简介:白玉蜗牛的蛋白腺、肝脏、肌肉、血液经pH为7.4的磷酸缓冲液抽提,80%饱和硫酸铵沉淀粗分离,QSepharoseHP强阴离子交换色谱及SuperdexG-75葡聚糖凝胶色谱分离得到白玉蜗牛各组织的凝集素(Achatinafulicassp.Lectin,AFL).血细胞凝集实验显示:AFL对兔血红细胞具有高凝集活性,其最小凝集质量浓度为0.065μg/mL;热处理15min后不同组织提取的AFL热稳定性不同,其中血液AFL在60℃处理后仍然具有较好的凝集活性.不同糖与不同组织提取的AFL对兔血红细胞的凝集抑制作用有明显差异,揭示了不同组织AFL可能与不同糖存在特异性结合.
简介:摘要迈瑞BC-2300血细胞分析仪是采用电阻抗血细胞计数原理(库尔特原理)对白细胞、红细胞、血小板进行计数和分类,当定量吸取等渗电解质溶液稀释的细胞之后,就被送到分析仪的检测单元,检测小孔两侧有一对正负电极,连接恒流电源,由于细胞具有不良导体的特性,稀释细胞悬液中的细胞在恒定负压的作用下,通过检测小孔的时候,使小孔感应区内电阻增高,引起瞬间电压变化形成脉冲信号,脉冲数量越多,细胞数量越多,脉冲振幅越高细胞体积越大,由此得出血液中细胞的数量和体积值。当悬液中细胞有凝集时就会发生堵孔,引起分析仪故障,无法完成细胞计数和分类。有微小的凝集时有可能两个细胞同时通过微孔,就会产生重合损失现象,使白细胞、红细胞、血小板计数结果偏低,红细胞、血小板三个平均值异常,红细胞体积分布宽度、血小板体积分布宽度异常。
简介:摘要目的研究红桂木凝集素(ALL)对小鼠的免疫调节作用。方法首先,在无菌条件下提取Balb/c小鼠骨髓细胞,分离单个核细胞,以重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)协同诱导下培养,培养至第六天,添加TNF-a或者ALL继续培养两天。CCK-8法检测细胞增殖;倒置显微镜观察细胞生长变化;ELISA法测培养上清中IL-12、IFN-γ的分泌水平。其次,小鼠皮内注射OVA和/或ALL;两周后断尾取血,酶联免疫夹心法(ELISA)检测小鼠血清中OVA特异性IgG的浓度。结果ALL能显著促进小鼠骨髓来源树突状细胞(BmDC)的增殖;并促进BmDC分泌细胞因子IL-12、IFN-γ;但不能增强OVA在小鼠体内产生特异性抗体的量。结论ALL在细胞免疫中具有很好的促进BmDC成熟及增殖的作用,但不能增强小鼠对OVA的特异性体液免疫应答。
简介:对我国云南昆明相思子进行了分离纯化及特性研究,相思子经稀酸浸泡,抽提,硫酸铵分级沉淀,酸化Sepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseFF阴离子交换层析,分离到两种毒素成分P1、P2和一种凝集素P3。通过SDS-PAGE测定分子量P1、P2,分别为68Kd、62Kd,P3为129Kd;亚基分子量P1为36Kd、33Kd、31Kd,P2为35Kd、29Kd,P3为39Kd、37Kd、31Kd;P1、P2、P3的等电点分别为6.9、6.2-6.3、5.3;中性糖含量分别为9.4%、3.3%、10.5%;凝集兔红细胞的最小凝集浓度分别为19.0μg/ml、2.5μg/ml、0.3μg/ml;对小鼠腹腔注射LD50分别为25.8μg/ml、2.4μg/ml、1.2mg/kg。
简介:摘要目的探讨血常规中冷凝集素的测定方法及意义。方法对30例冷凝集素标本在室温常规测定,37℃温箱孵育30分钟后测定比较血细胞结果并做不同温度下肉眼观察及涂片显微镜检查进行分析。结果对两次测定结果进行分析,两次测定过程变化程度由大到小变化MCH、MCHC、RBC、HCT、MCV和WBC,两测定变化差异具有统计学意义(P<0.05)。血浆与O型脐血RBC混匀后在4℃、37℃下均无聚集。30例标本冷凝集素效价检测结果平均效价(1.070.8)与正常对照30例平均效价(1.03.5)差异有统计学意义P<0.05。所有标本的血浆与健康成人O型RBC混合后,在4℃的温度环境下聚集,37℃的温度环境下解聚;血浆与O型脐血RBC混合后,在4℃和37℃的环境下均无聚集。结论联合MCH≥35g/L和仪器报警信息、冷凝集素试验、血清学、抗体特异性鉴定等方法共同检测血常规标本中冷凝集素有重要意义,对受冷凝集素影响的血常规标本必须置37℃温箱孵育30min消除冷凝集素影响后进行重新测定才能发出检验报告。
简介:半乳糖凝集素(galectin)-3是galectin家族的重要成员之一,称为Mac-2抗原.其是一个相对分子质量为26000、与β-半乳糖苷结合的蛋白,能通过糖识别域与细胞表面的糖蛋白或糖脂结合,参与多种生理和病理过程.galectin-3主要存在于细胞质中,也可存在正常细胞、肿瘤组织中,其调节机制,尚不十分清楚.近年研究发现,galectin-3作为炎性反应的重要介质,在心肌重构和心力衰竭的病理发展过程中有重要作用,心力衰竭患者血浆galectin-3水平表达越高,越易进展为心力衰竭恶化,住院率与病死率也越高.2010年,美国食品与药物管理局批准了galectin-3的临床应用.
