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  • 简介:卷丹、麝香百合品种富田和离体鲜切花花蕾为材料,比较Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB改进法和SDS改进法提取总RNA效果,结果表明,SDS改进法能有效去除多糖,提取RNA28SrRNA亮度约为18SrRNA两倍,OD260/OD280值介于1.7-2.2之间,卷丹RNA得率为132.52μg/g,富田RNA得率为186.88μg/g。进步用SDS改进法分别提取富田外轮花瓣、内轮花瓣、雄蕊、雌蕊、叶和茎RNA,同样可以获得完整纯度高RNA,其中28SrRNA亮度约为18SrRNA两倍,OD260/0D280值介于1.7~2.2之间,说明此方法适用于百合各个组织RNA提取。经RT—PCR获得了花发育基因特异性条带,说明用SDS改进法从百合中提取RNA质量好、产率高、完整强,完全适合于百合进分子生物学研究。

  • 标签: 百合 RNA SDS改进法 多糖
  • 简介:NBS类抗病基因是植物中最大类抗病基因。亚麻荠是新型能源特用油料作物,抗病、虫、杂草逆境能力极强。然而,有关其抗性分子机理鲜有报道。本研究采用NB-ARC标准结构域HMM模型,对亚麻荠本地蛋白质数据库进行检索分析,在全基因组水平上鉴定NBS类抗病基因。结果表明亚麻荠基因组共有472个NBS类抗病基因,分布于17条染色体上,56%基因成簇分布。所有串联重复基因也都以基因簇形式出现,这表明串联重复有利于基因簇形成。系统发生树分析显示TIR-NBS-LRR(TNL)和CC-NBS-LRR(CNL)两类亚家族抗病基因可能在进化过程遵循不同进化路径,导致其在应对病原菌侵染时发挥不同功能。本研究发现将为鉴定新植物抗病基因和解析亚麻荠高抗病机制提供科学参考。

  • 标签: 亚麻荠 抗病基因 NBS家族 基因簇 生物信息学
  • 简介:为建立简单高效黄瓜转基因技术体系,本研究携带有抗除草剂Bar基因农杆菌工程菌浸泡处理开花期黄瓜嫩梢,进行活体植株转基因方法研究。研究结果表明最佳转化体系为:表面活性剂silwet-77适宜浓度0.01%-0.05%;菌液浸泡最佳位置为顶部以下10cm嫩梢,最适子房发育时期为开花前5-12d子房;农杆菌菌株EHA105浸染效果优于LBA4404;3次重复浸泡处理有利于提高转化频率。黄瓜苗期除草剂抗性筛选适宜浓度为17%草胺膦1100倍稀释液。研究获得除草剂抗性植株1320株,PCR阳性植株36株,其中30株经Southern斑点杂交后有阳性信号,最高转化效率为9.5%。

  • 标签: 黄瓜 转基因 活体植株 抗除草剂
  • 简介:龙牙百合鳞片叶切块为外植体,通过多种培养基比较试验,得出MS+2,4-D2mg/L+6-BA0.2mg/L是诱导愈伤最佳培养基,MS+6-BA1mg/L+NAA0.05mg/L是不定芽诱导伸长适宜培养基.MS+NAA2mg/L是生根最佳培养基.本试验已建立了适用于龙牙百合遗传转化快速高频再生系统.用携带有几丁质酶基因和β-1、3葡聚糖酶基因工程菌,通过农杆菌介导法和基因枪转化法转化龙牙百合,经PCR和点杂交检测证明外源基因已经整合到植物染色体.同时对农杆菌介导法和基因枪法进行比较,发现农杆菌介导法转化率为16.7%,基因枪法转化率为50%,因此可能基因枪转化法更适于龙牙百合遗传转化.

  • 标签: 龙牙百合 植株再生 遗传转化 外植体 培养基 基因枪法
  • 简介:综述了现代分子标记技术在番茄几个主要质量抗病性状和数量抗病性状基因定位研究进展.质量抗病性状基因定位主要包括番茄病毒病、番茄根结线虫、番茄白粉病、番茄细菌斑疹病、番茄斑萎病、番茄叶霉病等,数量抗病性状基因定位主要包括番茄青枯病和番茄晚疫病.

