简介：摘要目的探讨FOS样抗原1(FOSL1)基因多态性与胃癌易感性的相关性。方法收集2014年1月至2019年1月于厦门大学附属第一医院胃肠外Ⅲ科292例(观察组)新诊断胃癌患者和215例(对照组)健康体检者的资料，外周血提取DNA，采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)检测FOSL1不同位点的基因型，并分析FOSL1多态性与胃癌易感性的关系。组间比较采用t检验；定性资料使用χ2检验；多态位点与胃癌发生风险之间的关联采用Logistic回归分析。结果与对照组比较，观察组FOSL1 rs1892901位点基因型GG频率降低(154/215比178/292，χ2＝6.240，P<0.05)，AA频率增高(7/215比28/292，χ2＝8.300，P<0.05)，差异有统计学意义；与对照组比较，观察组rs637571位点基因型GG频率增高(119/215比187/292，χ2＝3.910，P<0.05)，AA频率降低(21/215比14/292，χ2＝4.770，P<0.05)，差异有统计学意义。rs1892901位点AA基因型患胃癌风险增加[比值比(OR)＝0.32，95%可信区间(CI)：0.14～0.74，P<0.05]，GG基因型减少(OR＝1.62，95%CI：1.11～2.36，P<0.05)，差异有统计学意义；rs637571位点GG基因型患者胃癌易感性增加(OR＝0.70，95%CI：0.49～1.00，P<0.05)，AA基因型患者患癌风险降低(OR＝2.15，95%CI：1.07～4.33，P<0.05)，差异有统计学意义。调整相关因素后，rs1892901位点AA基因型仍是胃癌的易感基因(OR＝0.42，95%CI：0.11～0.83，P<0.05)，差异有统计学意义。结论FOSL1基因多态性与胃癌易感性明显相关。FOSL1 rs1892901位点AA基因型患胃癌风险增加。

简介：摘要目的分析骨髓纤维化（MF）患者RAS基因突变的分子特征及其临床特点和预后意义。方法收集2011年12月至2019年12月在我中心有二代基因测序数据的226例MF患者临床资料，回顾性分析RAS基因突变特征、与临床和实验室参数之间的关系，及对总生存（OS）期的影响。结果226例原发性骨髓纤维化（PMF）及真性红细胞增多症（PV）或原发性血小板增多症（ET）后骨髓纤维化（post-PV/ET MF）患者中，共14例（6.2%）检出RAS基因突变：NRAS突变9例（4.0%），KRAS突变8例（3.5%），NRAS及KRAS突变并存3例（1.3%）。所有NRAS突变均发生在第12-13号密码子。RAS基因突变多为亚克隆突变，常与SETBP1、SRSF2、MPL共同发生。伴RAS基因异常患者平均突变基因个数（3.36个）与无RAS基因异常组（1.77个）相比，差异有统计学意义（P<0.001）。RAS基因突变患者与无突变患者相比，外周血单核细胞水平升高（P=0.003），血小板水平减低（P=0.026），骨髓原始细胞比例升高（P=0.022），脾脏肋缘下≥10 cm患者比例更高（P=0.005）。突变组患者非常高危（VHR）染色体核型比例（18.2%，2/11）显著高于无突变组患者（2.3%，3/133）（P=0.031）。单因素分析中，NRAS基因突变的MF患者及PMF患者的OS时间较无突变患者显著缩短（P=0.001，P=0.008）。多因素分析显示，NRAS突变是影响OS的独立预后不良因素。结论RAS突变常与外周血单核细胞水平升高、血小板计数减低、骨髓原始细胞比例升高、VHR染色体核型等高危临床特征及实验室参数相关，多为发生在MF晚期的亚克隆突变。伴NRAS基因突变PMF及MF患者的OS时间显著缩短。

