简介：目的：探讨野生型ｐ５３基因抑制膀胱癌生长的作用及其机理，方法：将野生型ｐ５３基是组腺病毒载体转染入膀胱癌细胞ＨＴＢ９，观察细胞生长曲线，细胞周期变化及ＤＮＡ合成情况，应用ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ２１ｍＲＮＡ水平，应用免疫组化法检测ｐ２１蛋白表达水平。结果：野生型ｐ５３基因导入可抑制ＨＴＢ９细胞生长和ＤＮＡ合成（ＡｄＣＭＶｐ５３），流式细胞仪显示，ＤＮＡ合成前期或静止静的细胞比例增高，而合成期细胞比例下降，另外，ＡｄＣＭＶｐ５３还提高了ｐ２１的ｍＲＮＡ和蛋白水平，结论：腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因转梁对于膀胱可能是很有前途的基因治疗方法。

简介：目的建立肝癌耐药细胞株，并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立耐药BEL-7404人肝癌细胞株，并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌于细胞相关细胞学特性进行检测，用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与MTT法测耐药倍数；单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、“球囊”细胞培养实验。结果耐药BEL-7404人肝癌细胞与亲本细胞相似，呈上皮样生长方式，但其中梭状细胞略多，耐药倍数为292倍；生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本BEL-7404人肝癌细胞，且倍增时间增加；耐药BEL-7404肝癌细胞克隆形成率、“球囊”细胞形成率均明显低于其亲本BEL-7404人肝癌细胞。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株，但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显。

简介：摘要目的探讨生物强度电场对人表皮细胞株HaCaT和小鼠表皮细胞运动性及CD9表达的调节作用。方法采用实验研究方法。取对数生长期人永生化表皮细胞株HaCaT细胞及分离自16只1～3 d龄雌雄不拘BALB/c小鼠的原代表皮细胞进行实验。将HaCaT细胞分为200 mV/mm电场强度处理3 h的加电组和模拟处理的假电组，在活细胞工作站中观察细胞迁移(运动方向、位移速度、轨迹速度，加电组样本数为46、假电组样本数为34)及排列，免疫荧光法检测CD9蛋白的分布及表达。将HaCaT细胞与小鼠表皮细胞均分为假电组(模拟处理)和进行相应电场强度处理3 h的50 mV/mm组、100 mV/mm组、200 mV/mm组、400 mV/mm组，将HaCaT细胞与小鼠表皮细胞均分为未行处理的空白对照组和用200 mV/mm电场强度分别处理相应时间点的1 h组、3 h组、6 h组，蛋白质印迹法检测CD9的蛋白表达(样本数为3)。对数据行Mann-Whitney U检验、单因素方差分析、独立样本t检验及LSD检验。结果处理3 h内，加电组HaCaT细胞明显趋向负极移动，假电组HaCaT细胞围绕原点随机运动；与假电组比较，加电组HaCaT细胞方向性显著增强，位移速度、轨迹速度显著加快(Z＝-3.975、-6.052、-6.299，P<0.01)。处理3 h后，加电组HaCaT细胞长轴与电场方向垂直，假电组HaCaT细胞呈任意取向排列。处理3 h后，加电组HaCaT细胞CD9蛋白(均位于细胞膜上)相对表达量明显低于假电组(t＝4.527，P<0.01)。处理3 h后，假电组、50 mV/mm组、100 mV/mm组、200 mV/mm组、400 mV/mm组HaCaT细胞、小鼠表皮细胞CD9蛋白表达量分别为0.332±0.021、0.283±0.032、0.254±0.020、0.231±0.041、0.212±0.031与0.565±0.021、0.453±0.022、0.389±0.020、0.338±0.021、0.233±0.011。对于2种细胞而言，与假电组比较，电场处理4组细胞CD9蛋白表达量均明显降低(P<0.01)；与50 mV/mm组比较，另外3个电场强度处理组细胞CD9蛋白表达量均明显降低(P<0.01)；与100 mV/mm组比较，200 mV/mm组、400 mV/mm组细胞CD9蛋白表达量均明显降低(P<0.01)；与200 mV/mm组比较，400 mV/mm组细胞CD9蛋白表达量明显降低(P<0.01)。空白对照组、1 h组、3 h组、6 h组HaCaT细胞、小鼠表皮细胞CD9蛋白表达量分别为0.962±0.031、0.784±0.020、0.531±0.021、0.409±0.011与0.963±0.031、0.872±0.031、0.778±0.040、0.591±0.041。对于2种细胞而言，与空白对照组比较，1 h组、3 h组、6 h组细胞CD9蛋白表达量均明显降低(P<0.01)；与1 h组比较，3 h组、6 h组细胞CD9蛋白表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01)；与3 h组比，6 h组细胞CD9蛋白表达量明显降低(P<0.01)。结论生物强度电场可使HaCaT细胞发生定向迁移和排列，可下调HaCaT细胞和小鼠表皮细胞中CD9的表达，且呈电场强度与处理时间依赖性。

