简介：

简介：摘要：目的：实时荧光PCR法与PCR-反向点杂交法在HPV检测中的对比研究。方法：选取我院2023年5月至2024年5月宫颈癌筛查的162例患者为研究对象，分别行实时荧光PCR法与PCR-反向点杂交法对样本进行HPV检测，以病理组织学检查结果为金标准，对比两种方法在HPV检测中的阳性检出率、一致性以及性能评估。结果：病理组织学检查结果为阳性122例，阴性40例；实时荧光PCR法和PCR-反向点杂交法在HPV检测中阳性检出率分别为70.99%和66.67%，差异无统计学意义（P＞0.05），两种方法检测符合率为90.74%，kappa值为0.78；实时荧光PCR法在HPV检测中灵敏度、特异性和准确度均高于PCR-反向点杂交法（P＜0.05）。结论：两种检测方法具有较高度的一致性，均可广泛用于宫颈癌筛查；实时荧光PCR法在HPV检测中临床诊断价值更高，具有更高的灵敏度、特异性和准确度，操作更方便，检测用时更短，更适合临床实验室推广应用。

简介：摘要目的建立多重荧光PCR-熔解曲线法，并评价其同时检测假丝酵母菌、曲霉菌及新型隐球菌的诊断价值。方法建立多重荧光PCR-熔解曲线法并对其检测体系进行优化。收集临床高度怀疑为侵袭性真菌感染（IFI）的各类临床样本179例，其中血液65例、深部痰液35例、尿液30例、脑脊液18例、胸腹水12例、肺泡灌洗液10例、新鲜肺组织9例。通过敏感性、特异性、重复性实验验证多重荧光PCR-熔解曲线法的检测性能，并应用受试者工作特征（ROC）曲线评价该方法的诊断效能。结果建立的多重荧光PCR-熔解曲线法可同时检测8种常见病原真菌，包括4种假丝酵母菌（白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌）、3种曲霉菌（烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉）和新型隐球菌。其最低检测限为1 × 104 cfu/mL，且常见细菌无扩增反应，重复性实验解链温度波动小于0.5 ℃。179例临床样本中，以培养法、镜检法、病理诊断等"金标准"方法诊断IFI阳性为112例，多重荧光PCR-熔解曲线法检测阳性为96例。多重荧光PCR-熔解曲线法同时检测假丝酵母菌、曲霉菌及新型隐球菌的敏感度为0.857，特异度为0.970，阳性预测值为0.980，阴性预测值为0.802，ROC曲线下面积为0.914，95%置信区间为0.868 ~ 0.959，P < 0.001。结论本研究建立的多重荧光PCR-熔解曲线法可快速、准确、高通量同时检测假丝酵母菌、曲霉菌及新型隐球菌，对于IFI的早期诊断具有重要意义。

简介：【摘要】目的  探讨荧光聚合酶链反应（PCR）探针溶解曲线法在老年肺结核患者耐药性检测中的价值。方法  收集老年肺结核患者痰标本55份，经菌种鉴定分离133株（例）菌株作为研究对象。对其采用PCR探针溶解曲线法、表型药敏试验，分析对利福平、异烟肼、喹诺酮、卡那霉素的耐药性。对比PCR探针溶解曲线法、表型药敏试验两种检测方法耐药性检测结果的一致性，采用kappa值评价。结果  PCR探针溶解曲线法、表型药敏试验结果显示在利福平、异烟肼、喹诺酮、卡那霉素中一致性均较好，kappa值分别为0.76、0.81、0.84、0.80。结论   PCR探针溶解曲线法在肺结核患者耐药性的检测中具有较高价值，基本与表型药敏试验结果相当。