  • 标签: 番茄 基因定位 分子标记 质量抗病性状 数量抗病性状
  • 简介:利用转sck基因高代稳定水稻亲本和组合为材料,研究了外源sck基因遗传表达特性。结果表明:外源sck和hpt基因都能自交连锁稳定遗传到T11并表达,且连锁基因和表达活性可杂交转移到不育系和杂交组合,外源sck基因在杂种F2代单基因显性遗传3:1模式进行分离,但也出现自交hpt基因丢失,杂交hpt基因甚至sck基因未获得成功转移现象。田间抗虫观测表明,转sck基因水稻对钻蛀螟虫抗性不足,对卷叶螟具有定抑制作用。外源sck基因在转化或杂交转育亲本组合均获得表达,且具有空间分布特性和基因累加效应,基本为叶片表达活性高于叶鞘。

  • 标签: 转基因水稻 sck基因 hpt基因 遗传表达
  • 简介:为建立适合于大葱花蕾总蛋白双向电泳体系,本研究大葱花蕾为材料,对大葱花蕾总蛋白提取方法、IPG胶条梯度范围、上样量、等电聚焦等双向电泳关键步骤进行优化。结果表明最适宜大葱花蕾总蛋白双向电泳条件为:TCA-丙酮沉淀法提取大葱花蕾总蛋白,选择24cmpH4~7IPG胶条,上样量800μg,按聚焦程序Ⅰ聚焦后进行双向电泳并采用考马斯亮蓝染色。采用该体系可以获得分辨率高、重复性好双向电泳图谱。

  • 标签: 大葱 花蕾 蛋白质组 双向电泳
  • 简介:MADS-box基因是类编码转录因子基因大家族,在植物发育过程具有重要作用。本研究采用RT-PCR技术从叶籽银杏(Ginkgobilobavar.epiphyllaMak.)克隆了MADS-box基因GbMADS5。序列分析表明,该基因编码区全长为666bp,含有个完整开放阅读框,编码221个氨基酸残基组成蛋白质,具有典型植物MADS-box基因结构,编码肽链包含了MADS区、I区、K区和C末端,但该基因不具有拟南芥(Arabidopsisthaliana)AG基因N端区域。GbMADS5基因编码蛋白序列与其它植物MADS-box蛋白序列有着较高,与裸子植物(Gymnospermae)AG基因相似最高,其中与苏铁(Cycasrevolute)同源高达91.07%。系统发育树分析显示,GbMADS5基因属于AG亚家族基因。

  • 标签: 叶籽银杏 GbMADS5 MADS-BOX基因 序列分析
  • 简介:本研究建立了套简便、行之有效水稻成熟花粉辐照诱变技术工作程序,解决了水稻成熟花粉保鲜技术难关,提出了水稻成花粉适宜诱变剂量为46Gy左右,确认了辐照花粉杂交后代产生数量性状突变为主,第三代较第二代出现更多突变性状,扩大了突变幅度,而且随着世代递增,突变性状有累加现象,大部分株系在第五代即可稳定.利用本项技术获得了批熟期提早或推迟15天以上,株高变矮或增高10cm以上、稻谷增长5mm,米长增加4.4mm,长宽比最大达4.5,千粒重较起始增减10-23g等特殊性状批新种质.本研究初步认为水稻成熟花粉辐照诱变主要是诱发DNA位点突变,同时存在隐性突变,在水稻及其它作物育种具有应用前景.

  • 标签: 水稻 成熟花粉 Γ射线 辐照诱变 杂交后代 突变效应
  • 简介:本研究吸附率、解吸率为考察指标,采用静态吸附方法筛选出纯化效果最佳LSA-21型树脂。考察各种因素对树脂吸附、解吸效果影响,优化得到动态吸附最佳工艺条件为:上柱液浓度3.12mg/mL,上样量203mL,吸附速率3BV/h,上柱液pH为6,解吸剂乙醇浓度70%,解吸剂用量180mL。在此工艺条件下,吸附率解吸率平均值分别为91.83%和91.41%,瓦松干浸膏总三萜成分纯度从9.36%提高到40.56%,因此该工艺可以有效地纯化瓦松总三萜成分。