简介：目的对北京市肿瘤研究所及本实验动物学部保存的$180进行了克隆培养，根据克隆细胞的腹水生长特性，从中选出8株克隆，对不同克隆$180细胞的特性进行研究。方法免疫组化法测不同克隆细胞的蛋白质分布，流式细胞仪测定不同克隆细胞的DNA含量，扫描电镜观察克隆细胞表面结构，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测克隆细胞的电泳图谱。结果其中3株克隆从uJ见腹水之日起，腹水即为血性；1株微显血性；4株在接种腹腔7日内腹水无血性。扫描电镜观察6株克隆细胞表面结构，各具特点，有所不同。流式细胞仪测定6株不同S180克隆细胞DNA含量，分别为8．5，9．3，7．9，8．5，8．6，8．3pg。免疫组化染色显示不同克隆与11种抗体反应有所不同，一旦与某抗体反应阳性，则阳性细胞比率均在97％以上。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定克隆细胞s1H10及S2D9的电泳图谱，S1HIO克隆细胞有33条带，S2D9克隆细胞有30条带。结论8株克隆细胞各具特点。

简介：目的检测正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株GnT-V的mRNA和蛋白质的表达水平。方法体外培养胃癌细胞株BGC823、SGC7901、MKN45和正常胃黏膜细胞株GES-1，应用RT-PCR、Real-timePCR、Westemblot等技术检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞GnT-VmRNA和蛋白质表达的水平。结果检测显示3株胃癌细胞（BGC823、SGC7901、MKN45）均表达CmT-VmRNA，其中BGC823、SGC7901呈高表达，MKN45则低表达GnT-V（P〈0．05）。各细胞相对正常对照组GnT-V的相对表达倍数分别为18．25，13．36，9．25。Westernblot结果显示3株胃癌细胞均不同程度的GnT-V蛋白表达，而正常对照组不表达GnT-V蛋白。结论胃癌细胞不同程度表达GnT-V，各细胞中以BGC823表达量最高，SGC7901表达量居中，MKN45呈低表达，提示GnT-V可能对于胃癌的发生发展有一定的影响。

简介：目的:建立高转移肝癌细胞株，研究其肿瘤干细胞生物学特征,为靶向人肝癌干细胞治疗提供有价值的细胞模型。方法:肝癌细胞系Bel7402接种裸鼠皮下，成瘤后，取小鼠肺部转移灶，通过机械分离法，获取肺部肝转移细胞，体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠，获得稳定肺转移肝癌细胞株Bel7402-V13。采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定Be17402-V13中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术分析亲本Bel7402和Bel7402-V13中肿瘤干细胞标志物ESA的表达情况，分选Bel7402和Bel7402-V13中ESA+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验。结果:建立高转移Bel7402-V13细胞株,Bel7402-V13细胞无血清悬浮培养7d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。与Bel7402中ESA+细胞相比，流式分析显示干细胞标志物[3人比例高转移丑<；17402-V13显著提高5.67倍（17.6±0.4￥33.1±1.5)。3(；17402-V13中ESA+细胞具有更强的自我更新能力[成球率:（94.8±7.5)%vs(52.3±6.9)%，P<0.01]，侵袭能力提高1.51倍（397.7±79.4v262.0±40.1，P<0.01)，耐药能力也显著增强（IC5。：0.286v0.196，P<0.01)，ESA+细胞Bel7402-V13在裸鼠皮下接种2xl02个细胞3月即可致瘤（3/6)，而接种2xl02个ESA+细胞Bel7402细胞3月才能致瘤（1/6)。结论:获得高转移肝癌细胞株Be17402-V13，伴随ESA+细胞增加，其体内外功能显著增强，为肝癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型。