简介：摘要目的探讨RAS基因在甲状腺滤泡分化肿瘤中的突变及意义。方法收集2000年1月至2017年12月北京市顺义区医院207例甲状腺滤泡分化肿瘤患者的样本及临床资料，包括60例滤泡亚型甲状腺乳头状癌（FVPTC）、42例经典型甲状腺乳头状癌（CPTC）、26例滤泡性甲状腺癌（FTC）、40例滤泡性甲状腺腺瘤（FTA）和39例腺瘤样增生。应用免疫组织化学染色法检测BRAF V600E的突变情况，将FVPTC分为BRAF样（BRAF V600E突变者）和RAS样（无BRAF V600E突变者）；应用即时荧光定量聚合酶链反应法检测RAS样FVPTC、CPTC、FTC、FTA和腺瘤样增生中RAS基因的突变情况，分析比较它们之间RAS基因突变的差异及其与临床病理学特征的相关性。结果甲状腺滤泡分化良、恶性肿瘤平均年龄分别为53.2岁和47.7岁，其中男性42例，女性165例，大多数肿瘤最大径≤4 cm；恶性病变的甲状腺周围扩散少见，多数处于Ⅰ、Ⅱ期。FTC中肿瘤直径明显大于RAS样FVPTC组和CPTC组（P均<0.01）。RAS样FVPTC、CPTC和FTC三组中甲状腺周围扩散少见，但FTC组临床分期明显高于RAS样FVPTC组（P<0.01）和CPTC组（P<0.01）。即时荧光定量聚合酶链反应结果显示，RAS基因的突变率FTC组最高（61.5%），明显高于其他组（P均<0.01）；CPTC中最低，仅为4.8%，而在RAS样FVPTC、FTA和腺瘤样增生中突变率相当（15%左右）。Spearman秩相关分析结果表明，RAS基因突变与良性肿瘤（FTA和腺瘤样增生）的发病年龄、性别和肿瘤大小以及与恶性肿瘤（RAS样FVPTC、CPTC和FTC）的发病年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、甲状腺周围扩散和临床分期均无相关性。结论RAS基因突变在甲状腺滤泡分化的良、恶性肿瘤中均可发生，以FTC中最高，鉴别诊断时要结合形态及免疫组织化学以及其他分子变化综合考虑。RAS样FVPTC分子遗传学更接近于FTA和腺瘤样增生。RAS基因突变不是甲状腺疾病的预后影响因子。

简介：摘要目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因沉默对大气细颗粒物（PM2.5）染毒肝细胞（L02细胞）相关基因表达的影响。方法于2019年6至9月，根据GenBank提供的p38MAPK基因序列，设计合成3条干扰序列，退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中，将重组慢病毒载体转染L02细胞。用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）法对p38MAPK基因沉默效果进行鉴定。用浓度为50 μg/ml的PM2.5水溶物和10 μmol/L阳性对照Cr6+分别染毒L02细胞、p38MAPK基因沉默细胞24 h，同时设立空白对照组。用荧光定量PCR检测癌基因（c-fos、c-myc、k-ras）、抑癌基因（p53）和凋亡基因（Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9）的相对表达水平。结果p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK基因和蛋白表达水平较正常L02细胞明显下降（P<0.05），p38MAPK基因沉默细胞株构建成功。与空白对照组比较，PM2.5染毒L02细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平升高，抑癌基因p53表达水平下降，差异均有统计学意义（P<0.05）；与PM2.5染毒L02细胞组比较，PM2.5染毒p38MAPK基因沉默细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平下降，抑癌基因p53表达水平升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论PM2.5对L02细胞癌基因、抑癌基因和凋亡基因表达有明显影响，而p38MAPK基因沉默可抑制PM2.5对L02细胞的影响。

简介：摘要乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，严重威胁女性健康。基因突变是乳腺癌发生的重要原因，并在其发展和预后过程中发挥关键作用。笔者对乳腺癌的易感基因研究现状进行综述，并分析了新一代测序技术应用于乳腺癌基因诊断的现状与前景，希望能促进相关技术的推广和临床应用。