简介：摘要目的比较多重荧光PCR-熔解曲线法与病理诊断法检测福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肺组织样本中病原真菌的价值。方法选择2014—2019年本院病理科病原真菌阳性患者的42份肺组织样本（念珠菌8份、曲霉菌23份、隐球菌11份）作为阳性组，病原真菌阴性的肺组织样本50份作为阴性组，均进行多重荧光PCR-熔解曲线法检测，并应用配对χ2检验和Kappa值对两种方法的检测结果进行比较。结果阳性组42份样本多重荧光PCR-熔解曲线法检出23份阳性，并可分辨至种水平，其中念珠菌4份（白色念珠菌2份、热带念珠菌1份、克柔念珠菌1份）、曲霉菌13份（烟曲霉11份、黄曲霉2份）、新型隐球菌6份。阴性组50份样本多重荧光PCR-熔解曲线法检测均阴性。Kappa值0.568，以病理诊断法为"金标准"，多重荧光PCR-熔解曲线法检测病原真菌的灵敏度为54.8%（23/42）、特异性为100.0%（50/50）。结论多重荧光PCR-熔解曲线法检测FFPE样本中病原真菌的灵敏度不高，但可以将病原真菌鉴定至种，是病理诊断法的补充。

简介：摘要目的评价PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的诊断效能。方法回顾性分析2017年9月至2020年12月间于广东省妇幼保健院进行地中海贫血产前基因诊断的8 005份胎儿的样本，所有样本均经多重缺口-PCR、PCR-反向斑点杂交法、Sanger测序和多重连接依赖性探针扩增等方法确诊基因型，同时应用PCR-流式荧光杂交技术作为地中海贫血常见突变位点的验证平台进行平行检测。分析基因检测结果，并比较PCR-流式荧光杂交技术与传统方法对于地中海贫血常见突变位点的检测结果的诊断效能差异。结果传统方法共检出地中海贫血阴性样本1 939份，阳性样本6 066份，其中包括α-地中海贫血4 513份、β-地中海贫血1 475份以及αβ-地中海贫血78份。经软件首次判读，PCR-流式荧光杂交方法共判读成功7 845份，与传统方法比较，其敏感度、特异度和准确度均为100%。首次判读失败的160份样本经复检或人工复核数据后均可成功正确判读。结论PCR-流式荧光杂交方法与传统方法对于地中海贫血产前基因诊断中常见突变位点的诊断效能无差异。

简介：目的建立基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌（salmonella,Sa）、肠炎沙门菌（salmonellaenteritidis,SE）和鼠伤寒沙门菌（salmonellatyphimurium,ST）的方法。方法根据沙门菌aceA基因、肠炎沙门菌特异序列（GenBank：AF370707.1）、鼠伤寒沙门菌的STM4599序列（GenBank：AERV01000023.1）,分别设计引物和TaqMan探针,在探针的5′端分别标记FAM、VIC、cy5,建立基于TaqMan探针三重实时荧光PCR检测沙门菌的方法。结果29种不同血清型沙门菌均扩增出aceA基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出15株肠炎沙门菌和11株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。aceA、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光PCR扩增效率分别为89%、87%、90%,最低检测浓度分别达到280cfu/ml、260cfu/ml、300cfu/ml。结论本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。

简介：目的：用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）法准确地定是检验血清中乙型肝炎病毒（HBV）的数量和免疫指标，以指导临床。方法：采用HBV－DVAFQ－PCR诊断试剂盒，以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术组合所产生的实时检验定量PCR方法，检测了58例临床血清标本。结果：经FQ－PCR检测，9例HBV的HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBcAb都阳性标本，其HBV－DNA的阳性率为100％，平均HBV－DNA拷贝数为2．0×10^8/ml；16例HBsAg、HBeAb、HBcAb都阳性的标本，其阳性率为62．5％（10例），平均拷贝数为5．2×10^5/ml，而常规PCR只有33％的阳性率；7例HBsAb、HBeAb、HBcAb都阳性的标本，其阳性率为14．3％（1例），平均拷贝数为4．7×10^3ml。结论：HBV－DNA的FQ－PCR检测较常规PCR更具有较高的灵敏度和特异性，且定量准确，结果可靠，能够避免PCR后处理导致物假阳性污染，可以真实反映HBV的感染和低复制状态，对于乙型肝炎的临床诊断，治病方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。