简介：目的观察茶多酚对人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)杀伤肿瘤细胞活性的影响和诱导人胃癌细胞株(SGC-7901)凋亡和死亡的作用.方法在体外用不同浓度的茶多酚与人CIK细胞和SGC-7901细胞株共同作用,然后测定人CIK细胞杀瘤活性和对肿瘤细胞的作用.用不同浓度的茶多酚分别与培养的SGC-7901细胞株作用1～8小时后,弃含有茶多酚的培养液再继续培养24小时,然后测定其死亡和凋亡数,用CIK细胞作对照组.结果茶多酚浓度400mg·L-1,作用CIK细胞4小时后能明显增强CIK细胞的杀伤肿瘤细胞活性,与未诱导组和其它浓度组相比P＜0.01;CIK细胞对经茶多酚处理后的SGC-7901细胞株杀伤活性也明显高于对照组P＜0.01.各种浓度的茶多酚分别与CIK和SGC-7901细胞作用1～8小时,弃诱导液再继续培养24小时后,均能诱导其死亡和凋亡,在茶多酚浓度400mg·L-1、诱导时间4小时时最明显;同一浓度的茶多酚诱导SGC-7901死亡和凋亡率明显高于CIK细胞对照组.结论茶多酚在一定浓度时能明显提高CIK细胞对肿瘤的杀伤活性;经茶多酚处理的SGC-7901细胞株更易被CIK细胞杀伤.用一定的方式在一定浓度和时间内茶多酚能诱导SGC-7901死亡和凋亡,有效浓度内对人CIK细胞无细胞毒性.

简介：摘要目的探讨棕榈酸（PA）是否可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。方法将小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞分为正常对照组、PA组（1.0 mmol/L）、PA+凋亡抑制剂（Z-VAD-FMK）组（5 μmol/L）、PA+铁死亡抑制剂（Fer-1）组（5 μmol/L）、PA+坏死抑制剂（Nec-1）组（5 μmol/L），每组设置3个平行组。采用CCK8法检测细胞存活率，电镜观察细胞超微结构改变，FerroOrange试剂盒检测细胞内Fe2+水平，丙二醛（MDA）试剂盒检测MDA水平，流式法检测活性氧（ROS）水平，实时荧光定量PCR法检测凋亡基因半胱氨酸蛋白酶3（caspase3）、坏死基因受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3（RIPK3）、铁死亡相关基因长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、花生四烯酸-15-脂加氧酶（ALOX15）、前列腺素内过氧化物合酶2（Ptgs2）、铁蛋白重链（FTH）、铁蛋白轻链（FTL）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的mRNA表达水平，Western blotting法检测活化型caspase3（cleaved caspase3）、RIPK3、ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白表达水平。两组间比较采用t检验。结果与PA组相比，PA+Z-VAD-FMK组、PA+Fer-1组和PA+Nec-1组MIN6的存活率均更高（P<0.01）。PA组MIN6细胞电镜下可见凋亡、坏死、及铁死亡相关的形态学特征。与对照组相比，PA组MIN6细胞内Fe2+相对荧光强度、MDA水平、总ROS均更高；caspase3、RIPK3、ACSL4、Ptgs2、ALOX15的mRNA相对表达量均更高，FTH和GPX4的mRNA相对表达量均更低；cleaved caspase3、RIPK3、ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白相对表达量均更高（均P<0.01）。与PA组相比，PA+Fer-1组Fe2+相对荧光强度、MDA水平、总ROS均更低；ACSL4、Ptgs2、ALOX15的mRNA相对表达量均更低，FTH和GPX4的mRNA相对表达量均更高；ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白相对表达量均更低（均P<0.01）。结论PA可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。

