简介:大环内酯类抗生素基因工程是近年来生物工程领域研究的一个热点,利用基因工程改造大环内酯类抗生素合成基因,已经合成了100多种"非天然”的天然化合物,为筛选新抗生素开辟了新的途径.本研究以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模板,先用PCR扩增出红霉素合成基因eryKR6两侧片段,再用重叠PCR将其拼接成去除KR6的约3.2kbDNA片段,并克隆于pWHM3载体,构建了同源重组质粒pWHM2201.用PEG介导将pWHM2201转入糖多孢红霉菌A226原生质体.PCR鉴定和生物活性检测均显示pWHM2201已重组到红霉素合成基因位点.在无抗性R3M斜面上生长两代后,制备重组体原生质体,并涂R3M平皿.利用PCR筛选出KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M.
简介:由中国生理学会循环生理专业委员会和四川泸州医学院联合主办的第二届“细胞膜片钳实验技术培训班”于2012年7月8日至13日在四川泸州医学院心血管医学研究所成功举办。来自全国28个医学院、研究所和医院等50多位学员参加了培训班。本次培训班聘请了国内外在细胞膜片钳实验研究领域的知名专家、教授授课,其中包括中国生理学会循环生理专业委员会主任委员曾晓荣教授、日本德岛大学井上勋教授以及东乐科技有限公司技术总监刘振伟博士,同时还有教学与实验经验丰富的培训人员指导学员亲自进行实验操作,体验实验过程,熟悉方法和步骤。本次培训班的主要内容包括:膜片钳技术在医学领域的应用和发展趋势;离子通道的分类、结构和功能;Axon膜片钳放大器基本原理及参数设置和应用;pClamp膜片钳数据采集分析软件的使用:FundamentalsofElectrophysiology;细胞的分离准备;微管电极的制作以及电流的记录等内容。本次培训包括三天的集中授课和两天的实验操作,共计42学时,让学员对从细胞的分离准备到最终上机操作的细胞膜片钳实验的具体步骤有了感性认识。培训过程不仅包括对细胞膜片钳技术的系统理论指导,还包括对学员在实践过程中遇到的具体问题的解答。学员们普遍对此次培训班的成功举办表示满意。大家一致认为,通过此次培训,对膜片钳技术的理论知识有了系统的学习,对膜片钳实验技术操作有了更深入的了解,对相关软件的操作也有了较为熟悉的掌握。来自全国各地的学员在学习的过程中也借此契机进行了较多的学术交流,深入了了解,也为今后进一步的交流奠定了良好的基础。