入酵母细胞中成功表达。

简介：目的探讨Wnt-1诱导分泌蛋白-1（WISP-1）表达与乳腺癌预后的关系。方法本研究选取南昌市第三医院2011年1～6月手术切除且经常规病理证实的浸润性乳腺癌标本120例及其癌旁组织进行回顾性分析。采用免疫组织化学EnVision两步法检测WISP-1蛋白在120例乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达，同时收集这些患者的临床特征以及随访结果，采用X。检验分析乳腺癌组织中WISP-1表达与患者临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier法计算患者生存率，采用Log-rank检验比较患者生存差异，并用Cox比例风险模型分析影响乳腺癌患者预后的因素。结果WISP-1在浸润性乳腺癌中的阳性表达率（85％，102／120）明显高于癌旁组织（35％，42／120）（χ^2=7．653，P=0．003）。WISP-1表达与患者的肿瘤组织学分级（χ^2=22．846，P〈0．001）、淋巴结转移（χ^2=11．663，P=0．001）、HER-2表达（χ^2=7．825，P=0．005）以及远处转移（χ^2=35．737，P〈0．001）有关。患者随访时间为24．0-60．0个月，中位随访时间为43．9个月。生存分析结果发现，WISP-1表达水平是患者DFS的预后因素（χ^2=19．354，P〈0．001）。低表达WISP-1的患者出现复发转移的中位时间是48个月，而高表达WISP-1的患者出现复发转移的中位时间是40个月。Cox比例风险模型分析提示，WISP-1（OR=2．129，95％CI：1．099-4．124，P=0．025）、年龄（OR=4．617，95％CI：2．803-7．605，P〈0．001）、淋巴结转移（OR=2．014，95％CI：1．209-3．355，P=0．007）是乳腺癌患者DFS的独立预后因素。结论高表达WISP-1的乳腺癌患者预后更差，WISP-1蛋白可能是乳腺癌预后的标志物。

简介：摘要目的分析研究PMEPA1基因表达与肺腺癌生存之间的关系。方法从公共数据库TCGA中检索出肺腺癌患者共450例。比较PMEPA1表达在不同年龄、性别、临床分期等人群中的差别。并以PMEPA1基因表达中位数为界分为高表达组与低表达组，SPSS分析PMEPA1高表达组与低表达组生存的差异并绘制K-M曲线。结果PMEPA1表达在不同年龄、性别、有无吸烟史、TNM分期肺腺癌患者中无统计学差异。生存曲线提示PMEPA1低表达组生存优于PMEPA1高表达组（P<0.05）。结论PMEPA1高表达能作为肺腺癌病人预后不良的预测因子。

简介：摘要目的研究并分析DLC-1蛋白在胃癌中的表达及病理意义。方法此次研究的对象是选取2015年6月-2017年3月笔者所在医院接诊并采取手术治疗的胃癌患者86例，将其临床资料进行回顾性分析，并对所有患者的癌组织、癌旁组织及正常组织做了病理检查，观察并记录了DLC-1蛋白在上述组织中的表达情况，并对DLC-1蛋白与胃癌患者的病理特征和疾病预后关系进行分析总结。结果经观察比较，所有患者经治疗后均取得了较好的疗效，但DLC-1基因在正常组织中的表达含量明显高于癌旁组织和癌组织，差异均有统计学意义（P<0.05）；女性患者的DLC-1基因表达情况与男性患者比较，差异无统计学意义（P>0.05）；DLC-1蛋白表达与肿瘤部位、肿瘤大小均无关（P>0.05）；对于分化差，有远处转移，且浸润程度较严重的患者，DLC-1蛋白的表达情况较差，DLC-1蛋白在胃癌中的表达与癌症的分期、分化程度、远处播散有关，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论检测DLC-1蛋白在胃癌中的表达情况，有助于判断胃癌患者的癌细胞分化程度和癌症的分期，对于指导治疗有重要意义，同时可用于判断疾病的转归和预后，值得在临床中大力推广。

简介：Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等等。但对于PS1的精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1的精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1的cDNA全长的引物,以C57BL/6小鼠9天胚的RNA为模板,利用RT-PCR的方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1的cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中的PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融...