简介:泥蚶肌肉提取液经硫酸铵二步分级沉淀后,再经DEAE-Sepharose(FastFlow)离子交换和SephacrylS-200-HR分子筛层析,从中分离纯化得到泥蚶肌肉凝集素.经测定,该凝集素分子量约为238kDa,为单个亚基的蛋白质,其相对分子量为60kDa,分子中含3.27%的糖.在氨基酸组成中,谷氨酸(Glu)含量最高,其次是丝氨酸(Ser)和天门冬氨酸(Asp).泥蚶肌肉凝集素对人和动物红细胞均有凝集作用,其中对兔的红细跑的凝集活性最高.该凝集素对兔的红细胞的凝集活性不被测试的10种浓度为200mmol·L^-1的糖所抑制.pH6.0~7.0时具有较强活性;热稳定性较高,在30-50℃的温度范围内对兔红细胞的凝集仍保持原有活性,60℃以后活力下降;凝集活性依赖于Ca^2+.
简介:摘要目的2011年6月3日本溪一幼儿园发生食物中毒事件,共有25名幼儿、6名老师发病,均与食用芸豆(俗称一点红芸豆)有关,为了快速准确查明中毒原因,以预防发生类似食物中毒,本实验室应用微量凝集法对幼儿园留样炖芸豆,炒芸豆丝,患者呕吐物进行红细胞凝集素含量检测。方法在实验室检测过程中,应用了微量凝集检测红细胞凝集素的方法,并与相关性对照试验进行比较。结果在剩余炖芸豆,炒芸豆丝样品,5份呕吐物中均检出大量红细胞凝集素,而加热彻低的对照物中未检出。结论本起食物中毒的原因是食用芸豆(一点红)未经彻底加热,加工方式不当,毒素未被彻底破坏造成;结论微量凝集检测红细胞凝集素方法,在菜豆食物中毒事件检测实际应用中快捷、准确、方便、实用。
简介:摘要目的探究树突状细胞相关的C型凝集素-1(Dectin-1)在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法C56BL/6雄性小鼠60只,随机数字表法分为假手术组、肾缺血再灌注损伤(RIRI)组、生理盐水组、昆布多糖(LAM)低剂量组(20 mg/kg)、LAM中剂量组(40 mg/kg)、LAM高剂量组(80 mg/kg)。采集小鼠血液标本,测定血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红(HE)染色评估各组小鼠肾组织病理学改变;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡数量;定时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测白细胞介素(IL)-1β、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)的mRNA水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核细胞翻译启始子2α(p-eIF2α)/真核细胞翻译启始子2α(eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白水平。组间比较采用t检验。结果RIRI组小鼠BUN及Cr水平明显高于假手术组(Cr 157.23±15.90比15.97±0.70,t=23.963,P<0.05;BUN 16.66±0.87比4.34±0.49,t=28.217,P<0.05),LAM组小鼠BUN及Cr水平明显低于假手术组(Cr 123.70±9.66比103.33±3.95比79.90±4.04比157.23±15.90,t=6.653、7.159、12.861,P值均<0.05;BUN 11.56±0.80比9.37±0.81比7.13±0.63比16.66±0.87,t=5.427、13.593、34.028,P值均<0.05),差异均有统计学意义;LAM组小鼠凋亡细胞明显低于RIRI组(14.44±1.91比40.89±4.53,t=10.137,P<0.05);LAM组小鼠IL-1β、Caspase-1、NLRP3、ASC的信使RNA(mRNA)水平明显低于RIRI组,差异有统计学意义(IL-1β为2.56±0.09比4.98±0.44,t=7.932,P<0.05;Caspase-1为1.77±0.12比4.00±0.22,t=12.160,P<0.05;NLRP3为2.43±0.28比4.71±0.28,t=16.474,P<0.05;ASC为1.99±0.16比3.14±0.17,t=15.977,P<0.05);LAM组小鼠GRP78、p-eIF2α/eIF2α、CHOP蛋白水平明显低于RIRI组,差异均有统计学意义(GRP78为0.472±0.026比1.215±0.073,t=26.501,P<0.05;eIF2α/p-eIF2α为0.697±0.016比0.871±0.028,t=9.877,P<0.05;0.621±0.035比1.086±0.115,t=5.419,P<0.05)。结论Dectin-1拮抗剂Laminarin可减轻小鼠肾缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡、焦亡及内质网应激有关。
