简介:目的筛选一种既提高精子转染外源DNA效率,又保持解冻后精子活力的山羊精液冷冻—解冻方法。方法应用正交设计L9(3^4),因素分别为稀释液种类、稀释比例、降温时间和解冻液,每个因素选择3个水平,检测和比较解冻后精子转染外源DNA效率和精子活力。结果所选冷冻—解冻各因素对精液转染效率影响不显著[F(8,18)=1.032,P=0.449];平衡时间对冷冻—解冻活力影响极显著[F(2,24)=9.972,P=0.001],平衡1h极显著小于平衡2h和4h的精液活力(P=0.003,P=0.000),以平衡4h最好。用筛选的冷冻—解冻方法处理精液,解冻后精子的活力极明显降低(P=0.002);生存指数降低,GOT释放量增加,菌落数减少,与鲜精相比差异显著(P=0.018;P=0.016;P=0.018);精子畸形率增加,顶体完整率降低,与鲜精相比差异不显著(P=0.494;P=0.084)。结论优化了提高精子转染外源DNA效率的山羊精液冷冻—解冻方法。
简介:由中国生理学会循环生理专业委员会和四川泸州医学院联合主办的第二届“细胞膜片钳实验技术培训班”于2012年7月8日至13日在四川泸州医学院心血管医学研究所成功举办。来自全国28个医学院、研究所和医院等50多位学员参加了培训班。本次培训班聘请了国内外在细胞膜片钳实验研究领域的知名专家、教授授课,其中包括中国生理学会循环生理专业委员会主任委员曾晓荣教授、日本德岛大学井上勋教授以及东乐科技有限公司技术总监刘振伟博士,同时还有教学与实验经验丰富的培训人员指导学员亲自进行实验操作,体验实验过程,熟悉方法和步骤。本次培训班的主要内容包括:膜片钳技术在医学领域的应用和发展趋势;离子通道的分类、结构和功能;Axon膜片钳放大器基本原理及参数设置和应用;pClamp膜片钳数据采集分析软件的使用:FundamentalsofElectrophysiology;细胞的分离准备;微管电极的制作以及电流的记录等内容。本次培训包括三天的集中授课和两天的实验操作,共计42学时,让学员对从细胞的分离准备到最终上机操作的细胞膜片钳实验的具体步骤有了感性认识。培训过程不仅包括对细胞膜片钳技术的系统理论指导,还包括对学员在实践过程中遇到的具体问题的解答。学员们普遍对此次培训班的成功举办表示满意。大家一致认为,通过此次培训,对膜片钳技术的理论知识有了系统的学习,对膜片钳实验技术操作有了更深入的了解,对相关软件的操作也有了较为熟悉的掌握。来自全国各地的学员在学习的过程中也借此契机进行了较多的学术交流,深入了了解,也为今后进一步的交流奠定了良好的基础。
简介:摘要:应用真菌特异性引物PCR测序、克隆测序和SNP质谱基因分型法,鉴定2株蝙蝠蛾幼虫活体肠道的真菌分离株(CHl和CH2)中的多种菌物。应用这2株分离株与中国被毛孢分生孢子联合侵染蝙蝠蛾幼虫,观察其协同侵染活性。结果表明这2株分离株呈现中国被毛孢的体外培养生长和显微形态特征。通用引物ITS4/5和蝙蝠蛾拟青霉特异性引物Pp4/5扩增子测序检出蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢ITS序列。扩增子克隆一测序和SNP基因分型法证实多种转换和颠换点突变基因型在2株分离株中共存。反复固体、液体培养证实蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢ITS序列共存,并非真菌间DNA片段漂移。应用子囊孢子或中国被毛孢侵染4~5龄蝙蝠蛾幼虫,幼虫染菌率为1.37%~3.52%,幼虫变僵时间为35~50d。应用2株分离株与中国被毛孢分生孢子联合侵染,幼虫变僵时间为5—8d,染菌率达55.2%(P〈0.001),侵染效能提高15~39倍。蝙蝠蛾拟青霉和多种点突变基因型冬虫夏草菌(包括中国被毛孢)在蝙蝠蛾幼虫肠道以天然真菌复合体形式共存;多种菌物组成的侵染源联合侵染蝙蝠蛾幼虫大幅度提高侵染效能,呈现多菌协同侵染的共生关系。