简介：无

简介：摘要目的分析探讨结直肠癌中4种错配修复(MMR)蛋白的表达及其临床意义，RAS、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因状态及其与4种蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学法检测634例结直肠癌组织中4种MMR蛋白的表达；对存在MMR蛋白表达缺失者进行微卫星不稳定(MSI)检测。对其中236例(含缺失组的53例)进行RAS和BRAF基因检测。计数资料组间比较采用χ2检验。结果634例中53例(8.4%)发生MMR蛋白表达缺失，Mut L同源基因1(MLH1)、PMS2、人类MutS同源蛋白2(MSH2)和人类MutS同源蛋白6(MSH6)蛋白表达缺失率分别4.4%(28/634)、4.7%(30/634)、3.3%(21/634)、3.6%(23/634)。缺失组的53例进行MSI分子检测，其中49例(92.4%)出现2～5个位点微卫星不稳定，为MSI-H。236例(含缺失组的53例)结直肠癌RAS和BRAF基因检测结果显示，BRAF基因V600E突变11例，均为微卫星稳定(pMMR)；v-Ki-ras2大鼠Kirsten肉瘤病毒基因同源基因(KRAS)基因突变109例，其中7例为错配修复基因缺陷(dMMR)；NRAS基因2号外显子检测到突变8例，均为pMMR。结论MMR蛋白表达缺失组多发生于右半结肠，组织学分化差且常伴有粘液成分，肿瘤组织间可见显著的淋巴细胞浸润，患病年龄偏低。KRAS基因状态影响MMR蛋白表达。

简介：摘要目的分析c-ROS癌基因1融合阳性肺腺癌患者的临床特征。方法选取2014年3月至2017年1月在浙江大学医学院附属第一医院进行基因检测的1 482例肺腺癌患者，根据基因突变的不同分为ROS1融合阳性组、渐变淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）融合阳性组、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突变组及3个基因突变均阴性组。另收集2017年2—12月确诊的20例ROS1阳性患者纳入ROS1阳性组。收集并比较ROS1融合阳性组与其余驱动基因突变组间患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤TNM分期、驱动基因突变、胸部CT等临床特征，连续变量比较采用Mann-Whitney检验，分类变量比较采用χ2检验。结果ROS1融合阳性患者共54例，其中男19例，女35例。ALK融合阳性患者共73例，男28例，女45例。EGFR基因突变患者共679例，男293例，女386例。3个基因突变均阴性的患者共676例。ROS1融合阳性组平均发病年龄为（54±12）岁，小于EGFR基因突变组的（60±11）岁，差异有统计学意义（z=-3.982，P<0.001），亦小于3个基因突变均阴性组的（62±10）岁，差异有统计学意义（z=-4.944，P<0.001）；ROS1融合阳性组女性患者比例（64.8%，35/54）显著高于3个基因突变均阴性的肺腺癌组（28.4%，192/676），差异有统计学意义（χ2=30.94，P<0.001）；ROS1融合阳性组不吸烟患者比例（72.2%，39/54）显著高于3个基因突变均阴性肺腺癌组（38.0%，257/676），差异有统计学意义（χ2=24.27，P<0.001）；ROS1融合和ALK融合阳性肺腺癌患者的性别、年龄、吸烟史均无统计学相关性，各型驱动基因突变腺癌亚型之间TNM分期无统计学差异。ROS1融合阳性肺腺癌在胸部CT上以周围型肺癌表现为主（71.4%，20/28），多为实性密度影（75%，21/28），其中分叶状（75.0%，21/28）和细毛刺（57.1%，16/28）是ROS1融合阳性肺腺癌的常见征象。结论c-ROS癌基因1融合在肺腺癌患者中发生率低，多见于年轻不吸烟女性患者，可以与EGFR基因突变共存。