简介:摘要凝集素Tachylectin-2是从鲎属日本马蹄蟹(Tachypleustridentatus)血细胞大颗粒中分离出来的,其具有236个氨基酸的蛋白质。Tachylectin-2具有五个结合位点,它能特异性地结合NAG、NDG等结构相似的配体,其单个多肽链中包含五个结合位点的特性,强烈地表明该结构具有与碳水化合物结合的特性,可以与病原体表面特异性识别。通过DiscoveryStudio和modeler等手段对tachylectin-2的三维结构进行预测,并验证其与具某些包含N-乙酰基的多糖的配体具有严格的特异性。基于此进一步探究其生物学活性与药物分子设计。
简介:摘要目的探讨半乳糖凝集素-1(Galectin-1)在神经母细胞瘤(NB)组织中的表达以及下调该基因对细胞增殖和侵袭能力的影响。方法选取2010年1月至2018年1月在潍坊医学院附属益都中心医院儿内科初次治疗且资料完整的NB患儿62例,采用免疫组织化学法检测患儿NB组织中Galectin-1的蛋白表达。培养NB细胞株SH-SY5Y,分为siRNA-Gal1组(转染Galectin-1干扰序列siRNA-Gal1)、siRNA-NC组(转染阴性对照序列siRNA-NC)和空白组(不作任何处理),采用实时荧光定量PCR法检测3组Galectin-1的表达,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测3组细胞的增殖活性,Transwell法检测3组细胞的迁移和侵袭力,Western blot法检测3组Galectin-1、上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。结果62例患儿组织中,Galectin-1蛋白阳性表达率为69.35%,且在国际神经母细胞瘤分期系统分期Ⅲ~Ⅳ期、危险度分层高危组及发生骨转移的患儿NB组织中Galectin-1蛋白阳性表达率(78.57%、78.05%、84.00%)较Ⅰ~Ⅱ和Ⅳs期、低中危组、无骨转移者(50.00%、52.38%、59.46%)高,差异均有统计学意义(均P<0.05);siRNA-Gal1组与siRNA-NC组和空白组相比,细胞中Galectin-1 mRNA(0.23±0.06、1.04±0.05、1.00±0.08)和蛋白表达量(0.23±0.05、0.86±0.06、0.84±0.05)均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);siRNA-Gal1组24 h、48 h、72 h和96 h时的细胞吸光度值均低于siRNA-NC组和空白组,差异均有统计学意义(均P<0.05);siRNA-Gal1组与siRNA-NC组和空白组比较,细胞迁移能力(101.55±5.56、137.24±5.14、132.76±7.46)和侵袭能力(78.21±5.08、114.46±7.31、120.06±6.47)均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.001);siRNA-Gal1组与siRNA-NC组和空白组比较,Vimentin蛋白表达量(0.24±0.03、0.69±0.07、0.70±0.06)均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);而E-cadherin蛋白表达量(0.77±0.09、0.29±0.05、0.33±0.04)均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Galectin-1蛋白在NB组织中阳性表达率为69.35%,可能参与了NB的恶性化过程,沉默Galectin-1的基因表达可抑制NB细胞的增殖、迁移和侵袭力,其机制可能与抑制上皮-间质转化过程有关。