简介:传统上我们都采用10%福尔马林固定组织.福尔马林系甲醛液的俗称,是由甲醛(FormaldenydeHCHO)气体饱和于水而成.一般市售的福尔马林含甲醛37%~40%.配法:取40%甲醛液10ml与蒸馏水90ml混合,即得4%甲醛,亦即10%福尔马林.由于福尔马林久存则氧化产生甲酸,呈酸性,固定标本不适宜,特别是需长期固定的组织更不适合,故我们主张采用中性福尔马林固定组织标本.其配法如下:40%甲醛100ml酸性磷酸钠(或无水磷酸二氢钾)4.0g磷酸氢二钠6.5g蒸馏水900ml因中性福尔马林中加入了磷酸缓冲液,不易被氧化,能长期保持pH7.0,故对组织标本的固定(特别是长期固定)、染色效果非常有利.为了证实两种固定液对组织标本的固定效果,我们将皮肤组织分成两组,每组五块皮肤组织标本.其固定方法如下:第一组由10%福尔马林固定组织3m.第二组由中性福尔马林固定组织3m结果显示:(1)从肉眼观察:第一组固定后组织标本的收缩程度及变硬度明显大于第二组.(2)镜下观察:第二组的正常组织细胞形态、层次分明、色彩鲜艳,正常组织细胞基本上无萎缩、变形.而第一组的正常组织形态有明显萎缩,较第二组层次模糊、色彩暗淡.综上所述,我们建议日常活体组织检查应采用中性的福尔马林固定.
简介:过去常用经典的Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位,现在广泛使用DAB法.我们对这两种方法进行了比较.方法如下:取Wistar大鼠的心、肝、肾组织,用液氮骤冷,恒冷箱切片(厚7μm),进行以下实验:Nadi反应:切片入孵育液(N-苯基-对-苯二胺3mg、1-羟基-2-萘酸3mg溶于二甲基亚砜0.1ml,0.05M的磷酸缓冲液pH7.210ml,混匀后过滤)室温30min.入Lugol碘液2min,入5%硫代硫酸钠4min,入1%醋酸钴60min,蒸馏水洗,甘油明胶封固.DAB法:切片入孵育液(0.05M磷酸缓冲液pH7.210ml,3,3′-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)9mg,细胞色素C15mg,混匀后过滤)室温5min.切片用缓冲液清洗,入蒸馏水,甘油明胶封固.HE染色:切片先用10%Formalin固定10min,再做常规HE染色.对照:Nadi反应和DAB法都用迭氮钠预孵育5min(10ml缓冲液中含6mM迭氮钠),再入含6mM迭氮钠的孵育液中孵育,以下的步骤与上述步骤相同.DAB法还用不含细胞色素C的孵育液做对照.实验结果:HE染色的切片显示组织结构正常.Nadi反应的阳性产物为黑绿色的颗粒,可见弥散的现象.DAB染色的阳性产物为棕色颗粒,很少见有弥散现象.对照切片的结果:用迭氮钠制酶活性的Nadi反应有弱阳性产物,而用迭氮钠的DAB法细胞色素C的切片均呈阴性反应.我们认为显示细胞色素氧化酶的经典方法Nadi反应存在反应产物弥散的现象,用迭氮钠抑制酶的活性后仍有阳性产物出现,因而该法只能表明线粒体的存在,而其定位不够准确.DAB法的方法简便,反应产物不易扩散,可较准确地定位线粒体的存在部位.另外,DAB的沉淀物能与四氧化锇反应形成锇黑,可用于电镜观察.经以上的实验观察和比较,我们认为无论从反应的特异性、定位的准确性,还是电镜应用性等方面看,显示细胞色素氧化酶的DAB法都优于Nadi反应.