简介：

简介：目的：从细胞水平探讨柔红霉素（DNR）和阿糖胞苷（Ara-C）联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）（DAG方案）能否提高抗肿瘤效果,并研究相应的作用机制。方法：以白血病细胞株HL-60为实验对象,分为DA方案组、DAG方案组和对照组3组。对照组不加任何药物;DA方案组为DNR加Ara-C;DAG方案组为DNR加Ara-C和G-CSF（G-CSF先于化疗药物前24h加入）。药物作用24、48h后收集细胞,对各组分别进行细胞计数、细胞形态观察,并采用MTT法检测不同组别细胞株的生长抑制率,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡比例、细胞坏死比例。另对HL-60细胞单用G-CSF作用24h后进行细胞周期分析,并行实时定量PCR以检测细胞内Ara-C相关代谢酶基因表达情况的变化。结果：化疗药物作用后,相对于对照组,DAG方案组与DA方案组细胞数量明显减少,形态显示有明显细胞核固缩现象,且可见凋亡小体形成。DAG方案组与DA方案组相比,前者细胞生长抑制率更高（作用48h,为78.3%比72.1%）（P〈0.01）。细胞凋亡分析显示,与DA方案组相比,DAG作用24h后早期凋亡百分率增高（9.43%比7.52%）,且差异有统计学意义（P〈0.05）;作用48h后,2组早期凋亡比例均下降。与对照组相比,DAG方案组与DA方案组细胞坏死百分率在药物作用24h和48h后均显著增高（DAG方案组分别为44.16%和57.59%;DA方案组分别为41.54%和58.22%）,但2组间差异无统计学意义。相对于作用前,G-CSF单独作用HL-6024h,细胞周期分析显示,S期细胞比例增高[（39.91±1.16）%比（31.42±1.47）%]（P〈0.05）;实时定量PCR检测,细胞内Ara-C代谢酶中脱氧胞苷激酶（DCK）的基因表达增高,5′-核苷酸酶（5′-NT）基因表达减少,差异有统计学意义（P〈0.05）,而CDD的基因表达差异无统计学意义。结论：G-CSF联合DA方案能显著提高对HL-60细胞株生长的抑制率,其作用机制主要为促肿瘤细胞坏死,轻度促细胞凋�

简介：三氧化二砷(As2O3)是人们观念中的剧毒物砒霜中的有效成分.它既是一种致癌剂又有一定有益的生物学作用.本实验研究证实,砷剂在非细胞毒性剂量下能降低化疗药物阿霉素(ADM)对多耐药(multidrugresistance,MDR)肿瘤细胞株K562/ADM细胞的IC50(细胞抑制率达50%时化疗药物的浓度),表明三氧化二砷具有逆转人红白血病细胞株K562/ADM细胞MDR作用.

简介：摘要目的研究青藤碱（Sinomenine，SIN）对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响。方法用不同浓度SIN（0、62.5、625、1250、2500ug/ml）分别处理SiHa细胞后，用倒置显微镜观察细胞形态学改变，分别于24小时、48小时后用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞生长情况，并用统计软件SPSS16.0对结果进行分析。结果青藤碱对SiHa细胞增殖有抑制作用，且随着药物浓度的增加其抑制作用增加，与对照组0ug/ml比较，差异有显著性。结论青藤碱能显著抑制宫颈癌SiHa细胞增殖。

简介：摘要目的构建B-7.1基因真核表达载体并导入CAK-1肾细胞癌细胞表达，为进一步研究基因的功能做材料准备。方法采用RT-PCR方法，以正常肝脏组织cDNA为模板，扩增B-7.1基因全长读码框架，并构建到真核表达载体pCDNA3.1中，将其导入CAK-1肾细胞瘤细胞，对转染后的细胞进行RT-PCR和Westernblot分析。结果经过克隆测序结果证实，我们成功将B-7.1读码框架插入真核表达载体pCDNA3.1的相应位点，并且，与pCDNA3空载体转染对照细胞相比，pCDNA3-B-7载体转染的CAK-1细胞中B-7基因无论是mRNA水平还是蛋白水平均有明显升高。结论B-7.1转基因细胞株的成功构建和检测，为深入研究B-7.1蛋白的生物学功能奠定了材料基础。

简介：目的:探讨采用HepG2细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法.方法:采用皮下注射HepG2细胞(1.2×106)建立裸鼠肝癌模型,观察种植细胞后14天内裸鼠的死亡率,并在14天时活杀动物测定瘤体重量、直径及血清AFP浓度.结果:该法遣模成功率达100%.结论:该方法操作简便,周期短,成功率高等可作为肝癌模型应用.