简介：摘要目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）RAS基因突变的分子学特征及其对预后的影响。方法收集2011年12月至2018年12月新诊断且完成二代测序的776例MDS患者病例资料，回顾性分析RAS基因突变患者的临床及分子学特征，并比较不同突变状态对总生存（OS）的影响。结果共52例（6.7％）患者伴有RAS基因突变，NRAS突变38例（4.9％），KRAS突变18例（2.3％），4例（0.5％）同时伴NRAS及KRAS突变，全部NRAS突变及65％的KRAS突变位于第12、13及61号密码子。RAS基因突变与PTPN11、FLT3、U2AF1、RUNX1、WT1、ETV6及NPM1突变呈显著正相关（Q<0.05），且常为亚克隆突变。伴RAS基因突变的患者中诊断为MDS伴原始细胞增多（MDS-EB）的比例（82.7％）明显高于无RAS突变患者（35.2％）（P<0.001）。与无RAS基因突变患者相比，伴RAS基因突变患者的外周血白细胞水平和中性粒细胞水平明显升高[WBC：4.33（0.98～20.42）×109/L对2.71（0.61～21.17）×109/L，P<0.001；ANC：2.13（0.18～17.37）×109/L对1.12（0～16.00）×109/L，P<0.001]，血小板水平明显减低[48（2～430）×109/L对62（2～694）×109/L，P＝0.048]，骨髓粒系比例有升高的趋势（47％对40％，P＝0.085），骨髓原始细胞比例明显升高（7％对2％，P<0.001）。按照修订的国际预后积分系统（IPSS-R）进行预后分层，RAS基因突变患者中较高危分组（高危和极高危组）的比例显著增高（71.1％对37.9％，P<0.001）。单因素分析中，NRAS突变与更短的OS显著相关（P＝0.011），经多因素校正后，NRAS突变对OS的影响失去显著性，突变基因中仅PTPN11及SETBP1为独立的不良OS因素。结论RAS基因突变常作为亚克隆发生在MDS疾病晚期且常与转录因子及信号转导相关的突变伴随发生。RAS通路相关的PTPN11突变在MDS中为独立不良预后因素。

简介：摘要目的通过对炎症性肠病差异基因的筛选以及结直肠癌队列生存特征和表达模式的探究，为炎症相关结直肠癌的发生与发展的后续研究提供候选基因。方法从GEO数据库中选择RNA测序表达谱数据集GSE95473和GSE107597，通过常规转录组表达谱差异分析，筛选出炎症性肠病差异表达基因（DEG），利用GO数据库获取DEG的功能注释，并利用KEGG数据库进行通路富集分析。同时基于TCGA数据库进一步在结直肠癌数据集中筛选具有预后意义的基因，并评价其在结直肠肿瘤中的表达特征。结果两个数据集筛选到了共有DEGs 100个，通过主成分分析证实这些基因能够对结直肠癌肿瘤和黏膜区分良好。进一步筛选，获得ALDOB，SPINK4，REG4，IL1B，C2CD4A，CXCL8，NOS2，CXCL3等候选基因。这些基因在结直肠肿瘤中高表达，并且这些基因的高表达往往提示患者预后较好。结论ALDOB，SPINK4，REG4，IL1B，C2CD4A，CXCL8，NOS2，CXCL3可能在炎症相关结直肠癌的发生发展中发挥重要作用，有待于后续炎癌转化相关功能验证和机制探究。

简介：摘要目的分析RAS基因突变对结直肠癌肝转移行肝切除患者预后的影响。方法回顾分析北京大学肿瘤医院肝胆胰外一科2008年1月1日至2016年12月31日连续收治的545例结直肠癌肝转移行肝切除的患者资料，依据纳入和排除标准最终纳入356例，男性232例，女性124例，年龄21～83岁。比较RAS基因野生型和突变型患者的临床和随访资料。采用Kaplan-Meier法进行生存分析，比较采用log-rank检验。单因素和多因素Cox回归分析患者生存的影响因素。结果RAS基因野生型和突变型患者分别为247例和109例。RAS基因野生型患者中位生存期为74个月，突变型为30个月。RAS基因野生型患者累积生存率和累积无病生存率均优于突变型，差异有统计学意义(均P<0.05)。多因素Cox回归分析，肝转移出现间隔≤12个月(HR＝1.673，95%CI：1.016～2.637)、肝转移瘤最大直径>5 cm(HR＝1.717，95%CI：1.102～2.637)、RAS基因突变型(HR＝1.836，95%CI：1.322～2.550)是结直肠癌肝转移患者手术切除后生存的独立危险因素。结论RAS基因突变是结直肠癌肝转移患者肝切除术后生存的危险因素，RAS基因突变型患者预后更差。

