简介：摘要目的构建miR-7-1启动子核心序列的真核表达载体，并初步探讨其意义。方法根据5’端缺失实验原理，设计引物，PCR法分别扩增含不同长度启动子序列和相同miR-7-1成熟体序列的产物；纯化、经KPNI和XHOI双酶切后将它们分别亚克隆入pGL3.0-Basic真核表达载体，并进行酶切及测序鉴定；将三个构建成功的pGL3.0-miR-7载体（分别命名为p-1189-miR-7，p-1731-miR-7，p-2192-miR-7）体外瞬时转染小鼠乳腺癌4T1细胞；用Real-timePCR检测各组中miR-7成熟体的表达水平；CCK-8法检测细胞生长的变化；最后，利用TRANSFAC数据库预测结合miR-7-1启动子核心序列的潜在转录因子。结果酶切和测序验证成功构建了p-1189-miR-7、p-1731-miR-7、p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体；与表达载体p-1189-miR-7、p-1731-miR-7转染组相比，表达载体p-2192-miR-7瞬时转染4T1细胞后可有效表达miR-7成熟体，并显著抑制4T1细胞的体外生长（p＜0.05），提示miR-7启动子序列-1593位点到-2024位点为核心序列；最后，预测结果显示NK2-同源盒-5（NK2-Homebox-5，NKX2-5）和肝细胞核因子4（hepatocytenuclearfactor4homeobox，HNF-4）可能是结合该核心序列的转录因子。结论成功构建了p-1189-miR-7，p-1731-miR-7，p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体，并筛选到miR-7-1启动子的核心序列（-1593位点到-2024位点），为后续深入研究miR-7-1在乳腺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础。

简介：目的：构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α（EF-1α）,测定其对体外蛋白翻译的影响。方法：通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果：测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论：从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。

简介：太原市采取中心城区帮扶薄弱县区,如迎泽区帮扶娄烦县,杏花岭区帮扶阳曲县,万柏林区帮扶古交市。园所帮扶为太原市各省级示范幼儿园、五星级幼儿园就近帮扶两所薄弱幼儿园。使县域学前教育质量得到整体提升。根据山西省太原市帮扶方案精神,我区采取了'全覆盖、重指导、促提高'的帮扶方法,建立了以16所五星级幼儿园为龙头的帮扶组,采取一带三至四的方式,实现了以大带小、以强带弱的发展共同体,努力缩

简介：在冯骥才先生《俗世奇人》这本书中，塑造了很多个个性鲜明的角色形象，其中，我印象最深刻的是《刘道元活出殡》中的主人公刘道元了。

简介：老婆下班回家,往沙发上一坐就一个劲儿叹气,问她也不理,看样子很伤心。我不忍心,就关了电脑起身去做饭。饭做好后,老婆依然闷不吭声地,端起碗,三下五除二就吃完了,之后,她拿纸擦了下嘴巴,突然笑嘻嘻地说了句：＂哈哈,同事教的这招可真管用!明天继续!＂

简介：增强思想政治理论课的吸引力和感染力,提升大学生思想政治教育质量和效果,必须把真学、真懂、真信、真用作为思想政治理论课建设的总目标,并将这一目标贯彻到教育教学全过程和各环节。同时,要从世界观、人生观、价值观和理想信念、道德修养、创新创业等方面,着力培养大学生真学、真懂、真信、真用的思想品质。

简介：“妈妈，我都快饿死了！”这是我放学回来的第一句话。妈妈说：“你先吃块饼干吧。”我便拿出饼干在楼下的空地上边玩边吃。突然，我发现一只蚂蚁正在拖我掉在地上的饼干渣儿。蚂蚁虽小，心倒不小呀!我很感兴趣，便目不转睛地盯住它。

简介：我的老爸老妈各有一部手机，一个黑色，一个白色，都非常好看。我可以用它给同学和朋友们打电话，很方便。手机的功能也非常多，有好多的游戏、能QQ聊天、拍漂亮的照片，我还可以用它做网上作业，非常好用。可是现在，我有点不喜欢它了。不单单是因为手机看久了对眼睛不好，主要是老爸老妈每天一有时间就看手机，玩微信、抢红包、刷微愤，每天都看到深夜还不睡觉。每当我写完作业，他们就让我看电视，也不像以前那样陪我聊天。老妈还因为每天熬夜看手机把眼睛都看i不了，去医院看医生，现在还在滴眼药呢。

简介：听说＂真语文＂要在南昌搞活动,就想着一定要去看一眼,自己才刚刚得到这个消息就向学生们宣传了一番,希望已经从教的各位能争取这个机会去听听示范课。学生问,你不来吗？明天是黄厚江老师的课,听说他的课上得很好。是啊,就是冲着黄厚江老师的课,才念了好久。自己的那天课也满堂,好在院里领导和同事的大力支持,3月31日终于得以成行。知道黄厚江老师,是三年前的一次偶然,

简介：冬天来了!冬天来了丨北风＂呼呼＂地刮起来了……小朋友,你眼中的北风是什么样的呢？快来写一写吧!

简介：我看到白蝴蝶在菜叶上产卵，就拿起木棍追赶白蝴蝶。白蝴蝶慌乱地在菜地间飞来飞去，就是不离开。

简介：有时圆圆像玉盘，有时弯弯像小船，有时缺口像镰刀。大家都夸月亮真漂亮，她乐得哈哈笑。笑出了满天的星星。

简介：

简介：《庄子》作为中国道家思想的代表性著作，从审美的角度对“真”进行了系统的阐释，提出“法天贵真”的命题，将“真”作为人生与艺术的最高境界——“真”美之境。书中对“真”的美学阐释与庄子所处时代有着密切的关联，只有回到历史语境下，才能真正理解“真”美之境的思想内涵。

简介：儿童作文的“失真”现象一直广为诟病。从历史性的角度分析儿童作文失真的原因主要是儿童在作文中表现的是成人的认识而非自己的认识。儿童作文“真实性”的追求必须强调和把握以自我为中心、以情绪为标尺、以幻想为色彩的特点，进而提升整个作文教学的水平。

简介：摘要当钱理群教授提出“告别教育”的时候,另一种声音却让我振奋真语文。我们确实需要回归到真语文的路上来,因为我们已经离开得太远。本文将结合自身的教学经验，围绕真语文进行阐述。

简介：[文题展示]阅读下面的材料,按要求作文。(60分)天下万物,水最重要。无水,万物不生;缺水,万物不灵。水可贵,水的性格更可贵:障之,就停一停;启之,就行一行。人在社会上,难免会磕磕碰碰。因而,人就应学学水的性格。既要学水那种受阻时停一停以积蓄能量的做派,也要学水那种被绊时静一静以保持头脑清醒的风度,还要学水那种在神不在形,在行不在言的灵气,等等。

简介：能屈能伸的意思是能弯曲也能伸直，指人根据环境变化的需要既能忍受委屈和挫折，又能挺直腰板去施展抱负，这样的人是令人敬佩的英雄。小小鸡蛋也想当英雄，来看看它能屈能伸的本领吧。

简介：市里要举办一次著名画展，很多收藏家都受邀带着自己心爱的收藏品前往参加。因为那些收藏品很珍贵，主办方为每份收藏品都单独买了保险。

简介：人识道理,行要礼数。家事父母,院事先生。定身端坐,笼袖徐行。拱手正身,朴实语事。专心看字,断句慢读。聚志把笔,书字圆净。廉于自育,乐于燠贫。奢不可纵,欲不可穷。去华务实,前哲所同。以侈致丧,以德见钦。俭者廉本,廉者行先。汝曹可勉,传于子孙。