  • 标签: 瓦松 总三萜成分 大孔吸附树脂 纯化
  • 简介:虎尾草(Chlorisvirgata)是禾本科虎尾草亚族年生草本植物,适应极强,能在恶劣盐碱化土壤上生长。本实验构建了虎尾草cDNA基因文库,随机挑选出2300个克隆,并且通过点杂交分析在NaCl胁迫下这些基因表达情况。结果表明有59个基因在NaCl胁迫下强烈表达,这些上调基因23个同时也被NaHCO3胁迫表达。这个结果暗示了NaCl逆境与NaHCO3逆境在基因表达应答机制存在明显差异。59个基因可以分成8类:能量代谢(21.70%),信号转导(5.0%),氧化逆境(13.30%),光合作用(10.0%),生长发育(5.5%),转录因子(1.67%),各种酶类00.0%)和些未知基因(28.3%)。从中选出了些上调基因进行Northern杂交分析,Northern杂交表明这些基因有些是在根或叶中表达,与点杂交结果有趋势。

  • 标签: 虎尾草 ESTS 基因表达 胁迫 上调
  • 简介:通过花生籽仁不同时期转录组测序分析,从分子水平上揭示控制花生油脂合成重要基因。本研究高油和低油花生新品系为研究对象,构建了花生籽仁早期和中后期4个转录组测序文库。通过高通量测序共获得了59236条Unigenes,其COG功能涉及了大多数生命活动,整体功能类基因最多有4730条;其中与代谢类和油脂转运相关基因有654条;Unigene参与花生代谢通路可分为126类,其中涉及生化代谢Unigene数量最多,达到了7672条,占整体32.95%;有4大类代谢与油脂相关,分别是脂肪酸生物合成,涉及基因有85条;脂肪酸生化代谢,涉及基因有145条;不饱和脂肪酸生物合成途径,涉及116条基因;亚麻酸代谢途径,涉及有138条基因。对花生籽仁两个不同发育时期差异表达基因进行分析,共得到了120多种代谢途径(passway);并且籽仁发育中后期基因表达量大部分下调,说明花生种子发育初期,各类调控脂肪酸合成基因比较活跃,而随着合成油脂调控不断继续,相关调节基因表达量下降,同时各类脂肪酸和油脂合成也渐渐变慢。研究结果为深入揭示花生籽仁发育过程中油脂合成调控相关基因及其功能提供了丰富数据资源。

  • 标签: 花生 转录组测序 油脂合成 差异表达基因
  • 简介:本研究新颖极端粗茎水稻材料R404细茎品种日本晴为亲本杂交构建F2分离群体(152个单株)为作图群体,对控制水稻茎秆粗、茎壁厚以及穗颈粗3个茎粗度相关性状QTL进行定位分析。通过QTLIciMapping分子标记作图软件分析,在水稻3、8、11以及12号染色体上分别检测到7个QTLs,其中茎粗和穗颈粗2个QTLqSDM8.1和qRDM8.1可能为同基因位点调控,茎粗和茎壁厚2个QTLqSDM3.1qSWT3.1也定位在相近位置,这2个染色体位置可能存在控制茎粗因多效基因。qSWT3.1(15.39%)、qRDM3.1(44.66%)和qSDM8.1(19.16%)在其所控制相应性状(茎粗,茎壁厚和穗颈部粗)贡献率是最大,是主效QTL。除了定位于3号染色体QTLs外,其他与粗茎性状相关QTLs均为新发现QTLs。本研究结果为粗茎QTL步精细定位奠定了基础,也为粗茎QTL应用于水稻抗倒伏品种培育种质创新提供重要基因来源,对保障国家粮食安全具有重要意义。

  • 标签: 水稻 茎粗 穗颈粗 茎壁厚 QTL定位
  • 简介:自1902年德国科学家Haberlandt提出'植物细胞全能'概念以来,无数中国学者对这理论进行了大量实验,从不同方面和层次对其进行验证和探索,取得了诸多有实践和理论意义成果,丰富和充实了植物细胞全能理论.同时,基于该理论而发展起来植物细胞离体培养技术在各方面也取得了可喜成就.本文就植物细胞全能基础理论方面的研究以及在生产实践应用作了比较系统总结.