简介：摘要目的构建ApcloxP/loxP＋SMAD同源物4(Smad4)loxP/loxP双转基因小鼠模拟人散发性结直肠癌，观察Smad4在结直肠癌发生发展中的作用。方法分别将Apctm1Tyj/J小鼠、Smad4tm2.1Cxd/J小鼠与C57BL/6J小鼠(均购自美国杰克逊实验室)杂交和回交转换遗传背景形成杂合子小鼠C57BL/6-ApcloxP/-/J(记为ApcloxP/-)、C57BL/6-Smad4loxP/-(记为Smad4loxP/-)，将ApcloxP/-和Smad4loxP/-小鼠杂交建系并通过聚合酶链反应(PCR)筛选出ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP小鼠。通过小鼠结肠镜分别向ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP小鼠和C57BL/6J小鼠(各12只)结直肠黏膜下注射前期构建好慢病毒LentivirusCre-IRES-Luciferase，腹腔注射荧光素酶D(D-luciferase)后在小动物活体成像系统(IVIS)下成像并通过结肠镜动态观察成瘤情况。最后对小鼠瘤灶取材行苏木精-伊红(HE)染色观察其病理改变。组间比较采用t检验。结果成功培育出ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP双转基因小鼠22只。在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生突变并形成散发性结直肠肿瘤病灶，经病理组织学证实为腺癌，可通过IVIS系统及小鼠结肠镜动态观察其情况，至12周末成瘤率33%(4/12)，C57BL/6J小鼠未观察到瘤变。两组体重分别为(22.58±1.21)、(21.36±1.01) g，比较差异无统计学意义(t＝0.892，P>0.05)；日龄分别为(63±1)、(62±1)d，差异无统计学意义(t＝0.121，P>0.05)。结论本研究构建的ApcloxP/loxP＋Smad4loxP/loxP双转基因小鼠结肠组织在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生癌变，成功模拟人散发性结直肠癌的发生过程，证实Smad4抑癌基因的条件性敲除可促进结直肠癌的发生。

简介：摘要目的探讨利用循环肿瘤DNA（ctDNA）检测小细胞肺癌（SCLC）基因突变的可行性及其在SCLC患者化疗±放疗中的预后价值。方法纳入2016年7月至2019年11月浙江省肿瘤医院胸部肿瘤内科及胸部肿瘤放疗科收治的共77例SCLC患者，男66例，女11例，中位发病年龄60岁，其中局限期（LS）患者42例，广泛期（ES）患者35例。对患者治疗前的血浆ctDNA进行二代测序（NGS）。分析比较LS和ES患者突变基因和信号通路的差异。根据检测到的体细胞突变，计算血浆肿瘤突变负荷（bTMB）。使用R软件计算bTMB的最优阈值并将患者分为高bTMB组和低bTMB组，使用log-rank检验比较高bTMB组和低bTMB组的无进展生存期（PFS）。结果77例患者中，76例患者血浆中检测到基因突变，ctDNA检测阳性率为98%。在76例患者人群中，突变频率最高的基因分别为TP53（89%）、RB1（70%）、LRP1B（34%）、CREBBP（21%）、MLL3（21%） MLL2（16%）、NOTCH1（13%）、ROS1（13%）、BRCA2（12%）和PTPRD（12%）。LS患者最常见的突变基因为：TP53（90%）、RB1（68%）、LRP1B（24%）、MLL2（22%）和BRCA2（17%）；ES患者最常见的突变基因为：TP53（89%）、RB1（71%）、LRP1B（46%）、CREBBP（31%）和MLL3（29%）。NOTCH1和CREBBP基因的突变率在ES患者中（31.4%和22.9%）显著高于LS患者（11.9%和4.8%）（均P<0.05）。信号通路分析显示，ES患者携带更多NOTCH通路基因变异。在LS患者中，高bTMB组（≥ 6.96个突变/Mb）的患者较低bTMB组（<6.96个突变/Mb）的患者PFS更长（P=0.033）；而在ES患者中未显示出这种差异。结论血浆ctDNA测序检测出与既往文献报道类似的SCLC基因突变谱，ctDNA可以作为研究SCLC基因组学的工具；ES-SCLC和LS-SCLC的基因突变频谱存在差异；bTMB在接受放化疗治疗的LS-SCLC中具有潜在的预后预测价值。