简介：目的建立以TaqMan探针实时荧光PCR技术为基础的核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（Nucleotide-bindingoligomerizationdomain,LeucinerichRepeatandPyrindomaincontaining,NLRP3）基因单核苷酸多态性（Singlenucleotidepolymorphism,SNP）检测方法。方法以20份健康人血液样本为对象,选择NLRP3基因的两个SNP位点（rs3806265和rs35829419）,针对每个位点分别设计1对PCR引物和2条TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增,对SNP位点进行分型。用常规PCR和基因测序的方法对TaqMan探针实时荧光PCR分型的结果进行验证。结果用建立的TaqMan探针实时荧光PCR分型法对20份样本进行检测,其中rs3806265位点发现TT基因型3份,TC基因型8份,CC基因型9份;rs35829419位点发现CC基因型20份,无AC和AA基因型。分型结果与常规PCR及基因测序分型方法完全一致。结论基于TaqMan探针技术的实时荧光PCR方法简单、快速,可实现对NLRP3基因位点的分型检测。

简介：摘要黑素瘤是一种侵袭性很强的皮肤恶性肿瘤，具有快速生长和早期转移的特点，目前的治疗仍以手术切除为主。黑素瘤在早期诊断、彻底切除方面仍然存在一些挑战，影响患者的预后。目前荧光探针在黑素瘤的诊断、手术切除、前哨淋巴结定位及切除等方面均取得长足的进步，具有化学稳定性好、不良反应少、特异性高、准确率高、可视化等优点，可为黑素瘤的诊治提供新的思路。

简介：

简介：

简介：【摘要】目的：了解复合探针实时荧光RT-PCR法对检测小儿上呼吸道感染甲型流感病毒的作用。方法：按照随机数字表法选取2023.1-2023.12本市3所医院小儿呼吸科确诊有流感样呼吸道症状的患者40例，收集患者基础信息、咽拭子和鼻拭子样本，采集样本后冷藏运输送往疾控中心实验室进行保存。分别使用甲型流感抗原检测试剂盒（胶体金法）和复合探针实时荧光RT-PCR法检测样本，观察比较两种检测方式的检验结果和准确度。结果：经过检测，甲型流感抗原检测试剂盒（胶体金法）检测出阳性样本36例，阴性样本4例，检测准确度为90.00%；复合探针实时荧光RT-PCR法检测出阳性样本40例，检测准确度为100.00%（P<0.05）。结论：采用复合探针实时荧光RT-PCR法检测甲型流感病毒结果更加准确，提高了检验时的敏锐度和可靠性，为确定是否感染甲型流感病毒工作提供高效的方式。

简介：[摘要 ] 目的：探讨长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)干扰后，在人支气管上皮细胞（ the human bronchial epithelial cells， 16HBE）中的表达情况。方法 :应用 real-timePCR方法检验 lncRNA- ENST00000414355干扰效果。结果 : 正常 16HBE细胞中 ENST00000414355干扰 48h后，三条阳性序列的实验组 ENST00000414355表达均下降，都具有统计学意义 P值均 <0.0001；在氯化镉转化 16HBE成瘤细胞中 ENST00000414355干扰后，第一条阳性序列转染下达到沉默效果，且具有统计学意义 P<0.0001；在氯化镉转化 16HBE第 35代细胞在 ENST00000414355三条阳性序列转染下没有出现沉默效果所示。结论： ENST00000414355在正常 16HBE细胞中干扰效果最明显，在氯化镉转化 16HBE成瘤细胞中只有一条序列有干扰效果。

简介：摘要目的研究荧光定量PCR检测性病的结果。方法抽取2016年1月至2017年1月在我中心就诊的疑似性病患者58例作为研究对象，所有疑似患者均进行荧光定量PCR检测，并与医生根据患者临床症状、体征、流行病史等因素诊断为临床诊断病例进行分析检测结果比较。结果58例疑似患者荧光定量PCR检测结果与临床诊断结果比较无统计学差异（P＞0.05）。结论荧光定量PCR检测性病具有较高的检出率，能够为临床治疗提供诊断依据，具有应用及推广的价值。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)干扰后，在人支气管上皮细胞（thehumanbronchialepithelialcells，16HBE）中的表达情况。方法应用real-timePCR方法检验lncRNA-ENST00000414355干扰效果。结果正常16HBE细胞中ENST00000414355干扰48h后，三条阳性序列的实验组ENST00000414355表达均下降，都具有统计学意义P值均<0.0001；在氯化镉转化16HBE成瘤细胞中ENST00000414355干扰后，第一条阳性序列转染下达到沉默效果，且具有统计学意义P<0.0001；在氯化镉转化16HBE第35代细胞在ENST00000414355三条阳性序列转染下没有出现沉默效果所示。结论ENST00000414355在正常16HBE细胞中干扰效果最明显，在氯化镉转化16HBE成瘤细胞中只有一条序列有干扰效果。