  • 标签: 植物细胞全能性理论 中国 细胞培养 离体培养
  • 简介:在含有105个标记位点大白菜AFLP连锁图谱上,利用MAPQTL4.0软件采用区间作图方法对控制大白菜干烧心病数量性状基因位点进行QTL定位和遗传效应分析。利用离体叶片扦插方法进行干烧心病苗期鉴定,共检测到4个与抗干烧心病有关QTL位点,分布在4个连锁群上。cal-1和cal-2表现为增效加性效应,cal-3和cal-4表现为减效加性效应。4个QTL解释遗传变异范围在11.0%~58.9%之间,其中cal-4最大,cal-2次之,而cal-1最小。这为大白菜抗干烧心病分子标记辅助选择提供了依据。

  • 标签: 大白菜 干烧心病 QTL
  • 简介:本文综述了棉铃虫对转眈基因棉花抗性机制和抗性风险,重点讨论了基因策略包括转入多个杀虫基因、定向和器官特异表达、侵害诱导表达、调控表达、高杀死与低表达策略,田间策略如助棉品种轮作混植、降低化学防治经济阈值、农艺措施和庇护策略,国家宏观调控如实施分区种植管理、加强种子生产经营管理、强化抗性动态检测、严格安全评价等抗性治理策略与技术。

  • 标签: 棉铃虫转Bt基因棉花 抗性预防 治理策略
  • 简介:本研究用珍佳B(佳辐占/珍汕97B//珍汕97B回交重组自交系F11,即BC1F11)×珍汕97BF2群体,对稻米粒长、粒宽、长宽比、粒厚和垩白粒率性状进行遗传分析与QTL定位。结果表明,粒宽、长宽比、粒厚和垩白粒率均属于由多基因控制数量性状,而粒长受个主效基因控制。共检测到13个控制糙米粒长、粒宽、长宽比、粒厚和垩白粒率QTLs。其中,在第3号染色体着丝粒附近RM16-RM411区间同时控制粒长、粒宽、长宽比和粒厚性状,遗传贡献率分别为49.8%、12.6%、39.3%和5.3%;在第5号染色体着丝粒附近RM7118-RM3683区间同时控制垩白粒率、粒宽、长宽比和粒厚性状,遗传贡献率分别为43.9%、44.5%、28.0%和15.0%;同时,在RM169-RM289区间也同时控制垩白粒率、粒宽、长宽比和粒厚性状,但各性状遗传贡献率均较RM7118-RM3683区间小。

  • 标签: 水稻 数量性状基因座位 外观品质 垩白 粒形
  • 简介:随着现代分子生物学技术发展,反转录聚合酶链式反应技术在甘薯病毒检测上应用越来越广泛。采用该技术可检测出甘薯组织含量极低病毒RNA,具有灵敏度高、特异性强等优点。在本研究根据NCBIGenBank收录SPCSV病毒外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列保守区域设计了3对特异性引物,使用天根生化科技(北京)有限公司生产QuantOneStepRT-PCRkit试剂盒,针对影响扩增产物影响因素退火温度进行优化,建立了甘薯退绿矮化病毒RT-PCR检测方法。该方法使RT-PCR在管内完成,大大降低了外源物质污染RNA降解几率,可作为甘薯SPCSV病毒快速检测方法。

  • 标签: 甘薯 退绿矮化病毒 RT-PCR检测技术
  • 简介:茶树是重要叶用经济作物,但是茶树每年都要开花结实,消耗大量养分,导致茶树鲜叶产量减少和品质降低。雌蕊缺失茶树资源是天然不结实茶树品种。采用IlluminaHiSeqTM2500高通量测序技术,对雌蕊缺失茶树花花芽、花蕾、花进行转录组分析。经组装获得237484条Transcripts,取最长Transcripts作为Unigene,有182123条,将获得Unigene与Nr、Nt、Pfam、KOG/COG、Swiss-prot、KEGG、GO等七数据库进行注释,有22049条Unigene被注释上26KOG分类,注释到KEGGUnigene条数为21315,涉及pathway有130条。此外,发掘出与花器官形态建成ABCDE模型功能基因31个,这些注释信息完成为茶树花器官发育基因性别决定相关基因发掘提供了重要依据。

  • 标签: 茶树 雌蕊缺失 转录组 RNA-SEQ 基因注释