简介：摘要目的研究吡非尼酮对大鼠肾小管间质纤维化(tubulointerstitial fibrosis，TIF)的治疗作用及其对抑癌基因Dab2表达的影响。方法48只SPF级雄性SD大鼠，利用随机数字表法分为三组：对照组、模型组及吡非尼酮治疗组，每组均为16只。模型组及吡非尼酮治疗组行左侧输尿管结扎术，制备单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction，UUO)模型，复制进行性肾间质纤维化过程。治疗组予吡非尼酮250 mg/(kg·d)灌胃，对照组及模型组大鼠予等量1%羟甲基纤维素钠溶液灌胃。分别于手术后第7天及第14天处死每组大鼠各8只，取梗阻侧肾脏，行HE及Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化，实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测Dab2 mRNA表达水平。结果HE染色结果显示，对照组未显示肾纤维化，模型组大鼠显示肾间质纤维化及炎症细胞浸润，治疗组肾间质纤维化和炎症细胞浸润程度较模型组明显减轻。对照组、模型组及治疗组第7天肾间质损伤评分分别为0.650±0.015，8.826±0.017，6.120±0.022；第14天分别为0.650±0.015，9.420±0.021，6.290±1.010。Masson染色结果显示：对照组肾组织结构正常，间质无明显胶原纤维；模型组造模后，形成大量胶原纤维沉积，第14天时模型组基本形成弥漫性蓝染的胶原纤维，吡非尼酮治疗组肾间质蓝染的胶原纤维比模型组明显减少。对照组、模型组及治疗组第7天肾间质纤维化指数半定量评分分别为0.025±0.050，0.470±0.060，0.220±0.015；第14天分别为0.025±0.050，0.590±0.015，0.390±0.033。模型组大鼠肾间质损伤评分、肾间质纤维化指数半定量评分均较对照组高(P<0.05)，吡非尼酮治疗后明显改变(P<0.05)。模型组大鼠Dab2 mRNA相对表达较对照组升高(P<0.05)，治疗组大鼠Dab2 mRNA相对表达较模型组升高(P<0.05)，治疗组Dab2 mRNA相对表达较对照组亦升高明显(P<0.01)。结论吡非尼酮能够显著改善UUO大鼠肾小管间质纤维化的程度，其作用机制可能和提高大鼠肾组织Dab2的相对表达有关。

简介：摘要目的确定问号钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因(LA_0012、LA_0697和LA_4207)产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统，采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法(SPR)检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白(hCOL1/3/4/6)的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号钩端螺旋体赖株感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白，但LA_0697和LA_4207基因还含有金属离子依赖性黏附位点(MIDAS)。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白，Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-PAGE检测均显示为单一蛋白条带。ELISA结果显示rLep0697与hCOL3/6、rLep4207与hCOL1/4呈强结合。SPR结果显示rLep0697快速结合hCOL3/6但快速解离(KD值＝5.71×10-8和5.89×10-8 mol/L)，rLep4207快速并稳定结合hCOL1/4(KD值＝6.4×10-9和3.2×10-9 mol/L)。感染HUVEC和EOMA细胞时，上述vWF-A基因转录和表达水平均显著升高(P<0.05)。结论LA_0697和LA_4207基因产物可作为问号钩端螺旋体感染过程中的黏附因子。

简介：摘要：目的： 分析 术前放射治疗联合新辅助化疗对进展期胃癌患者手术情况及病灶内癌基因表达的影响。 方法：选取 2015 年 2 月 ~2017 年 2 月我院收治的进展期胃癌患者 82 例为研究对象，按治疗方法将其分为对照组及观察组，各组患者 41 例，分别采取不同手段治疗，比较两组患者治疗效果。结果：观察组患者临床效果显著优于对照组，组间数据比较存在差异，具有统计学意义。结论：在进展期胃癌患者中采取 术前放射治疗联合新辅助化疗可提高临床疗效，提升患者生活质量。