简介：硫氧还蛋白-1（thioredoxin-1，Trx-1）是一种广泛分布的氧化还原蛋白，通过二硫化物活性中心可逆地催化许多氧化还原反应，具有抗氧化和抗炎作用。胰腺炎的病程存在着氧化应激和炎性细胞浸润，Trx-1作为一种内生的抗氧化剂，通过直接清除活性氧发挥抗氧化作用，通过减少致炎细胞因子的表达，发挥间接抗炎、抗氧化作用。重组Trx-1能抑制中性粒细胞浸润，减轻胰腺和肺的炎症，可作为一种新的治疗急性胰腺炎的策略。

简介：目的系统评价乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法计算机检索Pubmed、EMBASE、CochraneLibrary、中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库和中文科技期刊全文数据库等，同时追查纳入文献的参考文献，纳入有关HIF-1α与NSCLC关系的临床研究。采用Stata11．0软件进行统计学分析。结果共纳入19篇文献，1488例患者。Meta分析结果显示：（1）HIF-1α在NSCLC组中的阳性表达水平高丁对照纽（OR=35．55，95％CI：18．79～67．25，P=0．000）。（2）HIF—1α在NSCLCT3、T4期与T1、T2）期的表达差异无统计学意义（OR=2．50，95％CI：0．89～6．97，P=0．081）。HIF-1α在NSCLC低分化与中、高分化（OR=1．81，95％CI：1．11～2．98），淋巴结转移与非淋巴结转移（OR=2．97，95％CI=1．84—4．80），临床分期Ⅲ、Ⅳ期与I、Ⅱ期（OR=2．56，95％CI=1．58—4．15）的表达蔗异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HIF-1α在NSCLC中呈高表达，并增加了NSCLC发生恶性行为的危险。

简介：丝氨酸乙酰转移酶(serineacetyltransferase,SAT)是甲硫氨酸和半胱氨酸合成途径的关键酶,利用该基因提高作物中甲硫氨酸水平具有广阔的应用前景。为了研究拟南芥SAT1(ArabidopsisthalianaSAT1)基因的蛋白表达情况及相关功能,构建了带有His标签的AtSAT1基因原核表达载体pET-30b(+)-SAT1-His(6)。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化获得了抗原蛋白SAT1-His(6)。该抗原蛋白经免疫兔子,成功制备了具有较高特异性和灵敏性的SAT1蛋白多克隆抗体。Westernblotting表明,该抗体可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量,为后期对该基因开展进一步深入研究具有重要意义。

简介：无

简介：摘要目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）蛋白在乳腺癌中的表达及临床病理意义。方法收集2006—2018年浙江省东阳市人民医院病理科浸润性乳腺癌石蜡标本417例和同时切除的正常乳腺组织石蜡标本26例。采用免疫组织化学EnVision法检测和比较浸润性乳腺癌组织和正常乳腺组织中HMGB1蛋白的表达。分析HMGB1蛋白胞核高表达及胞质阳性表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果（1）乳腺癌中HMGB1蛋白胞核高表达率及胞质阳性率分别为80.8%（337/417）和16.8%（70/417），而其在正常乳腺组织中分别为46.2%（12/26）和0。乳腺癌中HMGB1蛋白胞核高表达率和胞质阳性率均明显高于正常乳腺组织（分别P<0.001，P=0.046）。（2）组织学级别高、雌激素受体（ER）阴性、孕激素受体（PR）阴性的乳腺癌患者，其HMGB1蛋白胞核高表达率明显更高（分别P=0.006，P=0.004，P<0.001），胞质阳性率也明显更高（均P<0.001）。Logistic回归模型多因素分析显示乳腺癌患者HMGB1蛋白胞核高表达的独立相关因素为肿瘤组织学分级（OR=2.188，95%CI=1.078~4.443，P=0.030），而HMGB1蛋白胞质阳性表达的独立相关因素包括肿瘤组织学分级（OR=3.031，95%CI=1.600~5.742，P=0.001）、ER（OR=0.129，95%CI=0.034~0.494，P=0.003）及TNM分期（OR=3.820，95%CI=1.042~14.001，P=0.043）。（3）Cox比例风险模型多因素分析显示HMGB1蛋白胞核高表达是影响乳腺癌患者总生存的独立危险因素（HR=0.366，95%CI=0.138~0.972，P=0.044）。结论HMGB1蛋白胞核高表达及胞质阳性表达与乳腺癌患者多项预后不良因素密切相关，有望成为抗乳腺癌治疗的一个潜在生物学标志。