简介：摘要目的探讨建立肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株鸡胚种植瘤模型的可行性。方法采用药物连续诱导法，构建肝癌索拉非尼耐药细胞株；利用鸡胚动物模型，建立索拉非尼耐药细胞株的移植瘤；初步探讨耐药细胞株鸡胚种植瘤模型成瘤特点，分析相关靶点和信号通路的表达。采用t检验。结果筛选到索拉非尼耐药的HepG2细胞(sHepG2)半数抑制浓度(IC50)为(88.7±7.6) μmol/ml，显著高于HepG2(t＝16.416，P<0.01)；建立HepG2与sHepG2细胞株鸡胚种植瘤模型各5例，成功种植成瘤率为70%[(3+4)/(5+5)]；种植瘤肿瘤鲜重HepG2组[(0.093 2±0.012 2) g]低于sHepG2组[(0.141 1±0.019 4) g，t＝3.709，P<0.05]；成瘤组织蛋白质印迹法(Western blot)检测，sHepG2组磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)(t＝9.336，P<0.01)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt/p-PKB)(t＝7.123，P<0.01)表达显著高于HepG2组，人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)(t＝6.164，P<0.01)、成纤维细胞生长因子受体1 (FGFR1)(t＝6.297，P<0.01)表达显著低于HepG2组。结论体外建立索拉非尼诱导的HepG2耐药细胞株，并在鸡胚移植瘤动物模型中成瘤，移植瘤生长以及瘤组织相关靶点与信号通路的差异性表明，鸡胚种植瘤模型可作为肝细胞癌索拉非尼耐药的在体研究方法。

简介：目的探索胃癌细胞miRNA表达情况并确定MKN-45胃癌细胞株侧群（sidepopulation,SP）细胞中的关键miRNA。方法利用荧光活化的细胞分选技术及Hoechst33342荧光染料标记胃癌侧群细胞,用miRNA基因芯片检测胃癌侧群细胞及主群细胞的表达情况,根据miRNA差异表达情况及生物信息学预测结果筛查关键miRNA。结果设定miRNA表达差异在1.5倍及以上为差异显著,发现侧群细胞和主群细胞相比,表达升高和降低的miRNA各有34条;经实时RT-PCR验证及生物信息学预测发现,表达下调的hsa-miR-3175和hsa-miR-203及表达上调的hsa-miR-130a,hsa-miR-324-5p,hsa-miR-34a和hsa-miR-25-star在维持及调控侧群细胞的特性方面具有重要作用。结论胃癌细胞MKN-45侧群细胞中差异表达的miRNA为hsa-miR-3175,hsa-miR-203,hsa-miR-130a,hsa-miR-324-5p,hsa-miR-34a和hsa-miR-25-star,但是否在维持及调控侧群细胞的特性方面具有重要作用还需进一步研究证实。

简介：图5　5×10-7M的As2O3作用于MGC-803细胞24h后,5×10-7、10-6M的As2O3处理12～48h的MGC-803细胞经Fcm检测,10-6M浓度的As2O3分别处理培养生长良好的MGC-803细胞6、12、24、48h

简介：目的通过检测苦参素诱导胃癌细胞株MKN-45凋亡的作用，探讨其治疗胃癌的作用机制。方法体外培养人中分化胃癌细胞株MKN-45，应用MTT法检测苦参素对细胞生长的抑制作用，并计算50％抑制浓度(IC50)；将不同浓度梯度的苦参素与细胞株作用后，应用流式细胞仪(ANEXIN-V标记)及TUNEL检测细胞凋亡情况。结果浓度为lnunol／L的苦参素与细胞株作用30min，流式细胞仪即可检测出细胞凋亡水平升高，但无统计学差异(P>0．05)，lmmol／L作用2d，流式细胞仪及TLINEL均可检测到细胞凋亡水平显著性升高(P<0．05)。结论苦参素在体外可明显抑制胃癌细胞株MKN-45的生长。苦参素诱导细胞凋亡可能是其治疗胃癌的机制之一；在细胞凋亡的早期检测中应用ANEXIN-V标记流式细胞仪检测的灵敏度较高。

简介：

简介：目的通过基因芯片筛查，以期发现胰腺癌新的纯合子缺失基因。方法应用Affymetrix公司的GeneChip^RHumanMapping100KMappingmicroarray芯片，检测AsPC-1、BxPC-S等共21株人类胰腺癌细胞株的纯合子缺失区域，筛选这些区域中可能与胰腺癌发生和发展有关的基因，用PCR扩增方法验证。结果21株胰腺癌细胞共计发现60个纯合子缺失区域，以9p21．S出现的频率最高，达47．6％（10／21）。其中25个区域无已知基因，其余区域含有1～4个候选基因。选择26个可能与胰腺癌发生发展有关的基因，行42个PCR反应，35个反应无条带出现，证实为纯合性缺失，芯片的准确度为83．3％。结论应用高解析度的单核苷酸多态性基因芯片检测到胰腺癌新的纯合子缺失位点，为今后进一步发现新的胰腺癌抑癌基因提供线索。