简介：摘要目的观察Notch1抑制剂(3，5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的影响及可能的作用机制。方法选取24只健康6周龄雄性SD大鼠，体质量(210±10)g，体质量范围为200～220 g，将大鼠随机分为常规组、DPN组和DAPT组，每组8只。SD大鼠适应性喂养1周后DPN组和DAPT组每只按65 mg/kg标准腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病模型，常规组腹腔注射等体积的柠檬酸钠缓冲液。3 d后测尾静脉随机血糖≥16.7 mmol/L证明STZ注射成功，经进一步检测血糖≥16.7 mmol/L并持续至实验结束。糖尿病鼠模型建立后2周予DAPT组大鼠以0.1 mg/(kg·d)的DAPT腹腔注射，连续3 d。检测全部大鼠坐骨神经传导速度、痛温觉阈值，检测Notch1、Ras同源基因家族激酶(ROCK)1、ROCK2的表达。结果DPN组7 d血糖[(17.63±0.41)mmol/L]、14 d血糖[(17.95±1.22)mmol/L]、30 d血糖[(20.81±3.21)mmol/L]和60 d血糖[(26.08±3.56)mmol/L]高于常规组[(6.35±0.72)mmol/L、(6.33±0.62)mmol/L、(6.05±0.74)mmol/L、(7.54±0.65)mmol/L]；DAPT组60 d血糖水平[(21.17±1.44)mmol/L]低于DPN组[(26.08±3.56)mmol/L]；DPN组30 d体质量[(217.61±18.35)g]、60 d体质量[(200.75±13.19)g]小于常规组[(308.25±16.72)g、(344.13±15.34)g]；DPN组60 d坐骨神经传导速度[(36.25±2.82)s]慢于常规组[(50.25±1.67)s]；DAPT组60 d坐骨神经传导速度[(40.63±3.70)m/s]快于DPN组[(36.25±2.82)m/s]；DPN组60 d热痛觉阈值[(25.50±1.60)s]高于常规组[(14.13±1.25)s]；DAPT组60 d热痛觉阈值[(17.25±1.67)s]低于DPN组[(25.50±1.60)s]，差异均有统计学意义(P<0.05)。DPN组病变髓鞘比例较常规组高，DAPT组病变髓鞘比例较DPN组低；DPN组Notch1平均免疫荧光密度较常规组显著升高，DAPT组Notch1平均免疫荧光密度较DPN组显著下降；DPN组ROCK1平均免疫荧光密度较常规组显著升高，DAPT组ROCK1平均免疫荧光密度较DPN组显著下降；DPN组ROCK2平均免疫荧光密度较常规组显著升高，DAPT组ROCK2平均免疫荧光密度较DPN组显著下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Notch1抑制剂DAPT可能通过下调ROCK对DPN产生保护作用。

简介：摘要目的分析合并结直肠癌双原发癌患者的临床病理特点，探讨合并结直肠癌双原发癌的微卫星不稳定性（MSI）及K-ras基因突变情况。方法收集2015年1月至2016年12月南京鼓楼医院经手术治疗的结直肠肿瘤患者临床病理资料，回顾性分析患者临床病理特征，采用多重荧光PCR及等位基因特异性扩增法分别检测结直肠癌组织中MSI状态及K-ras基因突变情况。结果合并结直肠癌双原发癌患者占同期收治结直肠癌的5.2%（55/1 066）。合并结直肠癌双原发癌患者性别、年龄、结直肠癌发病部位、T分期、N分期等构成比与同期收治的单发结直肠癌患者差异均无统计学意义（均P>0.05）；两者TNM分期构成比差异有统计学意义（P<0.05）。同期单发结直肠癌患者及合并结直肠癌双原发癌患者的结直肠病变部位均以直肠多见，分别为35.5%（359/1 011）和41.8%（23/55）。55例合并结直肠癌双原发癌患者中，异时性双原发癌48例，同时性双原发癌7例；其他肿瘤先发41例；结直肠癌外肿瘤以消化系统肿瘤最为常见[41.8%（23/55）]，最常见器官为胃[20%（11/55）]。与同期单发结直肠癌比，合并结直肠癌双原发癌患者的微卫星高度不稳定型（MSI-H）发生率高，差异有统计学意义（P<0.05）；K-ras基因突变率差异无统计学意义（P>0.05）。合并结直肠癌双原发癌患者中仅2例患者同时存在MSI-H状态和K-ras基因突变。结论直肠是结直肠癌患者最常见病变部位，胃是合并结直肠癌双原发癌患者的结直肠癌外肿瘤最常见器官；与单发结直肠癌患者相比，合并结直肠癌双原发癌患者存在MSI-H发生率高的风险，而K-ras基因突变发生率无明显差异。

