简介:【摘要】自噬作为一种维持自身更新和功能的重要方式,在多种生命活动中发挥着重要作用。在癌症发生发展过程中,细胞自噬被认为是一把“双刃剑”,在抑制癌症发生发展的同时,也会加速癌症的进展。原发性肝癌(HCC)是一种高复发、低预后的恶性肿瘤,至今仍缺乏有效的防治手段。具有抗肝癌作用的中药能够增加肝癌细胞的自噬,或者诱导其发生自噬,从而起到抗肝癌作用。抑或是激活细胞内的保护性细胞自噬,维持肿瘤的存活,降低抗癌药物的作用。本课题对肝癌进展的自噬机制及中药活性成分调控机制进行研究。
简介:摘要目的初步探究自噬核心蛋白Atg101对白色脂肪细胞衰老的影响。方法构建Atg101敲减的3T3-L1成熟脂肪细胞模型,验证Atg101对自噬相关蛋白LC3和p62蛋白的影响。构建并分析人类皮下脂肪组织的RNA-seq数据库,基于Atg101与其他基因FPKM值的Pearson相关系数(R2>0.4, P<0.050)预测共表达基因集并进行KEGG和Reactome富集分析。构建年轻小鼠(8周龄)和老龄小鼠(18个月龄)模型,实时定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测Atg101在腹股沟皮下脂肪和内脏脂肪中的表达水平。进一步通过RNA-seq、Western印迹和RT-qPCR检测白色脂肪细胞衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype, SASP)、细胞周期及线粒体稳态相关基因的表达差异,分析Atg101敲减对脂肪细胞衰老的影响。结果在3T3-L1脂肪细胞敲减Atg101后自噬相关蛋白LC3-Ⅱ显著降低,p62蛋白明显上调,提示细胞自噬受损。KEGG富集分析发现Atg101共表达基因集主要富集于自噬和衰老相关通路;Reactome富集分析发现该基因集与多个细胞周期信号通路相关。RT-qPCR和Western印迹证实Atg101在老龄小鼠皮下脂肪组织中mRNA和蛋白表达水平均下调,内脏脂肪组织蛋白水平也显著降低。最后,白色脂肪细胞模型中Atg101敲减后SASP相关基因表达上调,细胞周期特异性基因表达受限并且细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p16、p21表达显著增高,线粒体稳态调节基因表达也受到抑制。结论Atg101可能通过影响自噬活动调控白色脂肪细胞衰老,从而破坏线粒体稳态。
简介:摘要目的探讨自噬对于风湿性心脏病的瓣膜间质细胞(VICs)生物学特征改变以及增殖能力的影响。方法使用肝素诱导人主动脉瓣膜间质细胞(购自上海赛百慷生物技术股份有限公司)向肌成纤维细胞分化,而后使用自噬抑制剂LY294002(15 μmol/L)进行干预,将细胞分为对照组、抑制剂组、诱导组、实验组。使用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、碱性磷酸酶(ALP)、Beclin1、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平;采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)分析自噬对4组细胞增殖的影响。结果蛋白印记结果显示对照组的ALP和α-SMA蛋白(0.827±0.123、0.716±0.141)显著低于诱导组(1.384±0.165、1.315±0.223),差异有统计学意义(t=4.669,P<0.01、t=3.929,P<0.05);对照组Beclin1和LC3-Ⅱ(0.807±0.182、0.392±0.150)显著低于诱导组(1.271±0.067、1.404±0.018),差异有统计学意义(t=4.131,P<0.05、t=11.535,P<0.01);诱导组的ALP和α-SMA蛋白(1.385±0.165、1.447±0.014)显著高于实验组(0.939±0.189、0.907±0.324),差异有统计学意义(t=2.882,P<0.05)。CCK-8细胞增殖实验结果显示各组VICs细胞的细胞活力差异有统计学意义(F=545.843,P<0.01,η2=0.986),对照组细胞活力显著高于诱导组,差异有统计学意义(t=29.753,P<0.01,d=1.101);实验组细胞活力也显著高于诱导组,差异有统计学意义(t=14.034,P<0.01,d=0.878)。结论自噬促进风湿性心脏病瓣膜间质细胞分化,同时抑制其细胞活性。
简介: 【摘要】 目的 观察高糖状态下大鼠胃平滑肌细胞自噬对早期凋亡影响。方法 体外培养原代大鼠胃平滑肌细胞,分为Con组,HG组,Con+3-MA组,HG +3-MA组,Con+雷帕霉素组,HG +雷帕霉素组,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞ATP含量。结果 细胞早期凋亡率Con+雷帕霉素(48h)组低于HG+雷帕霉素(48h)组p﹤0.05;Con+3-MA(48h)组高于Con+3-MA(24h)组p﹤0.05,HG+3-MA(48h)组低于HG+3-MA(24h)组p﹤0.01,HG+3-MA(48h)组低于Con+3-MA(48h)组p﹤0.01;ATP含量HG(24h)组高于Con(24h)组p﹤0.05。结论 高糖状态下大鼠胃平滑肌细胞自噬通过保障能量供应促进早期凋亡的发生。
简介:摘要目的分析亚砷酸钠(NaAsO2)致人肝星状细胞(LX-2细胞)纤维化及自噬相关的DNA甲基化位点,筛选与纤维化及自噬相关的特异性甲基化基因。方法采用DNA甲基化芯片Illumina Infinium Methylation EPIC BeadChips(850K甲基化芯片)对LX-2细胞(对照组)及NaAsO2干预(低、中、高剂量组:终浓度分别为5、10、15 μmol/L NaAsO2,干预48 h)致LX-2细胞纤维化及自噬模型进行全基因组DNA检测,寻找差异甲基化位点。对筛选出的差异甲基化基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析,了解基因功能。结果高剂量组细胞纤维化及自噬模型构建成功。850K甲基化芯片检测结果显示,高剂量组与对照组间存在25 817个显著差异甲基化位点,其中高甲基化位点12 083个、低甲基化位点13 734个。GO功能富集分析显示,差异甲基化基因参与的分子功能主要包括蛋白结合、离子结合、催化活性、酶结合。KEGG信号通路富集分析显示,差异甲基化基因参与的通路主要包括代谢通路、癌症通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、内吞作用、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路。进一步在启动子区,筛选出11个与纤维化相关的差异甲基化基因和29个与自噬相关的差异甲基化基因。结论NaAsO2诱导LX-2细胞纤维化及自噬过程中存在大量差异甲基化位点,筛选出与纤维化及自噬相关的特异性甲基化基因。
简介:摘要噬血细胞综合征(HPS)又称噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH),其中继发于风湿性疾病的HLH亦称为巨噬细胞活化综合征(MAS)。HLH是细胞毒T细胞和单核-巨噬细胞系统过度激活,临床上以持续发热、肝脾肿大、全血细胞减少及骨髓、肝、脾、淋巴结组织出现噬血现象为特征的综合征。MAS是风湿性疾病的高危并发症,需要多学科密切合作。为提高临床医师对MAS的认识,规范MAS的临床诊治实践,中华医学会风湿病学分会组织国内相关专家制定了本规范,旨在提高MAS的诊治水平,改善患者预后。
简介:本文以具有特殊基团的小分子,合成了具有自催化活性的聚氨酯胶黏剂,并研究了其用量对初始粘度,固化时间的影响,发现其活性不随时间变化,具有永久催化性能,对合成单组分湿固化聚氨酯提供了新的思路。
简介:摘要:内置电流互感器的计量终端,在计量终端的安装、更换、校准、检修等情况下,都需要对主回路的接头进行拆装操作。