简介：摘要目的评价基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析（PMCA）技术作为耳聋基因基因诊断的可行性。方法选取2017年1－4月在珠海市妇幼保健院出生的经MALDI-TOF-MS诊断为耳聋基因携带者的婴儿的脐带血标本92份和正常的脐带血标本4份，采用PMCA技术对上述96份标本进行耳聋基因检测，检测结果不一致的样本，以DNA测序技术作为金标准，对上述两种方法检测耳聋基因突变的检测性能进行评估。结果探针熔解曲线分析法除了2例不在检测范围外，其余的94份标本均能正确检出。经测序鉴定，该两例未能检测出，是由于基因检测位点的不同所导致。结论PMCA技术可作为MALDI-TOF-MS技术检测耳聋基因基因突变的替代或验证方法。

简介：摘要目的探究对结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变以PCR-反向点杂交法检测的效果。方法设计结核分歧杆菌rpoB基因引物，采用PCR-反向点杂交法对40例结核杆菌临床菌株耐药性进行检测，对照由DNA测序法检测的标准结核分歧杆菌（H37Rv）rpoB基因，确定rpoB基因的变异情况，对PCR-反向点杂交法的灵敏度和准确性作出评价。结果40株临床菌株中有11株利福平敏感株的基因序列与对照的H37Rv相同，剩下的29株耐药株中检测到变异基因27株，其特异性为100%，阳性率为93.1%。结论rpoB基因本身高度保守,但由于rpoB基因突变导致结核分枝杆菌对利福平耐药。本研究使用PCR-反向点杂交法针对rpoB基因高突变区设计引物，此方法快速、简便、准确,能有效监测临床标本中结核分枝杆菌,对临床早期诊治结核病有极大帮助。

简介：摘要目的探讨PCR-高分辨熔解曲线(HRM)法在Kidd血型基因分型中的应用。方法采用简单随机抽样法，选择2019年10月至11月，于深圳市血液中心参加无偿献血的256例献血者为研究对象。本组献血者年龄为18～60岁；男性献血者为142例，女性为114例。采用血型血清学试验方法对本组献血者全血标本的红细胞抗原表型进行检测。采用PCR-SSP和PCR-HRM法对本组献血者的DNA标本进行Kidd血型基因分型。对于基因分型与血型血清学检测结果不一致的标本，则通过JK基因第9外显子直接测序法进行确认。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求，并且于献血前与所有献血者签署《献血者知情同意书》。结果①本组256例无偿献血者全血标本的血型血清学检测结果显示，Jk(a-b+)、Jk(a+b+)和Jk(a+b-)表型献血者分别为86、109和61例。②本组256例献血者基因组DNA标本的PCR-SSP和PCR-HRM法的Kidd血型基因分型结果一致，JKB/JKB、JKA/JKB和JKA/JKA基因型献血者分别为82、115和59例。③ 22例(8.6%，22/256)献血者的血型血清学表型与基因分型结果不一致。其基因组DNA标本经JK基因第9外显子直接测序结果显示，JK基因第9外显子存在c．838 G>A突变，与JKA/JKB基因分型结果相符。结论本研究建立的PCR-HRM法可准确进行Kidd血型基因分型，该方法可以有效地辅助Kidd血型精准鉴定。在进行Kidd血型鉴定的实际工作中，可联合血型血清学和PCR-HRM法，以提高Kidd血型鉴定准确度。

简介：摘要病毒检测在病毒感染的预防、诊断、治疗及病毒性疫苗的质量控制等方面发挥着重要的作用。实时荧光定量PCR通过荧光信号实时检测目的基因扩增数量，是目前实验室最常用的的病毒检测技术，具有灵敏度高、检测快速、污染小等优点。此文对实时荧光定量PCR技术在病毒感染的快速诊断、病毒核酸定量检测和病毒型别的鉴定三个方面的应用进行阐述。