简介：摘要目的探讨微RNA（miR）-19b-3p对胰腺癌PANC-1细胞原癌基因鼠双微体4（MDM4）表达和细胞增殖、凋亡活性的影响。方法采用脂质体转染法转染micrONrno-miR-19b-3p mimic（拟似组）、micrOFF mmu-miR-19b-3p inhibitor（阻遏组）和Lipofectamine 2000转染试剂（阴性组）至人胰腺癌PANC-1细胞，并以未特殊处理正常生长的PANC-1细胞作为空白组，采用荧光显微镜观察各组细胞转染是否成功，使用荧光实时定量PCR法检测微RNA-19b-3p转录水平以判断转染效率。转染24、48、72 h采用MTT法检测各组细胞增殖活性，采用荧光实时定量PCR法检测细胞内微RNA-19b-3p、MDM4含量，转染72 h采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后PANC-1细胞凋亡情况。转染72 h采用免疫印迹法检测各组PANC-1细胞MDM4蛋白表达水平。结果转染后48 h 4组均有明显绿色荧光，微RNA-19b-3p转染PANC-1细胞转染效率为72.1%。转染24、48、72 h时拟似组PANC-1细胞增殖活性、微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平都高于空白组、阴性组和阻遏组（均P<0.05），阻遏组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平低于空白组、阴性组和拟似组（均P<0.05），空白组和阴性组细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达水平差异无统计学意义（均P>0.05）。空白组、阴性组、拟似组和阻遏组4组PANC-1细胞增殖活性和微RNA-19b-3p mRNA、FL-MDM4、S-MDM4表达均与时间呈现正相关（细胞增殖活性r=0.629、0.582、0.524、0.472，微RNA-19b-3p mRNA表达水平r=0.449、0.475、0.501、0.399，FL-MDM4表达水平r=0.504、0.423、0.447、0.431，S-MDM4表达水平r=0.472、0.428、0.414、0.408，均P<0.05）。转染72 h时拟似组细胞凋亡水平低于空白组、阴性组、阻遏组[（2.02±0.48）%比（3.48±0.63）%、（3.52±0.52）%、（8.23±0.82）%，均P<0.05]，阻遏组细胞凋亡水平高于空白组、阴性组和拟似组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。转染72 h拟似组MDM4蛋白表达水平高于空白组、阴性组和阻遏组[（1.162±0.114）比（0.749±0.126）、（0.663±0.137）、（0.347±0.092），均P<0.05]，阻遏组MDM4蛋白表达水平低于空白组和阴性组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论微RNA-19b-3p可能通过影响MDM4表达，进而影响p53基因活性，促进胰腺癌的增殖，微RNA-19b-3p可能成为治疗胰腺癌新的靶点。

简介：摘要目的研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）与抑癌基因p53（p53）突变型在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达情况，探讨HIF-1α和p53在PTC组织中的意义及其与临床病理参数的关系。方法选取2016年3月至2018年3月盘锦辽油宝石花医院外科手术切除并存档于病理科的原发性PTC组织60例及癌旁正常甲状腺组织20例，采用免疫组织化学法及实时定量基因扩增荧光检测法（qPCR）检测两组HIF-1α与p53蛋白及mRNA水平，分析二者相关性及其与临床参数之间的相关性。结果PTC组织中HIF-1α和p53蛋白阳性表达均高于癌旁正常甲状腺组织[66.7%（40/60）比6/20、70.0%（42/60）比6/20]（P<0.05），且HIF-1α和p53表达呈正相关（r＝0.849，P＝0.001）。PTC组织中HIF-1α和p53 mRNA水平高于癌旁正常甲状腺组织（P<0.05），且二者表达呈正相关（r＝0.594，P＝0.002）。PTC组织中HIF-1α和p53蛋白表达强度分别与临床分期（r＝0.386，P＝0.003；r＝0.463，P<0.001）和淋巴结转移（r＝0.365，P＝0.004、r＝0.365，P＝0.004）呈正相关，与患者性别、年龄及肿瘤大小无关（P>0.05）。结论HIF-1α和p53在PTC中表达上调，与临床分期和淋巴结转移呈正相关，二者可能在PTC的发生、发展和转移中协同发挥促进作用。