简介：摘要目的探讨内质网应激凋亡通路相关蛋白在慢性氟中毒大鼠肾皮质中的表达变化及意义。方法24只健康SD大鼠，根据体质量（100 ~ 120 g）采用随机数字表法分为4组（6只/组，雌雄各半）；对照组大鼠饮用自来水（含氟量< 0.5 mg/L），低、中、高氟组分别饮用含氟量为10、50、100 mg/L（氟化钠）的自来水。各组大鼠饲养180 d后，观察氟斑牙发生情况；收集24 h尿样，氟离子选择电极法检测尿氟含量；大鼠麻醉后处死取肾脏组织，苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠肾皮质病理学改变；免疫组织化学染色法观察大鼠肾皮质内质网应激凋亡通路相关蛋白[肌醇依赖性激酶1α（inositol-requiring enzyme 1α，IRE1α）、凋亡信号调节激酶1（apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1）、C-Jun氨基酸末端激酶（C-Jun N-terminal kinase，JNK）及磷酸化JNK（phosphorylated-JNK，P-JNK）]的表达水平。结果对照组大鼠未检出氟斑牙，低氟组大鼠氟斑牙发生率为2/6，中氟组为5/6，高氟组为6/6。与对照组[（5.707 ± 1.190）mg/L]比较，低、中、高氟组大鼠尿氟[（17.028 ± 3.006）、（34.378 ± 12.045）、（94.759 ± 31.773）mg/L]均较高（P均< 0.05），且高氟组明显高于低、中氟组（P均< 0.05）。HE染色可见，与对照组比较，中、高氟组大鼠肾皮质区肾小管及肾小球细胞体积增大，细胞排列紧密，细胞质嗜酸性增强。免疫组织化学染色结果显示，对照组和低、中、高氟组大鼠肾皮质JNK蛋白表达水平比较差异无统计学意义（F = 0.07，P > 0.05）；高氟组大鼠肾皮质IRE1α、ASK1、P-JNK蛋白表达水平与对照组和低、中氟组比较均较高（P均< 0.05），且中氟组IRE1α、ASK1蛋白表达水平均明显高于对照组及低氟组（P均< 0.05）。结论长期过量氟摄入可导致大鼠肾皮质损伤，其损伤机制可能与内质网应激凋亡通路IRE1α-ASK1-JNK的活化有关。

简介：目的探讨原发性肝癌中Prox1蛋白的表达。方法选择2016年3月至2017年6月苏州大学附属第一人民医院普外科手术切除的肝癌组织及癌旁正常组织标本54例，术前均未行放化疗，术后经病理标本明确诊断。收集13例同时期因其他肝脏疾病接受肝脏手术的患者标本作为正常对照组。采用免疫组织化学方法检测肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中Prox1的表达。结果1）Prox1蛋白在肝癌组织与癌旁组织中表达低于正常肝组织（P＜0.05），肝癌组织与癌旁组织，肝癌组织与正常组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。2）Proxl蛋白表达与肝癌组织分化程度(r=0.930，P<0.01)呈正相关。结论肝癌组织中Prox1表达低于正常肝组织，同时Prox1表达与肿瘤分化程度有关，分化程度越高，表达越高。可能与原发性肝癌的发生、发展有关，但其是否为原发性肝癌抑癌基因仍需进一步研究。